利用双T-DNA载体系统培育无选择标记转基因大豆

利用PCR和Southern杂交检测了161株转△^6-脂肪酸脱氢酶基因（D6D）的T1代植株，初步筛选出只含有功能基因（D6D）而不含有筛选标记基因（bar）的转基因大豆植株9株，为获得富含γ-亚麻酸但不含选择标记基因的转基因大豆奠定了基础，并为转基因大豆的安全性种植提供了保障。同时对无标记基因的转基因植株进行了叶片涂抹除草剂验证，探讨了叶片涂抹除草剂结合目的基因PCR检测筛选无选择标记转基因植株的可行性。     

以农杆菌为介导花生遗传转化研究

应用花生丛生芽再生体系，以农杆菌为介导将含有几丁质酶和β－1，3－葡聚糖酶抗病基因的植物双价表达载体pCGII转入花生品种泉花10号和金花1012，获得转基因植株，并已通过PCR和Southern blot鉴定，研究表明，侵染时间以5－15min的效果较好，侵染时间过长不利于提高转化率；0－1d预培养对基因转化有利，预培养2d可使转化率下降。     

草菇gpd启动子的克隆及序列分析

根据已报道的gpd启动子的序列设计合成了一对引物,以草菇菌丝的基因组DNA为模板,采用PCR扩增的方法克隆出一条长1367bp的DNA特异片段gpd-vv。gpd-vv序列用Promoter Scan Ⅱ和Promoter Predictions软件进行分析,结果表明,其序列上有6个核心启动子区,而且除了具有一般启动子的CAAT-box、TATA-box等基本顺式作用元件外,还含有几个重要的元件如G-box,GC-motif,CTrich-motif等。经Tfsitescan Service分析,gpd-vv序列还包含多个转录因子的结合位点,包括GCR1,GCN4,AFT1,Repressor of CAR1等。      

高效银耳芽孢遗传转化体系的建立

【目的】建立PEG介导的高效银耳（Tremella fuciformis）芽孢遗传转化体系。【方法】采用PEG介导的原生质体法把表达质粒pAN7-1（含有构巢曲霉gpd-An 启动子和潮霉素抗性基因hph）和pLg-hph（含香菇gpd-Le启动子和hph基因）转化进银耳芽孢的细胞中;采用夹层法在含50 µg•ml-1潮霉素的筛选培养基中初筛银耳芽孢假定转化子,之后转接于潮霉素含量为100 µg•ml-1的PDA平板上进行第2次筛选。【结果】PEG4000浓度为25%时介导的银耳芽孢原生质体初转化率最高;pLg-hph假定转化子经过PCR鉴定及Southern 杂交验证,结果表明hph基因能有效整合进银耳芽孢的基因组中,其转化率为110个/µg DNA。而pAN7-1转化子经过PCR鉴定及Southern 杂交验证,结果表明只有部分转化子基因组中整合了hph基因,其转化率只有9个/µg DNA。银耳芽孢转化子在PDSA培养基中继代5次后仍检测到hph基因的存在,表明外源基因hph能在银耳芽孢继代中稳定遗传。【结论】25%的PEG4000能高效介导银耳原生质体的转化;香菇gpd-Le启动子是银耳芽孢表达外源hph基因的强启动子;外源hph基因能够在银耳芽孢继代培养中稳定遗传。     

基因枪法转化甘蔗胚性愈伤组织获得转基因甘蔗白化苗

采用ＪＱ－７００型高速基因枪，以ＮＰＴⅡ基因为选择标记基因，以抗菌肽Ｄ基因为目的基因，设２５ｍｍ和３５ｍｍ２种火药套管，长短２种容器室，一次和两次轰击共８种处理组合，对甘蔗胚性愈伤组织进行轰击转化．结果２５ｍｍ火药套管短容器室二次轰击和３５ｍｍ火药套管短容器室二次轰击的２种处理组合，胚性愈伤组织经过连续３代筛选后在选择分化培养基中共长出１２株转基因甘蔗白化苗     

农杆菌介导的甘蔗遗传转化研究

选用在组织培养过程中能够产生分泌较多酚类物质的甘蔗基因型福农８６／１７为材料．以幼叶切段为外植体，采用叶盘法与土壤根癌农杆菌菌珠ＬＢＡ４４０４（ｐＡＬ４４０４：：ＰＴＤ１）菌液并培养。外植体设预培养１天、３天、５天、７天和１０天五种时间，农杆菌设稀释１０倍和２０倍两种浓度，共１０种处理组合，共培养４８小时。结果预培养５天，农杆菌稀释１０倍和２０倍两种处理组合的外植体．在含卡那霉素３００ｍｇ／Ｌ的选择诱导和选择继代培养基中诱导并形成抗性愈伤组织。     

重组多功能木聚糖酶酶解条件的优化

重组多功能木聚糖酶(recombinant multi-functional xylanase,RMFXase)是以草菇为表达载体,具有多种酶活力的新型酶。为揭示该酶与底物的作用规律,同时为转基因酶的应用提供基础数据,该文利用重组多功能木聚糖酶水解南方特色的甘蔗加工废弃物生产低聚木糖,通过响应面法建立以重组多功能木聚糖酶质量浓度、底物质量浓度和酶解时间为控制因素的反应动力学方程组,从而推导得到酶解最佳工艺参数。试验并通过高效液相色谱法法,监测反应过程中产物的动态变化,分析产物的生成规律。结果表明,通过响应面法推导出符合连续式酶解反应器的最佳酶解工艺参数为:加酶量900 U/mL、底物质量浓度110 mg/mL、反应时间80 min。该条件下酶解木聚糖含量为54.7%的蔗渣半纤维素,得到的低聚木糖DP值达到3,酶解率达到23.94%。酶解过程中重组多功能木聚糖酶表现出高内切-β-1,4-木聚糖活力,优先降解大分子木聚糖,后期产物主要以木二糖和木三糖为主,且底物纯度越高,底物利用率越高。     

甘蔗F_1代高糖无性系的选择策略探讨

对甘蔗 F_1代群体糖分性状的遗传相关、遗传进度和约束指数研究表明,在甘蔗 F_1代,根据田间锤度和株高来选择高糖无性系是行之有效的.应用约束指数对田间锤度进行选择,而对丛蔗茎重进行约束,可望获得理想的选择效果.从不同遗传相关程度的育种群体中分离选择高产高糖个体是可能的.     

海藻糖合酶基因的克隆及转化甘蔗的研究

从提子菌灰树花的菌丝体中提取总ＲＮＡ,并纯化出ｍＲＮＡ,经ＲＴ－ＰＣＲ扩增得到一长约２．２ｋｂ的片段,经测序,其全长２１９９ｂｐ,包括起始密码和终止密码;随后将此片段插入植物表达载体ｐＢＩ１２１的３５Ｓ启动子和ＮＯＳ终止子之间,构建了一植物表达载体（ｐＢＴ）,又将此片段加上ｕｂｉ－Ｌ启动子和ＮＯＳ终止子构建了另一植物表达载体（ｐＵＢＴ）,然后通过基因枪法分别用植物表达载体ｐＢＴ和ｐＵＢＴ转化甘蔗,