E.tenella河北株重组IL-2-EtMIC-2 DNA疫苗的构建及保护力分析

为了构建E.tenella河北株重组IL-2-EtMIC-2DNA疫苗,并确定其抗球虫效力。采用RT-PCR方法分别克隆出鸡IL-2和E.tenella河北株EtMIC-2基因,并连接到pMD18-T载体上进行测序;将目的基因克隆到pcDNA3.0载体,构建重组质粒pcDNA3.0-IL-2-EtMIC-2,并转染293T细胞,用Western blot方法验证表达。将构建的重组IL-2-EtMIC-2DNA疫苗以50,100,150μg/只的剂量分别在14,21日龄胸肌注射免疫试验鸡,除阴性对照组外,28日龄时经口灌服孢子化E.tenella卵囊4×10~4个,研究其对E.tenella感染后的免疫保护效果。结果表明:成功构建了重组质粒pcDNA3.0-IL-2-EtMIC-2,且能在293T细胞中表达出融合蛋白;3个免疫组的ACI比阳性对照组分别提高了97.63%,127.02%和129.81%,其中免疫剂量为100,150μg时,ACI均达160以上,具有良好的免疫保护效果。     

26味中药对狐源致病性大肠埃希菌地方株体外抑菌试验

为了研究五味子等26味中药对狐源致病性大肠埃希菌(Escherichia coli)HL2(O1)地方流行株的体外抑菌活性,采用水提法制备了单味中草药药液,浓缩为生药含量为1g/mL,利用平板打孔法和微量二倍稀释法分别测定26味中药对狐源致病性E.coli HL2(O1)的抑菌圈直径和最小杀菌浓度(MBC)。结果显示,五味子、诃子对狐源致病性E.coli呈极度敏感,抑菌圈直径在21.3mm~20.3mm之间,MBC均为7.825mg/mL;金银花、黄连、苦参3味药物高度敏感,抑菌圈直径在16.4 mm~19.3 mm之间,MBC在15.65mg/mL~31.25mg/mL;板蓝根、黄芩、五倍子等10味药物中度敏感,抑菌圈直径在11.3mm~14.2mm之间,MBC在62.5mg/mL~250mg/mL;连翘、地丁、白头翁、穿心莲4味药物为低度敏感;其余药物无明显的效果。筛选出了五味子、诃子、黄连、金银花、苦参5味对狐源致病性E.coli HL2(O1)地方株敏感的中药,可为狐源致病性E.coli的防治提供基础。     

唐山地区蜱传斑点热群立克次体分子流行病学

根据已发表的长角血蜱16SrRNA序列及斑点热群立克次体外膜蛋白A（OmpA）基因序列设计2对特异性引物,对唐山地区采集的长角血蜱进行PCR检测,并对阳性样本进行测序和序列分析,抽检样本建立分子系统进化树。结果表明,在315份蜱DNA样本中检测出25份阳性样本,阳性率为7.94%;序列分析结果显示唐山地区长角血蜱携带立克次体同处于一个分支,与日本株立克次体同源性最高（93.30%）,其次是福建株立克次体（92.11%）,黑龙江立克次体绥芬株（90.45%）、虎林株（90.42%）。结论得出唐山地区蜱传斑点热感染较严重,分子进化分析结果显示唐山地区蜱传斑点热群立克次体可能为一新种。     

中药对鸡致病性大肠埃希菌的体外抑菌试验

为研究25种中药对秦皇岛地区鸡致病性大肠埃希菌(Escherichia coli)地方流行株QH1(O78)、QH2(O89)、QH4(O1)的体外抑菌效果,以E.coli标准株ATCC25922作为质控菌株。利用水提法制备中药药液,使终浓度为1g/mL;用平板琼脂打孔法和改良微量二倍稀释-平板法分别测定25种中药的抑菌圈直径和最小抑菌浓度(MIC)。结果表明,金银花、黄连、乌梅、五味子4种中药对鸡致病性E.coli地方株极度敏感,抑菌圈直径在20.3mm~22.7mm之间,其MIC在15.65mg/mL~31.25mg/mL之间;其他药物对鸡致病性E.coli地方株有不同程度的敏感性,为鸡致病性E.coli地方株中药防治提供理论基础。     

鸡球虫基因工程疫苗的研究进展(英文)

鸡球虫病是严重危害养禽业的一种原虫病。目前鸡球虫病的防治主要是依靠化学药物和活球虫疫苗,但药物防治存在抗药性和药物残留,球虫活疫苗具有致病性、生产成本高、可能产生"返强"的弊端。而基因工程疫苗则具有易操作、稳定、安全和高效等优点,成为预防鸡球虫病的研究热点。该文主要从鸡球虫基因疫苗的研究现状、免疫机理、免疫效果影响因素、细胞因子佐剂应用等方面进行了综述,以便为鸡球虫基因疫苗的研究与应用提供参考。     

紫锥菊多糖对LPS损伤后IEC-6分泌TNF-αmRNA的影响

[目的]研究紫锥菊多糖(EPS)在内毒素(LPS)损伤小肠上皮细胞(IEC-6)时对肿瘤坏死因子(TNF)表达的影响,以探讨 EPS对损伤细胞的作用机制。[方法]采用 TRIzon试剂提取总RNA,RT-PCR扩增 TNF-α mRNA,琼脂糖凝胶电泳,并进行电泳及图像分析。[结果]50μg/ml EPS 可以部分抑制 LPS 刺激 IEC-6产生的TNF-α mRNA水平,而200、500μg/ml EPS随着浓度的增加,其抑制 TNF-α mRNA的水平逐渐增加;将 IEC-6分别用50、100、200及500μg/ml EPS预处理24 h,然后用10μg/ml LPS刺激达1、4 h,采用 RT-PCR方法分析得, LPS诱导 TNF-α mRNA表达被 EPS有效地抑制,4 h的抑制率高于1 h的抑制率。[结论]EPS通过抑制 LPS刺激细胞分泌 TNF-α mRNA的产生而起到肠道粘膜的保护作用,且 EPS对这种抑制作用具有浓度及时间依赖性。     

紫锥菊多糖对LPS损伤后IEC-6分泌IL-6mRNA的影响

[目的]探讨紫锥菊多糖(EPS)在内毒素(LPS)损伤后IEC-6分泌IL-6mRNA的影响.[方法]采用Trizon试剂提取总RNA,经RT-PCR扩增后,进行琼脂糖凝胶电泳及图像分析.[结果]当LPS刺激IEC-6细胞时,IL-6mRNA分泌增加.而EPS可以抑制这种作用,并且具有剂量依赖性,50 μg/ml EPS可以部分抑制LPS刺激IEC-6产生的IL-6水平,而100、500μg/mlEPS随着浓度的增加,其抑制IL-6的水平逐渐增加;将IEC-6用50、100、200、500 μg/ml EPS预处理24h,然后用LPS(10 μg/ml)刺激1、4h,采用RT-PCR方法分析得,LPS诱导IL-6mRNA表达被EPS抑制且具有时间依赖性.[结论]证实了LPS作用于小肠上皮细胞后,其分泌的细胞因子IL-6mRNA产生增多,而EPS可以抑制LPS刺激细胞分泌的IL-6mRNA的产生从而起到肠道粘膜的保护作用,并且这种抑制作用具有浓度及时间依赖性.     

鸡球虫病药物临床应用时存在的问题与对策

对绝大多数抗球虫药来说，在防治鸡球虫病时。球虫一旦对某种药物产生了耐药性．它便可耐受其连续使用浓度的4～8倍甚至更高的浓度：此时再提高药物浓度，它又可耐受此浓度的4～8倍甚至更高的浓度．而实际生产上这一浓度足以对鸡群本身造成毒害作用。喹啉类药物曾为防治鸡球虫病的优良药物，任何一种喹啉类化合物以40毫克／千克剂量连续使用，可完全抑制球虫的增殖，然而获得耐药性后．即使是用1000毫克／千克以上的剂量也完全无效。甘德培（2001）等在获得了对氯嗪苯乙氰的有效浓度（0．125毫克／千克）的耐药虫株后，很容易就诱导了高出该浓度10倍量浓度的抗药虫株。     

柔嫩艾美耳球虫重组IL-2-EtMIC-2质粒的免疫效力研究

为了确定鸡IL-2对柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)河北株Et MIC-2质粒的免疫增效作用,将构建的pcDNA3.0-IL-2、pcDNA3.0-EtMIC-2和pc DNA3.0-IL-2-EtMIC-2质粒分别免疫雏鸡,研究其对E.tenella攻毒后的免疫保护效果。结果显示,pcDNA3.0-IL-2-EtMIC-2重组质粒的免疫剂量为100μg、150μg时,抗E.tenella攻击的保护率均高达95%,抗求虫指数(ACI)分别为163和165,比免疫pcDNA3.0-IL-2和pcDNA3.0-EtMIC-2组分别提高了91.99%、94.35%和31.88%、33.50%。