猪肺炎支原体P46基因的原核表达与间接ELISA方法的建立

猪肺炎支原体是猪喘气病的病原体,本研究选择猪肺炎支原体P46膜蛋白基因亲水区序列进行克隆,并将其内3个编码Trp的TGA突变成TGG,然后再克隆到pET28a(+)载体中,在大肠杆菌BL21 (DE3)细胞内实现了高效表达,表达产物相对分子质量约为31 ku,约占菌体总蛋白35％,表达形式为包涵体,通过Western blotting 证明表达产物与猪肺炎支原体高免血清具有很好的反应原性和特异性.将大肠杆菌表达的猪肺炎支原体P46重组蛋白经过洗涤、过柱纯化后,作为间接ELISA包被抗原用于检测猪血清中猪肺炎支原体抗体,通过对各参数和试剂的优化建立了rP46-ELISA方法,获得了较好的效果,通过与现有ELISA检测方法的比较,结果表明二者间具有较高的符合率.     

支原体污染的检测及鉴定方法研究进展

自1956年国外学者第一次检测到细胞培养物中存在支原体污染以来,这个世界性问题持续了半个多世纪。对于生物制品中支原体污染的检测方法多种多样,但尚无统一的内控标准,而建立一种快速、准确的方法用于支原体污染的检测,可以有效地减少和预防支原体污染,从而提高生物制品的纯净性。本文对支原体污染的几种常见检测及鉴定方法进行综述,包括DNA荧光染色法、PCR、IFA与ELISA等,以期为支原体污染的检测及鉴定研究提供参考。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒7个分离株全基因序列测定及遗传进化分析

为了解猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的变异情况,本研究利用RT-PCR方法对2006年～2009年在我国部分地区分离鉴定的7株PRRSV分别进行9段基因片段扩增,测序分析表明,获得的病毒全基因序列与PRRSV JXA1变异株高度同源。并与GenBank中登录的其他70株PRRSV全基因序列进行遗传分析,根据构建的遗传进化树分析表明,中国大陆PRRSV分离株包含美洲型和欧洲型,美洲型可分为3个亚群,亚群1主要为以JXA1株为代表的病毒株,本研究中的7个分离株均为亚群1,其GP5主要中和抗原表位高度变异;亚群2主要为以CH-1a株为代表的病毒株;亚群3主要为以VR-2332株为代表的病毒株。欧洲型病毒株BJEU06-1、NMEU09-1分属于不同亚型。本实验为深入研究该病毒的遗传与变异及其分子流行病学研究奠定基础。     

猪瘟免疫失败主要原因的解析

猪瘟是严重危害我国养猪业最重要的传染病之一。OIE制定的《国际动物卫生法典》(2002年版)仍将其列为A类法定报告传染病之一。欧美等发达国家通过疫苗免疫、扑杀等综合防制技术措施已消灭了猪瘟。在我国五十年代中国兽药监察所方世杰、周泰冲、李继庚等选育了一株适应家兔后对猪基本无毒力，但却保持良好免疫原性的弱毒疫苗株——中国兔化弱毒疫苗株，国外称为C株，     

鸡新城疫-鸡传染性支气管炎-禽流感-产蛋下降综合征四联灭活油乳剂疫苗的研制与免疫试验

用鸡新城疫La Sota株,鸡传染性支气管炎H120株,产蛋下降综合征127株和禽流感病毒HB1(H9N2)株做为抗原制成油乳剂灭活联苗,并对其进行了物理性状、纯净、安全性、灭活效果、保存期和免疫效力等方面的检验.证明所制备疫苗完全符合质量标准;鸡体对该疫苗4种抗原均产生了良好的免疫应答;攻毒试验证明,免疫鸡能良好地抵抗同种强毒的攻击;所制备疫苗于2～8℃保存12个月后,其免疫效力没有下降.     

3种非猪瘟病毒单独或混合感染对猪瘟弱毒疫苗免疫效力的影响

将 2 0头 9月龄左右猪瘟、伪狂犬、猪繁殖与呼吸障碍综合征抗原、抗体阴性猪分成 6组 ,分别利用猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病毒 (PRV)和猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒 (PRRSV)单独或混合感染。 7d后连同对照猪 4头 ,免疫接种猪瘟兔化弱毒疫苗 (HCL V) ,13d后连同 4头阴性对照猪一起攻击猪瘟石门强毒。整个试验期间分别每天测温 ,观察临床症状 ,每周采集扁桃体和血样做各种病毒抗原及抗体检测。结果表明 ,非猪瘟病毒感染 7d后 ,所有各组猪均从体内检测到了相应感染的病原 ,表明 3种非猪瘟病毒感染成功。在攻击猪瘟石门强毒后 2周 ,感染了非猪瘟病毒后接种 HCL V疫苗的 4个免疫组 12头猪除 1头外 ,11头全为猪瘟病毒 (HCV)抗原检测阳性 ,且多呈强阳性 ;而单一 HCL V疫苗免疫组在猪瘟强毒攻击后检测不到 HCV;所有 HCL V疫苗免疫猪均存活 ,而非免疫对照组 4头猪全部在攻毒 16 d内死亡。     

猪肺炎支原体表面蛋白P46基因的克隆与序列比较

猪肺炎支原体(Mycoplasma Hyopneumoniae,Mhp)兔化弱毒株R659株、济南强毒株、强毒Z株、国际标准株232,通过A26培养基培养,提取DNA;利用PCR技术从四株猪肺炎支原体中均能扩增出目的条带.将该序列克隆到pGEM-T-Easy载体上测序.结果表明,克隆序列全长1 152 bp,编码383个氨基酸和一个终止子(TAA);该序列中含有3个TGA编码Trp,而不是终止密码子.比较兔化弱毒株与济南强毒株、国际标准株232及NCBI上发布的J株的P46基因序列,发现它们的同源性分别为98.6%、99.2%、99.2%;比较它们编码的氨基酸发现它们的同源性分别为98.7%、99.2%、99.2%.结果表明猪肺炎支原体的P46基因在猪肺炎支原体种内是很保守的,因此建立以P46蛋白为诊断抗原的ELISA具有潜在的意义.     

鸡毒支原体病的预防控制

鸡毒支原体病对家禽业的危害有目共睹,文章就该病的诊断、治疗、疫苗接种进行阐述,为有效控制该病提供积极的指导。     

高致病性PRRSV（HuN株）NSP2基因的扩增与分析

从2006年高热病病料中分离到一株猪繁殖与呼吸综合征病毒（HuN株），利用RT-PCR扩增其NSP2基因，通过与标准毒株VR-2332进行比较，发现共有30个氨基酸缺失，其中29个为连续缺失，缺少氨基酸分别位于481、532～560位。将分离株与同时期分离自不同地区高热病毒株的基因序列（EF112445、EF112446、EF112447）相比较，发现全部都具有相同的缺失，这说明引起猪高热病的病原变异不大；与较早期分离的AY150312、AY262352毒株进行比较，发现缺失部位不同。该研究补充和丰富了PRRSV毒株的基因组信息数据，为深入研究该毒株的遗传与变异及其与生物学特性的关系奠定了基础。