唐山地区蜱传斑点热群立克次体分子流行病学

根据已发表的长角血蜱16SrRNA序列及斑点热群立克次体外膜蛋白A（OmpA）基因序列设计2对特异性引物,对唐山地区采集的长角血蜱进行PCR检测,并对阳性样本进行测序和序列分析,抽检样本建立分子系统进化树。结果表明,在315份蜱DNA样本中检测出25份阳性样本,阳性率为7.94%;序列分析结果显示唐山地区长角血蜱携带立克次体同处于一个分支,与日本株立克次体同源性最高（93.30%）,其次是福建株立克次体（92.11%）,黑龙江立克次体绥芬株（90.45%）、虎林株（90.42%）。结论得出唐山地区蜱传斑点热感染较严重,分子进化分析结果显示唐山地区蜱传斑点热群立克次体可能为一新种。     

潜伏期马立克氏病病鸡血清型病毒L-meq、meq基因的比较及遗传分析

从潜伏期感染马立克氏病病毒(MDV)鸡淋巴组织中提取基因组DNA,采用梯度PCR的方法获得MDV的L-meq、meq基因,将其插入pMD18-T克隆载体,经测序并进行了序列分析。结果表明,L-meq、meq基因同源性很高,L-meq中只有180bp与meq不同。但是采用同样的方法在发病期病鸡淋巴组织中却只能获得MDV的meq基因。为了进一步研究发病期L-meq基因消失的原因,试验对L-meq、meq基因的氨基酸序列的结构域进行了分析。结果表明,L-meq基因中含有9个PRR(proline-rich-reapts)区域,meq中含有6个PRR区域,从而推断PRR区域可能与基因的转录激活及调控病毒DNA复制的功能有关,该180bp插入序列也许能解释初期感染MDV不致瘤的原因,同时也意味着L-meq基因对于潜伏期的维持是必要的。     

鸡MDV meq基因对鸡胚成纤维细胞p53基因表达的影响

利用TaqMan探针技术,采用实时荧光相对定量RT-PCR的方法检测了鸡马立克氏病病毒（MDV）meq基因对鸡胚成纤维细胞（Chicken embryo fibroblasts,CEF）p53基因表达的影响,并用本室改进的TRAP法测定了端粒酶活性。结果显示,meq基因激活了CEF中原癌基因p53的表达,并且48 h的表达量是72 h的18.8倍;在对CEF和转染前后48、72 h的细胞端粒酶活性测定时也发现,端粒酶活性在转染后48 h是转染后72 h的16倍。流式细胞仪检测发现meq基因使S期细胞比例较转染前有所上升,进一步印证了meq基因是MDV中致瘤的主要因素。     

鸡p15INK4B基因的克隆表达及纯化

为研究鸡p15INK4B蛋白的功能及为制备此蛋白的单克隆抗体提供材料,应用引物搭桥法合成p15INK4B基因,应用基因工程的手段构建p15INK4B基因的原核表达载体,在E.coliRosetta(DE3)菌进行融合表达,并对表达产物进行亲和层析纯化。结果成功地构建了p15INK4B基因原核表达载体,经亲和层析制备了较高纯度的目的表达产物。     

鸡p15因子抑制MDCC-MSB1细胞的增殖及端粒酶活性

为探讨鸡p15基因的生物学功能,试验构建了鸡p15基因的真核表达载体pcDNA3.1( )-p15,并转染到鸡MDV转化的淋巴细胞系MDCC-MSB1,应用G418筛选掉未转染的细胞,对存活细胞p15蛋白的表达、细胞增殖力、群体倍增时间、细胞周期和端粒酶的活性进行了检测。结果表明,与转染空质粒pcDNA3.1( )细胞相比,转染了p15基因的细胞稳定表达了p15蛋白;细胞的增殖受到了抑制,抑制率达45%～74%;群体倍增时间从27h延长至416h;流式细胞仪分析细胞周期发现,p15蛋白引起了细胞多停滞于G0/G1期,S和G2/M期细胞比例下降;端粒酶活性受到抑制。     

犬吉氏巴贝斯虫病的诊断与治疗

河北省秦皇岛某犬养殖中心的50只犬出现红尿、厌食、发烧、精神欠佳等症状,通过流行病学调查、临床症状观察、实验室检查,在其血涂片检查中发现红细胞内有染成淡蓝色的小梨籽形虫体,有圆形、环形和逗点形等,虫体的染色质团呈紫红色,清晰可见,1个红细胞内寄生虫体1~3个不等,红细胞染虫率为5%~15%,确诊为犬吉氏巴贝斯虫病。应用伯氨喹啉(0.8~1.0 mg/kg)和乙胺嘧啶(0.8 mg/kg)配合治疗,连用5 d。用药后贫血症状基本缓解,食欲恢复,红细胞染虫率下降到了1%左右,病犬痊愈。表明伯氨喹啉和乙胺嘧啶对犬吉氏巴贝斯虫病具有良好的防治效果。     

马立克氏病病毒L-meq基因的原核表达及多克隆抗体的制备

从潜伏期感染马立克氏病病毒的鸡淋巴组织中提取基因组DNA,采用梯度PCR的方法获得了马立克氏病病毒的L-meq基因,与NCBI数据库已发表的序列(AB091109)相比,同源性达99%。将L-meq基因片段定向克隆到原核高效表达载体pET-28a中,构建pET-28a-L-meq重组质粒。将重组质粒转化受体菌Rosetta中,以IPTG对其进行诱导表达,SDS-PAGE电泳分析,结果表明L-meq基因在E.coli Rosetta中得到了正确表达,薄层扫描分析表明,表达蛋白占细菌总蛋白的18.8%,将表达蛋白进行初步的纯化,制备了L-MEQ蛋白的多克隆抗体。用ELISA方法对多克隆抗血清进行鉴定,结果表明其纯化的重组的L-MEQ蛋白具有良好反应原性和特异性。     

鸡端粒酶反转录酶启动子区克隆及序列分析

根据GenBank(AY505015)报道的鸡端粒酶反转录酶序列设计了1对特异性引物,以鸡淋巴瘤细胞(MDCC-MSB1)总核酸为模板进行PCR。PCR产物连接到pMD19-T载体进行测序,通过BLAST对GenBank进行同源性搜索,并用DNAMAN分子生物学软件进行分析。结果测得MDCC-MSB1启动子区全长为997 bp,其中G C占50.78%。与国外报道的端粒酶反转录酶(AY505015)启动子区序列同源性为99.22%。与人端粒酶反转录酶启动子区相比:二者在起始密码子之前约250 bp均有1个E-box,但在chTERT启动子区新增加了4个c-Myb位点,而3个c-Ets2和WT1位点缺失,其他基序二者的分布基本相似。二者启动子区富含CpG岛,延伸到编码区。     

饲粮高铁对肉仔鸡十二指肠黏膜铁转运载体基因表达及组织微量元素含量的影响

本试验旨在研究饲粮铁含量对肉仔鸡组织重要微量元素铁、锰、铜、锌含量及十二指肠黏膜主要铁转运载体基因表达的影响,探讨铁对肉仔鸡微量元素吸收和代谢的影响及其机制。将336只1日龄商品代罗斯308肉公雏按照体重随机分成4个组,每组6个重复,每个重复14只鸡。对照组饲喂不额外添加铁的基础饲粮(实测铁含量为78 mg/kg),铁添加组分别饲喂以七水硫酸亚铁(FeSO_4·7H_2O)形式添加100、250或500 mg/kg铁的试验饲粮(实测铁含量分别为166、308和579 mg/kg)。试验期21 d。各组试鸡分别于7、14和21日龄屠宰分析肝脏、心脏、胰腺、十二指肠黏膜和胫骨灰中铁、锰、铜、锌含量及十二指肠黏膜中二价金属转运蛋白(DMT1)和膜铁转运蛋白(FPN1)mRNA表达水平。结果表明:1)500 mg/kg铁添加组1~7日龄和8~14日龄的平均日增重显著低于其他3组(P0.10),250和500 mg/kg铁添加组1~7日龄的平均日采食量显著低于其他2组(P0.10)。2)饲粮铁含量对肉仔鸡7、14、21日龄的血浆总铁结合力以及全血血红蛋白浓度(7日龄除外)和红细胞压积均无显著影响(P0.10),但显著影响7、14和21日龄血浆铁含量和铁饱和度(P0.10),二者均随饲粮铁含量增加而升高。3)7和14日龄心脏及7、14和21日龄肝脏、十二指肠黏膜、胰腺和胫骨灰铁含量均随饲粮铁含量的增加而升高,7、14和21日龄十二指肠黏膜、胰腺和胫骨灰锰含量均随饲粮铁含量的增加而降低;饲粮添加铁显著降低7日龄胰腺锌含量(P0.10),但对其他日龄胰腺和各日龄其他所测组织锌含量以及各日龄所测各组织铜含量均无显著影响(P0.10)。4)饲粮铁含量显著影响7、14和21日龄十二指肠黏膜DMT1和FPN1 mRNA表达水平(P0.10),各日龄DMT1和FPN1mRNA表达水平均随饲粮铁含量的增加而降低。以上结果提示,高铁饲粮可能通过调控十二指肠黏膜DMT1和FPN1基因的表达降低锰和锌在肠道的吸收,进而减少锰和锌在组织中的沉积。     

饲粮铁水平对肉仔鸡生长性能、胴体性能及肉品质的影响

为研究饲粮缺铁或高铁对肉仔鸡生长性能、胴体性能和肉品质的影响,试验一将216只爱拔益加（AA）肉公雏从1日龄开始随机分为3个处理组,分别饲喂不加铁玉米-豆粕基础饲粮（缺铁组）、添加铁100 mg/kg（正常铁组）或500 mg/kg（高铁组）饲粮至42日龄|试验二将144只AA肉公雏从22日龄开始随机分为3个处理组,分别饲喂上述三种饲粮至42日龄。结果显示：（1）全程饲喂高铁饲粮组日增重和日采食量较正常铁组显著降低（P < 0.05）,分别降低6.97%和8.64%。（2）全程饲喂缺铁或高铁饲粮组腹脂率较正常铁组降低22.5%和25.7%（P < 0.05）,且高铁组心脏指数较正常铁组提高20.5%。（3）与正常铁组相比,全程和后期饲喂缺铁饲粮组胸肌滴水损失分别提高22.7%和 78.8%（P < 0.05）|全程饲喂高铁饲粮组胸肌和腿肌的b*值分别提高32.2%和52.8%（P < 0.05）,腿肌a*值提高53.4%（P < 0.05）。后期饲喂高铁饲粮组胸肌a*值提高43.1%（P < 0.05）,腿肌b*值提高34.2%（P < 0.05）。以上结果提示,全程饲粮高铁会降低肉仔鸡生长性能,全程或后期缺铁或高铁均会降低肉品质。 [关键词] 铁|生长性能|胴体性能|器官指数|肉品质|肉仔鸡