基因枪法转化甘蔗胚性愈伤组织获得转基因甘蔗白化苗

采用ＪＱ－７００型高速基因枪，以ＮＰＴⅡ基因为选择标记基因，以抗菌肽Ｄ基因为目的基因，设２５ｍｍ和３５ｍｍ２种火药套管，长短２种容器室，一次和两次轰击共８种处理组合，对甘蔗胚性愈伤组织进行轰击转化。结果２５ｍｍ火药套管·短容器室·二次轰击和３５ｍｍ火药套管·短容器室·二次轰击的２种处理组合，胚性愈伤组织经过连续３代筛选后在选择分化培养基中共长出１２株转基因甘蔗白化苗。     

基因枪法转化粳稻胚性愈伤组织获得转基因植株

用PDS-1000/He型基因枪将抗除草剂基因转入水稻的胚性愈伤组织中，获得了转基因水稻植株。通过报告基因gus的瞬间表达研究，优化了基因枪法转化水稻的各种参数。结果表明：DNA金弹到靶细胞的距离为9cm，每皿轰击2次时，愈伤组织的瞬间表达效率高达90%，经X-Gluc染色，每块愈伤组织的蓝点可达100-200个，转基因植株经gus基因的组织化学分析、BASTA除草剂叶片涂布和PCR检测，初步证明外源基因巳整合达到水稻基因组中，并得以表达。     

基因枪法导入Bar基因转化小麦幼胚的研究——抗性愈伤组织与再生植株的遗传转化

在前文研究基础上 ,轰击的 2 80 4个幼胚经 L - PPT筛选后共获得 2 5 9个抗性愈伤 ,对其中 2 0 0个抗性愈伤组织和再生的 32个植株 GU S gene的表达进行组织化学检测 ,以及再生植株的 PCR检测。研究结果表明 ,有 4 5个抗性愈伤组织呈 GUS阳性。32株再生植株中获得 4个抗性株系 ,经 X- Gluc染色 ,在花药中检测到 GU S基因表达 ,PCR检测也呈阳性 ,而在对照和其它再生植株中未发现 GU S和 BAR基因表达     

转化棉花胚性愈伤可以有效缩短转基因周期

棉花的生长季节长 ,生长期温度较高 ,生长季节遭受的病虫害也较多。采用杂交育种方法可以培育抗性品种 ,但受抗性资源本身的抗性强弱限制。分子生物学的发展促进了各种生物之间的基因交流 ,可以将动物、微生物中分离出的有用基因转入植物中 ,获得全新的性状。转基因抗虫棉的大面积推广是生物技术育种的典型例证。尽管可以使用花粉管通道法将外源基因导入棉花[1 ] ,但农杆菌介导仍然是最有效的一种转基因方法 ,而且转入的基因多是单拷贝插入 ,便于育种利用。可是目前采用的农杆菌介导转化棉花的方法多是以下胚轴为起始材料[2 ] ,需要周期长 ,…     

CrylAb基因转化甘蔗及转基因抗虫植株的获得

构建玉米UBI启动子驱动Bt CrylAb基因的高效植物表达载体pUBTB．通过农杆菌介导法导人甘蔗愈伤组织,经过除草剂PPT三次连续筛选,共获得67株抗性植株,经PCR扩增检测,得到22株阳性植株,并对其进行RT—PCR检测,证明外源基因已经成功整合到其中的15株甘蔗基因组中,且得到了有效的表达。     

CrylAb基因转化甘蔗及转基因抗虫植株的获得

构建玉米UBI启动子驱动Bt CrylAb基因的高效植物表达载体pUBTB．通过农杆菌介导法导人甘蔗愈伤组织,经过除草剂PPT三次连续筛选,共获得67株抗性植株,经PCR扩增检测,得到22株阳性植株,并对其进行RT—PCR检测,证明外源基因已经成功整合到其中的15株甘蔗基因组中,且得到了有效的表达。     

基因枪法获得转基因小麦植株

 利用适用于禾谷类作物的表达载体 pGU4ABBar,采用基因枪法 ,将人工合成的苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因cryIa导入小麦品种扬麦 15 8,经PCR和Southernblot鉴定 ,证明获得 4株导入cryIa基因的小麦转基因植株 ,转化率约为 0 .7% ,并通过Westernblot鉴定检测到了目的蛋白的表达。     

基因枪法导入Bar基因转化春小麦幼胚的研究——影响转化的主要因素

利用基因枪法将抗除草剂 Bar基因导入春小麦东农 774 2 ,IE4 7和辽 10。在本试验条件下以培养 2 0～ 2 2 d的幼胚为受体 ,在 80 ︼g·枪金粉量和 6 cm的轰击距离下的基因枪转化效果最佳。     

基因枪法获得GNA转基因小麦植株的研究

 以小麦品种京 411作为基因枪转化的靶材料 ,取其未成熟胚诱导愈伤组织 ,经过 10 d左右培养后 ,用含有雪花莲凝集素 (Galanthus nivalis agglutinin ,GNA)和 bar基因的质粒 p BI12 1- 2轰击 80 0个胚性愈伤组织 ,在含有4mg/ L Basta溶液的培养基上进行筛选 ,分化及生根培养 ,获得 6 7棵再生植株。田间涂抹 Basta溶液 (5 0、75 m g/ L)检测和接麦蚜实验 ,提取转基因植株基因组 DNA,用扩增 GNA基因的引物经 PCR扩增 Southern杂交 ,结果表明利用基因枪转化已从 T2 代获得了 8株含有编码 bar/ GNA基因的转基因植株。     

农杆菌介导转化愈伤组织获得抗除草剂转基因玉米植株

对4个玉米基因型Q31×Z31、Q31×Z3、Z3、B73胚性愈伤组织进行农杆菌介导基因转化,根据Gus基因表达水平,研究了影响农杆菌介导遗传转化玉米愈伤组织的因素。结果表明,在选用的玉米基因型中,不同基因型转化效率存在显著差异,其中Q31×Z31、Q31×Z3、B73转化效率较高,Z3较低。农杆菌菌液浓度（OD600）为0．4～0．6、侵染时间为10min、23℃暗培养3d是较佳转化条件。通过农杆菌介导遗传转化,获得再生玉米植株,并对再生植株离体叶片进行除草剂抗性检测,发现转基因再生植株叶片可以抵抗200mg／L Basra。     

用基因枪法将Bt杀虫基因导入水稻愈伤组织的研究

从水稻成熟胚诱导出的愈伤组织经继代培养后可以产生大量的胚性愈伤组织。本研究采用基因枪法转化上述胚性愈伤组织 ,在附加羧苄青霉素 (5 0 0 μg· m L-1)和卡那霉素 (5 0 μg·m L-1)的选择培养基上进行抗性愈伤组织的筛选 ,在附加羧苄青霉素 (5 0 0 μg· m L-1)和卡那霉素 (2 5 μg· m L-1)的分化培养基上诱导抗性芽。GUS酶活性检测和对基因组 DNA作 PCR检测结果均为阳性 ,证明外源目的基因 (Bt)已在寒地水稻抗性愈伤组织中整合并表达。抗性再生植株的 GUS酶活性及 PCR检测正在进行中     

以基因枪法转化日本结缕草获得转基因植株

将含有DREB1A和gus基因的双基因载体质粒包裹在金粉上,以基因枪轰击日本结缕草胚性愈伤组织,以gus基因的瞬时表达研究日本结缕草基因枪转化参数.结果表明, 在1 100 psi压力下6 cm的轰击距离、每皿轰击2次的转化效果最好,而金粉和质粒用量对转化效率影响不显著;经过筛选和再生培养,检测到gus基因的稳定表达,并获得日本结缕草潮霉素抗性株系,PCR-Southern杂交证实外源DREB1A基因已整合到日本结缕草基因组中.      

农杆菌介导的AtMYB118基因转化橡胶树易碎胚性愈伤组织体系优化

[目的]采用正交设计L25(56)优化农杆菌介导的AtMYB118基因对橡胶树易碎胚性愈伤组织的遗传转化体系,为橡胶树品种遗传改良提供参考.[方法]以75.0 mg/L卡那霉素筛选经过转化的愈伤组织;采用GUS瞬时表达检测方法评价6个因素即预培养时间、农杆菌菌液浓度(OD600)、乙酰丁香酮(AS)浓度、侵染时间、共培养温度和共培养时间对遗传转化的影响.[结果]6个因素显著影响橡胶树长期培养的易碎胚性愈伤组织的转化频率,易碎胚性愈伤组织遗传转化优化条件为:预培养0d,菌液OD600为0.7,侵染时间7 min,共培养时间5d,AS 200 μmol/L,共培养温度25℃.在此优化条件下可获得最高转化频率.经过4~6个月的筛选,获得17个GUS染色阳性的易碎愈伤组织系.经PCR和反转录PCR分析转化愈伤组织,进一步证实uidA、nptⅡ、AtMYB118基因已被整合到愈伤组织基因组中并表达.培养获得1539个胚状体,其中164个为转基因胚状体,转化频率为10.6%;最终获得4株转AtMYB118基因植株.[结论]优化获得可行有效的橡胶树易碎胚性愈伤组织遗传转化体系,可为其品种遗传改良提供技术支持.     

荔枝胚性愈伤组织基因枪转化系统的建立

荔枝是我国南方重要热带亚热带特产果树之一 .建立高效、稳定的荔枝转基因系统 ,对于应用现代生物技术进行荔枝的品种改良具有重要意义 [1] .我们在已建立的荔枝胚性愈伤组织 ( embryogenic callus,EC)体胚发生系统 [2 -4] 及其基因枪转化初步探讨 [5] 的基础上 ,进一步进行了 EC基因枪转化系统的建立研究 ,为将目的基因导入荔枝奠定了重要基础 ,并获得荔枝细胞工程研究中很有价值的有抗性筛选标记的荔枝胚性细胞系 .本研究中 ,以荔枝品种下番枝 (东刘 1号 )幼胚诱导的、长期继代保持的 EC为试验材料 ,建立了荔枝 EC高效遗传转化系统 :…     

玉米胚性愈伤组织的遗传转化及耐草甘膦植株再生

以优良玉米自交系X2211的幼胚胚性愈伤组织为受体材料,采用农杆菌介导法将来自微生物荧光假单胞杆菌(Pseudomonas fluorescens)G2菌株的抗除草剂基因2mG2-epsps转入玉米愈伤组织细胞,转化后的细胞经草甘膦筛选,获得抗性愈伤组织并再生植株282株,成活86株,经特异PCR检测表明其中26株植株转入了2mG2-epsps基因,喷施0.125%除草剂试验检测表明,转基因植株具有良好的耐除草剂特性,为抗除草剂玉米新品种选育提供了较好的亲本材料。     

基因枪轰击高粱愈伤组织获得转基因植株

利用基因枪轰击高粱幼穗愈伤组织，把Bt蛋白基因转移到体细胞中，在20mg／L潮霉素选择培养基上筛选到抗性愈伤组织，并分化出10株再生植株。对经过潮霉素抗性筛选再生的绿色植株取叶片进行GUS活性分析，从10株再生植株中GUS阳性反应的7株，另有3株无GUS表达。对GUS活性表达阳性的植株，利用：PCR和Southern杂交分析，对GUS活性表达阳性的植株7株中，6株扩增出0．6kb左右的DNA杂交信号带，说明Bt已整和到高粱基因组中。以基因枪法将Bt基因转移高粱愈伤组织过程中，高效的组织培养和再生体系的建立是转基因成功的重要因素之一。在遗传转化过程中应避免转基因的嵌合体现象，通过抗生素的浓度及培养时间，可以降低转基因的嵌合体频率。     

杂交枫香胚性愈伤组织遗传转化体系研究

目的杂交枫香是我国重要的用材和观赏树种资源,但其遗传转化体系尚未建立。建立杂交枫香遗传转化体系为杂交枫香性状改良和基因功能研究提供了方法。方法本研究基于杂交枫香高效的体细胞胚胎发生技术,用根癌农杆菌介导的遗传转化法对其胚性愈伤组织进行遗传转化,对潮霉素选择压、菌液浓度、侵染时间、共培养时间、以及共培养温度等影响因素采用...     

商陆抗病毒蛋白基因导入玉米幼胚愈伤组织研究初报

以87-1自交系,87-1×综3,郑22×87-1,郑22×HI(A×B)4个基因型的玉米幼胚愈伤组织为受体,利用基因枪介导法将商陆抗病毒蛋白(PAP)基因和抗卡那霉素筛选基因以共转化的方式导入玉米胚性愈伤组织,然后在含有25～40 mg@L-1G 418培养基上筛选愈伤组织并分化得到再生植株.PCR和Southern杂交结果表明,PAP基因已经转入由抗性愈伤组织再生出的玉米植株中.     

农杆菌介导法转化大豆体细胞胚获得转基因植株

以六个品种大豆体细胞胚为受体,以Bt基因为目的基因,应用根癌农杆菌介导法对大豆进行了遗传转化,经卡那霉素选择、诱导体细胞胚萌发及壮苗培养,获得了完整的抗性再生苗,经PCR、PCR-Southern和点杂交分析鉴定,初步证明外源基因Bt已整合到大豆的基因组中。