略论数学教学中学生文化素养之培育

在中学数学教育中,教师可以运用一定的方式方法对学生进行诚信意识、平等观念、民族精神、文学修养、审美意识和创新精神等教育,从而培养和提高中学生的文化素养。     

银杏大枝段二重嫁接育苗

银杏常规嫁接育苗方法是播种，该种方法育苗周期长，生长量小，挂果迟，严重制约了银杏规模化生产。2000年春，我们采用了银杏大枝段二重嫁接育苗，取得了当年嫁接成苗，第二年移栽建园，第三年即能少量挂果，第四年平均株     

象州县生猪生产快速发展的经验

象州县生猪生产快速发展的经验吴建祥麦文钧象州县畜牧水产局５４５８００中图分类号：Ｓ８２８象州县自改革开放以来，生猪生产连续获得十七年增产增收。特别是在“八五”期间，通过深化农村改革，把科技兴牧作为农村经济的主要增长点来抓，使生猪生产的增长速度更快。据...     

银杏大枝段二重嫁接育苗技术

2000年春，我们利用银杏大树修剪和高接后废弃的大枝进行二重嫁接育苗，取得了当年嫁接成苗，第2年移栽建园，第3年挂果、第4年丰产的良好效果。     

松材线虫单克隆抗体的研制

利用松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)匀浆液免疫BALB/c小鼠，取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合获得一株能稳定传代并分泌抗松材线虫单克隆抗体的杂交瘤细胞，命名为1D3，经ELISA检测其特异性好、效价达到1∶5.12×105，抗体类型为IgG1亚类。Western blot 分析表明，1D3 单克隆抗体株与松材线虫匀浆液有明显反应。单克隆抗体的制备成功为准确地鉴定松材线虫提供了一种快速、灵敏和有效的诊断方法。     

番茄斑萎病毒外壳蛋白原核表达及Dot blot ELISA检测方法的建立

     将番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus, TSWV)全长外壳蛋白基因亚克隆到原核表达载体pET-32a中,经限制性酶切分析及测序结果表明插入方向正确且阅读框架无移码突变.将重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),SDS-PAGE分析结果证实IPTG可诱导1个分子量约为48 kDa的融合蛋白表达.利用6×His标签单抗和TSWV FoPaTs1多抗证实所表达的蛋白为TSWV外壳蛋白.以纯化的重组外壳蛋白免疫小鼠,制备杂交瘤细胞培养上清单抗,并用杂交瘤细胞培养液上清建立了可靠、有效检测TSWV的Dot-blot ELISA方法.     

西瓜花叶病毒（WMV）单克隆抗体的制备及其应用

【目的】制备抗西瓜花叶病毒（Watermelon mosaic virus, WMV）的特异性单克隆抗体,并以其为核心建立能快速有效地检测WMV的血清学方法,从而为中国田间西瓜花叶病毒病的诊断和检测、预测预警及科学防控体系的建立提供物质和技术支撑。【方法】用提纯的WMV病毒粒子免疫BALB/c小鼠,经细胞融合和细胞培养、抗体筛选和细胞克隆等杂交瘤细胞技术,获得能稳定分泌抗WMV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,将杂交瘤细胞注射入BALB/c小鼠腹腔制备其单抗腹水,并以制备的单抗为核心建立能准确、特异、灵敏地检测田间植物中WMV的ACP-ELISA、DAS-ELISA、dot-ELISA、Tissue blot-ELISA和IC-RT-PCR方法,以及能检测单头传毒介体蚜虫体内WMV的dot-ELISA方法。【结果】3株能稳定分泌WMV单克隆抗体的杂交瘤细胞株（2C8、15A8和16C12）及其单抗腹水被制备,3株杂交瘤细胞分泌的单抗腹水的间接ELISA效价均达到了10-6以上,抗体类型及亚类均为IgG1、kappa轻链。Western blot分析发现,这3个单抗均与WMV的外壳蛋白亚基有特异性反应。灵敏度分析结果表明,ACP-ELISA、DAS-ELISA、dot-ELISA和IC-RT-PCR方法检测WMV病叶的灵敏度分别达到1﹕163 840、1﹕327 680、1﹕5 120和1﹕1 310 720倍稀释（w/v,g/mL）。特异性分析结果表明,以这3个单抗为核心建立的ACP-ELISA、DAS-ELISA、dot-ELISA、Tissue blot-ELISA和IC-RT-PCR 5种血清学检测方法均能与感染WMV的病叶发生特异性免疫反应,而与感染小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)、马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)的植物样品、健康白南瓜、西瓜、葫芦和烟草的植物组织均呈阴性反应,且dot-ELISA方法还能特异性地检测单头蚜虫体内的WMV,而在检测无毒蚜虫时呈阴性反应。利用建立的血清学检测方法对采自浙江省、江苏省、山东省和海南省的275株葫芦科疑似病株进行检测,结果发现187株植物感染WMV,发病率达68%,说明WMV在中国田间葫芦科植物中广泛流行发生,且血清学方法的检测结果与RT-PCR方法的检测结果完全一致,将部分PCR产物进行核酸测序和序列比对分析,结果表明这些PCR产物是WMV CP基因片段,证明血清学方法检测阳性的样品确实感染WMV。【结论】获得了3株特异、灵敏的WMV单克隆抗体,以其为核心建立的5种血清学方法能准确、灵敏、可靠地应用于田间样品中WMV的检测,从而为中国WMV田间样品的大规模快速检测和诊断、该病害预报预警和科学防控提供物质和技术支撑。     

禽传染性支气管炎病毒S1基因植物表达载体的构建

以含传染性支气管炎病毒（ZJ971毒株）S1基因的质粒PBS为模板,根据其序列设计引物进行PCR扩增,得到1.7kb左右的S1基因产物；用XbalI和BamHI酶切纯化，并在T4DNA连接酶的作用下，定向克隆到植物表达载体PBI121中,PCR及酶切鉴定表明，质粒经三亲交配已导入根癌农杆菌中。     

鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因植物表达载体的构建

以含鸡传染性法氏囊病病毒(杭州分离株，HZ96)VP2基因的质粒PBS为模板，根据其序列设计引物进行PCR扩增，得到1．5kb左右长的VP2基因产物；用Kpn Ⅰ和SalⅠ酶切纯化的PCR产物；将纯化的酶切产物在T4DNA连接酶的作用下定向克隆到植物表达载体Cambia1301水稻胚乳特异性启动子GTl下游，并经PCR、酶切和测序鉴定．植物重组表达栽体经三亲交配已导入根癌农杆菌中．     

马铃薯Y病毒衣壳蛋白抗原表位分析及其快速ELISA检测方法的建立

【目的】马铃薯Y病毒（potato virus Y,PVY）是影响马铃薯产量和品质的主要病毒之一,目前尚未发现有效的防治药剂,脱毒种薯的应用是预防PVY危害的主要防治措施。建立灵敏度高、特异性强的PVY快速检测方法,为脱毒种薯质量控制提供技术支撑。【方法】将PVY衣壳蛋白（coat protein,CP）分段表达为有重叠部分的小段多肽,以其为抗原通过Western blot分析PVY-CP的抗原表位。以P/N值最大为标准,通过常规双抗夹心ELISA（DAS-ELISA）对识别不同抗原表位的单克隆抗体（monoclonal antibody,MAb）进行配对试验,筛选一组检测效果最优的配对单克隆抗体,并确认捕获抗体和检测抗体。通过方阵滴定法确定捕获抗体及检测抗体的最佳工作浓度,通过控制变量法确定检测抗体与抗原的最佳共同孵育时间。以不同浓度的PVY-CP蛋白为抗原,检验快速DAS-ELISA的灵敏度。以感染不同病毒的马铃薯样品为抗原,检测快速DAS-ELISA的特异性。同时通过快速DAS-ELISA与RT-PCR检测50份田间采集的疑似感染PVY的马铃薯样品,将二者结果相比较检验检测方法的符合率。运用建立的快速DAS-ELISA对不同株系PVY感染的马铃薯样品进行检测。【结果】利用PVY-CP的6条分段表达多肽筛选到一组能进行DAS-ELISA的配对单克隆抗体（9G6和3D3）,并以这对单抗为基础建立了PVY快速DAS-ELISA检测方法。以9G6为捕获抗体包被酶标板,检测抗体3D3经辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase,HRP）标记后以2 μg·mL^-1的工作浓度与抗原在37℃共同孵育5 min。该检测方法检测限为0.5 ng·mL^-1,特异性分析结果显示该法仅在检测感染PVY的马铃薯样品时呈阳性反应,检测马铃薯S病毒（potato virus S,PVS）、马铃薯M病毒（potato virus M,PVM）、马铃薯卷叶病毒（potato leaf-roll virus,PLRV）等其他常见马铃薯病毒样品均呈阴性反应。通过快速DAS-ELISA与RT-PCR同时对50份田间采集的马铃薯样品进行检测,有48份样品检测结果一致,符合率达96%,且对PVY^N及PVY^O样品检测结果均呈阳性。【结论】建立的PVY检测方法灵敏度高、特异性强,30 min即可完成检测,方便快捷,为PVY的高通量检测、脱毒种薯的生产提供了关键技术支持。