猪细小病毒LAMP检测方法的建立

 【目的】建立一种快速、敏感、特异的检测猪细小病毒(PPV)环介导等温扩增(LAMP)方法,为诊断猪细小病毒提供准确可靠工具。【方法】根据GenBank公布的PPV序列,在其保守序列区域设计了多套LAMP引物,利用LAMP Real Time Turbidimeter LA-320仪监测反应进程并筛选最佳引物、反应条件,建立了对PPV病毒DNA进行特异扩增的 LAMP检测方法,并可通过加入SYBR Green I肉眼判断结果。【结果】该方法在63℃恒温下作用45 min,PPV病毒DNA获得了高效率的特异性扩增;其检出限量为0.23 TCID50,敏感性高;在反应结束后加入SYBR Green I肉眼判断结果,与Real Time Turbidimeter LA-320仪监测结果一致。通过对20份临床样品的LAMP检测与免疫荧光鉴定、PCR方法比对,符合率均为20/20。【结论】本研究建立的PPV LAMP检测方法具有快速、特异、灵敏,操作简单、设备要求低的特点,适合用于临床PPV快速检测。     

从全长cDNA克隆恢复猪瘟病毒方法的研究

以携带猪瘟病毒Thiverval株全长cDNA克隆的pAC/F101/T1-7载体质粒为模板,在体外转录病毒基因组RNA,并转染PK-15和BHK-21细胞,通过传代、RT-PCR、免疫过氧化物酶细胞单层试验鉴定,成功地在两种细胞中拯救出具有感染性的病毒粒子。同时,通过2种细胞转染效率的对比试验,成功建立了利用高转染效率的其它真核细胞作为病毒拯救的过渡细胞,然后再在猪肾细胞系上进行增殖的病毒拯救方式,极大提高了猪瘟病毒拯救的效率。     

不同增菌液和培养基对沙门菌分离效果的比较研究

通过对各种增菌液和培养基的比较以及组合筛选,选择一种较为有效和简便的分离沙门菌的方法.采用6种常用的选择性培养基对9种血清型的沙门菌以及常见的共生肠道菌大肠杆菌和阴沟肠杆菌分别进行培养,根据生长特点对选择性培养基进行初步筛选,然后对3种常用选择性增菌液进行筛选,将筛选出的增菌液与培养基进行不同组合,检测各血清型沙门菌与大肠杆菌、阴沟肠杆菌的混合物在不同组合中的增菌和分离效果,并对其进行评价.研究结果表明,最佳分离培养方案为样品经SC和TTB增菌后再用显色培养基或者XLT4培养基进行选择性培养.本研究结果优化了沙门菌的常规分离培养方法,可用于不同样品中沙门菌的分离培养,提高沙门菌分离率.     

中国猪瘟风险评估框架的构建

为量化评估我国发生猪瘟的风险,本研究通过分析影响猪瘟发生的风险因素,确定7个风险因素12个子风险因素.遵循指标选择原则,将风险因素按照传染源、传播途径、易感动物3个风险来源归纳为9个风险评估指标,并采取层次分析法、模糊综合评价法和多指标综合评价法,探索构建由评估指标体系、指标权重、评价标准、综合评价函数组成的猪瘟风险评估框架.以西南某地区和华中某地区为例对该框架进行初步验证,风险评估结果为2008年西南某地区和华中某地区均为猪瘟发生高风险地区,风险概率分别为0.91996和0.69332.经与两地区2008年发生猪瘟疫情情况进行比较,表明该框架具有一定的可操作性,评估结果与疫情发生情况具有一定的相关性.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白抗体ELISA方法的现状与展望

猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)又称猪蓝耳病,是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起猪的一种以繁殖障碍为主的传染病.ELISA血清学检测是目前蓝耳病抗体检测最常用的方法,本文重点以检测PRRSV衣壳N蛋白产生的抗体建立起的ELISA方法进行论述,以期在猪蓝耳病抗体ELISA方法研究和选用方面有所帮助.     

猪瘟病毒低毒力毒株FJFQ株的分离鉴定

从福建某猪场分离到 1 株病毒,其在PK 15细胞上的毒价为 106.5 TCID50/mL,该病毒能被猪瘟病毒高免血清所中和(效价为1∶8)。通过 RT -PCR 扩增出猪瘟病毒约250 bp的E2蛋白主要抗原编码区序列,其与几株已发表毒株序列的核苷酸及氨基酸同源性分别为79.9%~87.9%,77.7%~86.6%,与Alfort 株同属于基因二群。经本动物传3代均不表现明显的临床症状。用猪瘟兔化弱毒疫苗免疫后以此分离毒作强攻进行免疫保护相关实验,结果免疫组猪在攻毒前及攻毒后扁桃体 HCFA检测均为阴性,对照组猪扁桃体HCFA于攻毒后1周开始出现阳性结果,且一直持续到试验结束。用分离株免疫本动物后再攻石门毒, 2 头试验猪中 1 头死亡,1头出现临床症状。初步说明,所分离的病毒为猪瘟病毒(命名为CSFV- FJFQ株),可能是一株低毒力毒株,且其免疫原性不好。     

猪瘟抗体间接ELISA检测试剂盒的研制和应用

对猪瘟抗体间接ELISA检测试剂盒的稳定性及保存条件等进行了摸索,确定该试剂盒具有良好的稳定性,并可在2℃～8℃环境中的保存9个月。同时,测定了本试剂盒与荧光抗体病毒中和试验的符合率为92.62%;并将该试剂盒应用于免疫动物抗体的动态监测。     

国内部分猪瘟病毒流行株抗原性分析

为分析我国猪瘟病毒(CSFV)流行株的抗原性差异及其与特异性单克隆抗体(MAb)反应性之间的关系,本研究采用CSFV强弱毒鉴别MAb通过ELISA方法对我国流行的29株分离株进行抗原反应性研究,结果显示针对弱毒株MAb(MAb11)除3株为阳性外,其余均为阴性;而这些分离株可以被强毒MAb(MAb56)分为强反应和弱反应两组。同时对29株分离株E2基因的190 nt进行同源性分析,并将其分为3个亚群,即1.1、2.1和2.2;氨基酸序列具有一致独特的位点差异规律,强反应组(761G、764L)和弱反应组(761R或K、764P)分别具有2个独特的差异位点。推测761G和764L是针对MAb56与CSFV抗原结合的关键位点。