抗GST单克隆抗体的制备及应用

用纯化的重组GST(谷胱甘肽S-转移酶)蛋白免疫BALB/C小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,对杂交瘤细胞及时筛选,阳性孔经三次有限稀释法克隆,成功获得4B3和1H10共2株能稳定传代并分泌抗GST单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞.2株单克隆抗体腹水间接ELISA效价达10-6,抗体类型均为IgG1,κ链,经Western-blot分析表明,2株单抗与GST-IBV-S1-F融合蛋白及重组GST蛋白均具有特异性反应,验证这2株单抗可用于检测GST融合蛋白的表达情况;用1H10单抗制备的亲和凝胶柱可用于GST融合蛋白的纯化.     

马铃薯X病毒云南分离物单克隆抗体的制备及其检测应用

用马铃薯X病毒(Potato virus X,PVX)免疫的BALB/C鼠脾细胞与SP2/0鼠骨髓瘤细胞融合,经筛选克隆,获得2株能稳定传代并分泌抗PVX单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞2B12和4E7,并分别制备它们的单抗腹水.2株单克隆抗体腹水间接ELISA效价在10-6以上,2B12和4E7的抗体类型及亚类均为IgG1,轻链均为κ链.利用这些单克隆抗体建立了抗原包被的间接ELISA(ACP-ELISA)检测PVX的方法.病叶经1:600倍稀释、提纯PVX病毒浓度为2 ng/mL(每孔的病毒绝对量为0.2 ng)时,该方法仍能检测到病毒.利用ACP-ELISA方法测定了田间样品,发现PVX在马铃薯上发病很普遍.     

SARS-CoV核衣壳蛋白的体外表达及单克隆抗体功能鉴定

为对SARS N蛋白的功能进行研究,并建立快速、方便的诊断方法,将已克隆、构建成功的重组质粒PGEX-4T/N转化至E.coli BL21中,IPTG诱导表达,表达产物与兔源GST多抗在66 kD处有很强的反应性,融合蛋白GST-N分别通过GSTrap FF 1 mL纯化柱和割胶纯化两种方法获得了具有生物活性和变性的融合蛋白.其蛋白浓度分别为0.85 mg/mL和0.433 mg/mL.利用纯化的GST-N蛋白免疫SPF BALB/c小鼠,获得4株能稳定传代并分泌抗SARS N单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞,分别命名为3E5、6B9、4C2、4B7,经Western blot分析表明,所获得的4株抗SARS N单克隆抗体与纯化的N蛋白均具有特异反应性,且不与禽冠状病毒的N蛋白发生反应.     

单克隆抗体夹心ELISA检测蚕豆萎蔫病毒研究

利用 ２ 株特异性单抗,建立了检测蚕豆萎蔫病毒（ＢＢＷＶ）的灵敏度高、特异性好的单抗夹心ＥＬＩＳＡ 方法⒚经测定,ＭｃＡｂ 最适包被浓度为０４ μｇ／ｍ Ｌ,ＨＲＰＭｃＡｂ 最佳工作浓度为１∶２ ０００,该方法最小检出浓度为０１６ μｇ／ｍ Ｌ,与几种常见的病毒无交叉反应⒚对杭州地区的 １４０ 多个样本进行了检测,发现蚕豆、豌豆中ＢＢＷ Ｖ 的阳性率达 ８０％ ⒚     

蚕豆萎蔫病毒单克隆抗体研制

用蚕豆萎蔫病毒提纯病毒粒子免疫ＢＡＬ Ｂ／ｃ小鼠,取其脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合,用纯化的ＢＢＷＶ病毒对杂交瘤细胞及时筛选,阳性孔经三次有稀释法克隆,成功获得了２株ＢＢＷＶ特异性单克隆抗体的细胞株,分别命名为４Ｄ１１,３Ｇ１２．２株单抗腹水间接ＥＬＩＳＡ效价高达１：６４００００,抗体类型均为ＩｇＧ１,经Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ分析表明,２株单抗均是针对ＢＢＷＶ ４４．７ｋＤ的外壳蛋白     

转基因植物生产基因工程疫苗技术

用转基因植物生产有用的外源蛋白是一个有吸引力的廉价生产系统，它可能替代传统的外源蛋白生产体系。通过外源基因的瞬时表达或稳定表达方式，多种基因工程疫苗已在植物中表达成功，并保持良好的免疫原性。本文概要介绍了国内外利用转基因植物生产疫苗的研究现状，并对转基因植物生产疫苗的潜在优势、存在的问题及其相关技术作一综述。     

我国部分香稻SSR指纹图谱的构建及遗传相似性分析

以太湖稻区和引自国内其它地区的39个香稻品种以及2个籼型恢复系对照品种为研究材料,利用SSR分子标记进行DNA指纹图谱构建和遗传多样性分析.从已公布的40对水稻SSR引物中筛选出13对核心引物,在这41个水稻品种中共检测到36个多态性片段.据此建立41个水稻品种的DNA指纹图谱,进行聚类分析,发现它们的遗传相似系数在0...     

水稻条纹病毒NS2基因原核表达产物多克隆抗体制备及受侵染水稻和灰飞虱体内NS2检测

 The NS2 gene of Rice stripe virus (RSV) was amplified by RT-PCR, cloned into pGEM-T vector and sequenced. The NS2 gene was inserted into prokaryotic expression vector pET32a to produce recombinant plasmid pET32a-NS2. The recombinant plasmid was introduced into Escherichia coli strain BL21 (DE3) pLysS. SDS-PAGE and Western blot analysis confirmed that NS2 fusion protein was expressed after induction by IPTG. The recombinant NS2 protein was purified with Ni²⁺-NTA agarose affinity chromatography and the polyclonal antibody against NS2 protein was raised in rabbit. NS2 protein was successfully detected in small brown planthopper (Laodelphax striatellus) at 1:1 600 dilution of the total protein of single planthopper and in infected rice (Oryza sativa) at 1:800 dilution of 10 mg leave by dot immunobinding assay using the polyclonal antibody.     

梨树秋季绿枝枝接技术研究

梨树秋季绿枝枝接用于高接换种和嫁接育苗，春季不需剪砧，发芽早，长势强，可很快地形成树冠，嫁接苗可当年出圃，而且秋季可嫁接时间长，接穗随采随接，嫁接成活率可达99.3％。