意大利蜜蜂蜂毒磷脂酶A2基因在大肠杆菌中的表达

将意大利蜜蜂蜂毒磷脂酶A2(AmPLA2)成熟肽编码区基因(405 bp) 插入表达载体pETBlue-1,在大肠杆菌Tuner(DE3)placⅠ中诱导表达,经SDS-PAGE电泳检测,表达产物分子量为15 kD,约占细菌总蛋白的4.3%;用兔抗AmPLA2多克隆血清为第一抗体作Western blot检测,表达产物显示与天然AmPLA2同样的特异性印迹,证实AmPLA2 基因已在大肠杆菌中得到表达.     

检测南方水稻黑条矮缩病毒胶体金免疫试纸条的建立

由白背飞虱Sogatella furcifera(Horváth)传播的南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice blackstreaked dwarf virus,SRBSDV)是目前我国南方水稻上危害最严重的病毒,为开发简便、快速、准确的SRBSDV病毒检测技术和检测试剂,以感染SRBSDV的植物粗提液为免疫原,利用杂交瘤技术制备了2株抗SRBSDV的单抗(14A8和15G6),并利用制备的单抗建立了可快速、特异、灵敏地检测SRBSDV的胶体金免疫试纸条。结果表明,2株制备单抗的抗体类型及亚类均为Ig G1、kappa链,单抗腹水的间接ELISA效价均达到10~(-7);Western blot分析表明,2株单抗均与SRBSDV的外壳蛋白亚基有特异反应,而不与水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarf virus,RBSDV)反应。以制备14A8和15G6单抗分别为捕获抗体和胶体金标记抗体,开发成能在5 min内准确、特异地检测水稻植物和白背飞虱传毒介体体内SRBSDV的胶体金免疫试纸条;灵敏度分析表明,该检测试纸条的检测水稻病叶的灵敏度达到1∶6 400倍(g/m L),检测单头携毒白背飞虱的灵敏度达到1∶51 200倍(单头/μL)。田间样品检测结果表明,该试纸条的检测结果与RT-PCR的符合率达到100%。建立的SRBSDV胶体金免疫试纸条可对南方水稻黑条矮缩病毒进行快速、特异、灵敏的诊断和检测。     

仪征市松材线虫病综合防治措施与效果

根据国家林业局《松材线虫病防治技术方案(修订版)》的总体要求,坚持分类施策,采取了疫点拔除、更新造林和生物防治等治理措施。经过2 a多来的工作实践,先后释放肿腿蜂920万头,拔除了真州镇、谢集乡等疫点;疫区面积压缩在466.67 hm2以内,有效地延缓了病害流行速度,取得了一定的治理成效,保护了绝大部分松林的安全。     

银杏强旺树环剥极限时间探讨

银杏大砧高干嫁接后数年至十几年树,由于营养生长极旺,不易成花,不能早实丰产.为此我们对银杏树进行了环剥极限时间试验,即利用银杏树休眠后期到萌芽期这一不为一般果树使用的环剥时期进行环剥,效果显著,环剥树与对照树相比,花量成倍增加,产量立竿见影,现将试验结果报告如下.     

豆梨和杜梨叶片多胺代谢与高温胁迫关系的探讨

以杜梨和豆梨实生苗为试材,比较45℃温度处理下两种砧木叶片落叶率的变化,以及30和45℃温度处理后供试材料叶片内源多胺种类、形态和含量变化。结果表明:豆梨达到65%落叶率的时间比杜梨早8d;两种砧木叶片中均存在腐胺、己二胺、亚精胺和精胺;杜梨叶片游离态和结合态腐胺含量显著高于豆梨;处理16d后,豆梨游离态腐胺含量快速下降至10nmol·g-1以下,与平均落叶率达到65%所需时间一致。表明多胺代谢变化与供试材料的耐高温胁迫能力有密切关系,高温胁迫使得两种砧木叶片游离态和结合态腐胺含量逐步下降,并且导致游离态亚精胺和精胺含量增加,其中杜梨增加幅度更大。     

利用SSR分子标记构建苏香粳1号的指纹图谱

应用筛选出的4对SSR引物,建立了苏香粳1号的DNA指纹图谱.结果表明,苏香粳1号特异性的SSR指纹是引物RM3475的谱带1、引物RM3533的谱带2、引物RM6920的谱带1.通过与其他香稻材料的遗传关系分析,发现苏香粳1号与苏御糯遗传距离较大,从而在分子水平上解释和验证了苏香粳1号具有粳稻的遗传成分.     

水稻条纹病毒编码蛋白在灰飞虱体内的检测及其与CP体外结合研究

 【目的】检测灰飞虱体内由水稻条纹病毒（RSV）编码的外壳蛋白（CP）、病害特异性蛋白（SP）,以及非结构蛋白NS2、NS3和NSvc4等5种蛋白以及病毒粒子CP与SP、NS2、NS3、NSvc4的体外结合,为进一步研究水稻条纹病毒与其介体昆虫互作提供有用信息。【方法】提取高带毒灰飞虱（Q家系）总蛋白,用免疫方法检测昆虫体内CP、SP、NS2、NS3和NSvc4等5种重要蛋白的表达以及病毒粒子CP与SP、NS2、NS3、NSvc4的体外结合情况。【结果】结果表明在带毒灰飞虱体内以上5种蛋白都能检测到,而且CP含量最高,NSvc4、SP、NS3、NS2含量依次降低;用体外原核表达后纯化的蛋白进行了RSV粒子CP与SP、NS2、NS3、NSvc4的体外结合实验,实验结果表明病毒粒子CP与SP、NSvc4之间存在体外结合关系。【结论】检测结果为灰飞虱作为RSV的昆虫寄主并且可以在其体内增殖的结论提供了支持,表达差异表明病毒编码蛋白在介体灰飞虱体内可能存在着一定的协调关系;病毒粒子与SP的结合为前人关于CP与SP可能共同作用于叶绿体进而影响症状的严重度的报道又提供了一个新的证据,病毒粒子与NSvc4之间存在体外结合关系,也为NSvc4可能作为运动蛋白通过与CP的互作以及诱导病毒在胞间运动需要CP的辅助提供了佐证。     

黄瓜绿斑驳花叶病毒单克隆抗体的制备

用提纯的黄瓜绿斑驳花叶病毒(CGMMV)免疫的BALB/c鼠脾细胞与SP2/0鼠骨髓瘤细胞融合,经细胞筛选与克隆,获得4株能稳定传代并分泌抗CGMMV单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞,并分别制备其单抗腹水。4株单克隆腹水抗体间接ELISA效价在10-6～10-7之间,4株单抗的抗体类型及亚类均为IgG1,kappa链。特异性检测表明4株单抗仅与CGMMV的17.5 ku的外壳蛋白有特异性反应。利用最灵敏的11E5单抗为核心建立了检测CGMMV抗原包被间接ELISA方法(ACP-ELISA),该方法对病叶的检测灵敏度达到1∶10 240(g/mL)倍稀释,对提纯病毒的检测灵敏度达到0.01 ng。     

免疫亲和层析法纯化发酵液中的核糖基异戊烯基嘌呤

用过碘酸钠氧化法交联核糖基异戊烯基嘌呤和卵清蛋白,并免疫Ｂａｌ．ｂ／ｃ小鼠．鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,经ＥＬＩＳＡ筛选获得抗核糖基异戊烯基嘌呤单克隆抗体．将活化的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ６Ｂ与单克隆抗体交联制成免疫亲和色谱柱．发酵液经免疫亲和柱纯化后用高效液相色谱检测,其纯度极高．比较了不同洗脱条件对免疫亲和柱纯化的影响,认为利用免疫亲和柱纯化发酵液具有内源性杂质干扰少的优点,是生物样品预处理的一种有效方法．     

青扎板栗低产园改造技术

通过实施青扎板栗低产园改造技术，改造园年均每667m2收益为1592元，比对照增收1．9倍，土壤得到改良，肥力明显增加，树体结构趋于合理，基本具备了高产、稳产、优质的树形，尤其产量、品质明显提高。