猪瘟病毒E0基因在CHO细胞中的表达

将EGFPE0融合基因插入哺乳动物细胞表达载体pCI-dhfr中,构建重组质粒pCI-EGFPE0。将重组质粒转染CHO(dhfr-),在荧光显微镜下观察到少数细胞呈现绿色荧光,表明转染成功。通过MTX加压筛选后,在荧光显微镜下观察到多数细胞呈现强绿色荧光,表明重组融合蛋白EGFPE0在CHO细胞中得到大量表达。高效表达重组融合蛋白细胞克隆的获得为进一步大量制备可溶性的猪瘟病毒E0糖蛋白、制备其单抗筛选抗原表位及研究E0蛋白的生物学功能奠定基础。     

我国华东地区大肠杆菌、沙门氏菌分离和血清学鉴定

作为我国兽医临床耐药性监测计划的一个起步,对目前畜禽耐药菌株流行情况调查分析.2001年在华东地区选择了5个鸡场和1个孵化厂,进行3次追踪采样和抗菌药使用情况调查,共得到样品254份(泄殖腔拭子165份,饲料、水、尘土57份、饲养员粪便32份).分离到大肠杆菌80株,其中泄殖腔拭子有72株,分离率为43.6%;饲料、水和尘土有4份,分离率为7.0%,饲养员粪便有4株,分离率为12.5%.大肠杆菌0抗原血清型有35种,优势型不明显,O15型最多有8株,占10%.多为每个血清型有1～2株.共分离到沙门氏菌2株,血清型均为O9.所有鸡场采样前均使用过抗菌药.这次调查初步了解该地区抗菌药使用情况及两种细菌在该地区的存在状况和血清型分布,为下一步耐药性检测打下基础.     

猪肺炎支原体膜蛋白P46基因在大肠杆菌中的表达

把猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae)国际标准株232的P46基因克隆进pGEM-T-EASY载体上,通过PCR方法把该基因中三个编码Trp的密码子TGA突变为TGG,然后将该基因亚克隆到载体pMAL-P2X上,得到重组表达载体pMAL-P2X-P46.用该重组载体转化大肠杆菌TB1,得到表达重组菌TB1-pMAL-P2XA-P46,用终浓度为0.3 mM的IPTG在37℃下诱导表达,获得可溶性表达的融合蛋白MBP-P46,在免疫印迹试验中,兔抗MBP高免血清和兔抗猪肺炎支原体高免血清都能与目的蛋白发生阳性反应,证明猪肺炎支原体P46基因在大肠杆菌里获得了可溶性表达.该融合蛋白对于建立特异性和敏感性好的EIISSA方法具有重要意义.     

猪瘟病毒持续感染与猪瘟预防控制

研究证明,在自然条件下,猪瘟病毒持续感染通常是在免疫力较低的情况下,由于环境中的病毒反复感染产生的,由于感染猪还有一定的免疫力,病毒虽然可以在其体内局部存留,但还不足以引起猪发病.一般情况下,感染猪虽然持续带毒,但不表现临床症状,然而却可以不断向外排毒,再次感染其他猪,污染环境;带毒的种猪可以通过母猪的胎盘和公猪的精液传播给仔猪,造成仔猪的先天免疫耐受,导致疫苗免疫失败.实验还证明,即使在良好的免疫状况下,反复多次人工感染猪瘟强毒也可造成持续感染.由此可见,猪瘟病毒持续感染是一个复杂的问题.     

非典型性猪瘟的诊断和防制

作者从非典型猪瘟的表现形式入手,分析了其病因,并提出了防制措施.     

我国兽用生物制品研制、生产、流通领域中的生物安全问题和应该采取的措施

生物安全是当前人们普遍关心的问题,它的影响涉及国家安全、人类社会及生态环境等诸多方面,其中由病原微生物引起的生物安全问题直接关系到动物疾病和人类健康,其重要性尤为突出,当前一些传染病的流行与我们的生物安全防范意识薄弱,措施不当有着直接的关系,必须引起我们的高度重视。我国兽用生物制品生物安全的管理问题主要表现在以下两个方面:一是如何进一步加强对兽用疫苗的质量管理和流通领域的监控,二是严格规范和控制从事动物病原微生物操作的实验室生物安全条件。对前者,我们有相应的法律法规和管理办法,关键的问题是如何进一步落实的…     

鸡毒支原体平板凝集反应阳性血清的研制

鸡毒支原体平板凝集反应阳性血清的研制宁宜宝，冀锡霖（中国兽药监察所北京，１０００８１）前已报道（冀等１９８４）［１］为了将国内生产的鸡毒支原体诊断抗原检测方法与国际接轨，于１９８２年制出国内参考抗血清，每毫升抗血清含有３０００国际单位，每２．５个单位...     

实验室人工感染诱发猪瘟野毒垂直传播

利用2头人工感染中等毒力猪瘟野毒耐过猪进行配种,诱发了猪瘟野毒垂直传播.带毒母猪于带毒后171 d产下9头仔猪,其中3头为死胎,6头为木乃伊.直接免疫荧光抗体试验和RT-PCR检测,9头均为阳性.测序结果表明,3头测序仔猪中,2头仔猪所分离病毒E2基因主要抗原编码区序列与公猪所接种病毒的一致;另1头仔猪所分离病毒E2基因主要抗原编码区序列与公猪所接种病毒的同源性高于与母猪所接种病毒的同源性.母猪在与公猪配种前后,其所分离病毒E2基因主要抗原编码区序列发生了变化,配种后与公猪所分离病毒的一致,说明猪瘟病毒在猪体内的繁殖存在一定的优势选择现象.     

表达猪瘟兔化疫苗株E0蛋白的PK-15细胞系构建

将克隆到pGEM T-easy载体中的E0基因双酶切回收后，连接到增强型绿色荧光蛋白（EGFP）中，利用Lipofectamine^TM2000将重组子转染PK-15、BHK-21、VERO 3种细胞，直接在荧光显微镜下用蓝光激发进行观察，在3种细胞中都可以观察到绿色荧光，而且在转染后的24、48、72 h 3个时间点上，观察到的荧光细胞数量逐渐增多，在72 h时荧光细胞的数量在3种细胞中都达到最多，总的来看，在PK 15中荧光细胞的数量最多。通过对细胞荧光的定位发现，重组质粒的荧光主要分布在胞浆内，而且细胞核周围的荧光较强，胞核与胞浆的界限明显，尤其是在PK-15细胞和VERO细胞中这种现象尤为明显。未携带E0目的DNA的pEGFP-N1 Vector转染3种细胞后，都可以观察到绿色荧光，但是整个细胞中是均匀出现荧光的。经酶切、PCR、单抗间接免疫荧光检测，PK-E0细胞中有大量的HCLV的E0表达，单纯的PK-15细胞中没有E0的表达。HCLV株在PK-E0细胞中从48h开始到72h的滴度比在PK-15细胞中的滴度要高。证明PK-E0细胞中E0蛋白的大量表达增加了HCLV在细胞中的复制。     

我国南方猪高热病的研究(Ⅰ)——大肠杆菌的分离、鉴定和致病性测定

从湖南3个高热病发病猪场11头病死猪的病料组织中均分离出了大肠杆菌,经血清学鉴定,鞭毛抗原(K88、K99、987P和F41)全为阴性反应。经过157种菌体抗原血清学检测,血清型为5、6、15、22、32和83型。药物敏感试验结果表明,分离的大肠杆菌对大多数常用药物耐药,对氟喹诺酮和头孢类药物敏感。将其中4头猪原代分离的大肠菌培养物以原倍(2×107个/mL)、104和108稀释的菌液分别感染18~22 g小白鼠,原倍菌液感染的小白鼠12/30在感染后24 h内出现死亡,而104和108稀释菌液感染的小白鼠均健活;将未经除菌的病死猪组织悬液、过滤除菌的组织悬液、大肠杆菌、过滤除菌的组织悬液及大肠杆菌分别感染30日龄左右的健康小猪,除未经除菌的组织悬液感染猪3/3发病,2/3死亡外,其余所有感染猪只出现体温升高,升幅达1~2℃,减食,精神萎靡,但没有死亡;将死亡猪再次分离到的大肠杆菌感染小白鼠和猪,小白鼠12/15出现死亡,感染猪只出现体温升高(超过1℃),没有出现死亡。结果证明:大肠杆菌在高热病的发病过程中只起协同诱发作用,引起猪发病死亡的真正原因可能是病毒感染。