鸡传染性法氏囊病病毒毒力测定方法的改进及国内7个毒株毒力的测定

摘要: 准确衡量鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)毒力特征对研究IBDV毒力变异的分子基础、变异规律，以及影响IBDV毒力的相关分子生物学、病原生物学和细胞生物学机制有重要意义。但是，IBDV的毒力测定方法一直没有一个统一的标准。常规以SFP鸡和商品鸡的死亡率表示IBDV的毒力，但IBDV的定量方法和接种剂量并没有一个统一的标准。研究采用尿囊膜接种途径和灵敏度较高的双抗夹心ELISA方法，大幅度提高EID50定量的灵敏度，使EID50能够准确定量不同致病类型的毒株。SPF鸡和商品鸡的接种剂量根据Eterradossi的研究结果确定为2×103EID50。通过7株中国IBDV的毒力测定及相关分析，证明该方法灵敏度高，重复性好、通用性强, 有利于IBDV毒力测定方法的标准化和规范化。     

质粒介导的siRNA对犬细小病毒复制的影响

RNA干扰(RNAi)是指短的双链RNA能降解与其互补mRNA,特异性诱发转录后基因沉默的现象,近年来成为抗病毒研究的新途径。为了探索siRNA对单链DNA病毒复制的影响,根据犬细小病毒(CPV)基因组序列选择4段21nt的保守序列设计4对SiRNA寡聚核苷酸,插入psiSTRIKE系列的U6发卡结构载体,构建了小发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)的psiSTRIKE表达载体,转染FK81细胞,筛选稳定的转染细胞,通过病毒感染检测、细胞活度测定和TCID50测定,研究质粒介导的siRNA对CPV复制的影响。结果表明,构建的4个psiSTRIKE表达载体转染细胞后,能够不同程度地抑制病毒在宿主细胞内的复制。因此质粒介导的shRNA能抑制CPV在细胞内的复制和感染,具有抗病毒作用,从而为进一步通过siRNA途径控制病毒奠定基础。     

应用Mab-basedAC—ELISA法对鸡IBDV分离株的抗原特性分析

为了解传染性法氏囊病病毒（IBDV）的抗原变异分子基础,采用Mab—basedAC—ELISA方法,利用11株单抗对2株河北IBDV分离株进行了抗原特性分析,并比较了超强毒株和弱毒株的VP2高变区序列的分子特征。结果显示：强弱毒株的抗原位点结合单抗的能力明显不同,除了Mab3、Mab9外,其余9个单抗的结合能力,超强毒株要高于弱毒株。超强毒株HeB-If缺少了Mab3结合位点,弱毒株HeB-bdjz缺少了Mab3、Mab6结合住点,这说明强弱毒株不仅在序列上有差异,而且在抗原位点的缺失上也存在差异。本试验为控制IBD和疫苗改进具有重要意义。     

正义和反义Calpastatin cDNA真核表达载体的构建

本研究利用真核表达载体ｐＲＣ／ＲＳＶ，将位于ｐＢＳ－ＳＫ质粒中的ＣａｌｐａｓｔａｔｉｎｃＤＮＡ以正反两个方向构入载体；经酶切分析，构建的质粒结构正确。所构建质粒ｐＲＣ／ＲＳＶ正义、反义ＣａｌｐａｓｔａｔｉｎｃＤＮＡ两个表达载体，为进一步转化肌细胞，人为控制Ｃａｌｐａｓｔａｔｉｎ基因的表达，从而控制Ｃａｌｐａｉｎ活性，深入研究钙蛋白酶在肌肉发育及肉嫩化中的作用打下基础。     

日粮磷和钙磷比例对小型猪骨骼性能的影响

36头小型猪(香猪)去势公猪，通过3×3交叉分组设计随机分配到9个处理中，每个处理4个重复。日粮磷的3个水平为0．3％，0．6％和0．9％：日粮钙磷比例的3个水平为1：1，1．25：1和1．5：1。结果表明，第四踱骨骨鲜重随日粮磷水平提高显著增加(P<0．01)。随日粮磷增加第六肋骨、第四足掌骨和第四踱骨的骨灰分、灰分钙和灰分钙磷比例显著地提高(P<0．05)，而骨灰分磷则显著下降(P<0．01)。日粮钙磷比例对第六肋骨的骨灰分、灰分磷和灰分钙磷比例作用显著(P<0.01)。日粮不同磷水平对股骨、肱骨的压断力和弯曲力矩的作用有极显著差异(P<0．01)，且当日粮磷水平0．9％达到最大值，但日粮不同钙磷比例对骨骼压断力和弯曲力矩无显著影响(P>0．05)。     

狂犬病病毒3aG株核蛋白基因cDNA的克隆、序列分析及在COS细胞中的暂态表达

从狂犬病病毒 ３ａ Ｇ 株感染的 Ｂ Ｈ Ｋ 细胞裂解上清液中快速提取病毒 Ｒ Ｎ Ａ,用 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ 得到编码核蛋白完整结构基因的 ｃ Ｄ Ｎ Ａ。进一步将此基因克隆入 ｐ Ｕ Ｃ １８中,进行核苷酸序列分析,并与国外狂犬病病毒 Ｐ Ｖ、 Ｃ Ｖ Ｓ、 Ｓ Ａ Ｄ Ｂ１ ９ 株以及国内另一狂犬病病毒 ５ａ Ｇ 株的 Ｎ 基因序列进行了同源性比较。然后将 Ｎ 基因正向插入真核表达质粒中,转染 Ｃ Ｏ Ｓ７ 细胞,用免疫组化方法证明所克隆基因可在细胞中正确表达出 Ｎ 蛋白。     

牧羊犬IFN-β3基因的克隆和序列分析

为对犬干扰索-β(IFN-β)进行研究,用PCR技术从犬血细胞基因组DNA中扩增了牧羊犬IFN-β基因,并克隆到pGEM-T载体,转化大肠杆菌JM109感受态细胞,阳性克隆经PCR和酶切鉴定后进行测序.结果表明:牧羊犬IFN-β基因含561bp,编码186个氨基酸,前21个为信号肽.成熟蛋白理论分子量为20kD,等电点为5.737,有2个潜在磷酸化位点、5个N糖基化位点和4个半胱氨酸残基,大部分为亲水区.二、三级结构预测显示,蛋白主要由5段α螺旋组成.犬IFN-β基因与赤狐的完全相同,与貉、雪貂和猫的同源性很高(85％～98.4％),在进化树中处于同一分支,而与禽类和鱼类的同源性仅为2.9％～8.6％.     

荧光原位PCR定位动物精子介导转移的外源基因

用荧光原位PCR对经体外介导外源基因转移方法处理的家畜精子进行检测。结果证实,牛,山羊和绵羊的精子在一定条件下能够携带所转移的外源基因,其平均转移效率分别为：绵羊27.12%,牛31.16%,山羊30.57%,同时发现外源基因已进入精子细胞内并位于核及其外围区域。     

日粮磷和钙磷比例对小型猪骨骼性能的影响

36头小型猪 (香猪 )去势公猪 ,通过 3× 3交叉分组设计随机分配到 9个处理中 ,每个处理 4个重复。日粮磷的 3个水平为 0 .3% ,0 .6 %和 0 .9% ;日粮钙磷比例的 3个水平为 1∶ 1,1.2 5∶ 1和 1.5∶ 1。结果表明 ,第四骨骨鲜重随日粮磷水平提高显著增加 (P<0 .0 1)。随日粮磷增加第六肋骨、第四骨和第四骨的骨灰分、灰分钙和灰分钙磷比例显著地提高 (P<0 .0 5) ,而骨灰分磷则显著下降 (P<0 .0 1)。日粮钙磷比例对第六肋骨的骨灰分、灰分磷和灰分钙磷比例作用显著 (P<0 .0 1)。日粮不同磷水平对股骨、肱骨的压断力和弯曲力矩的作用有极显著差异 (P<0 .0 1) ,且当日粮磷水平 0 .9%达到最大值 ,但日粮不同钙磷比例对骨骼压断力和弯曲力矩无显著影响 (P>0 .0 5)     

狂犬病分子流行病学的研究进展

狂犬病是一种危害严重的人兽共患病。以往主要用血清中和试验和单克隆抗体方法进行狂犬病病毒分型和流行病学调查。近年来，由于狂犬病在野生动物中发生流行以及狂犬病病毒分子生物学研究的迅速发展，单纯用常规方法已不能满足对狂犬病病毒分型及其流行病学调查和研究的需...