猪瘟病毒E2基因密码子优化后在昆虫细胞中的表达

将猪瘟病毒E2基因密码子改造后,克隆入pFastBac1质粒载体,经转座、转染后构建重组杆状病毒.并对表达产物进行鉴定分析.结果:E2基因改造后与设计序列一致;成功获得了重组杆状病毒(BAC/SE2M),采用猪瘟E2单抗WH303进行Western-blot和ELISA鉴定,证明:表达的CSFV E2蛋白特异性好,纯化后的E2蛋白,可用于猪瘟抗体检测试剂盒的开发.     

我国猪瘟流行新特点与疫苗免疫研究

<正>近年来,猪瘟在我国出现了一些新的流行动向值得我们特别关注。疫苗免疫一直是控制猪瘟最为有效的方法,尽管我们培育出了享誉世界的猪瘟兔化弱毒疫苗株,但疫苗生产工艺一直是困扰我国猪瘟疫苗质量的一个非常头疼的问题,经过几十年的潜心攻关,我国成功的研究出了猪瘟活疫苗(传代细胞源),从根本上解决了猪瘟疫苗生产中存在的问题,有效地提高了疫苗质量,为我国完全控制以至消灭猪瘟提供了可靠的技术保障。     

猪细小病毒PCR检测方法的建立及应用

根据已报道猪细小病毒基因组序列,设计合成了一对特异引物,通过对影响PCR扩增因素的筛选,确定PCR检测的最佳条件,成功扩增出预期的1980bp片断。特异性和敏感性试验结果发现:该方法特异、敏感,可以检测到0.9TCID50、0.001个HA的病毒。用该方法对用ZH株免疫妊娠母猪后第7、14、21天血液及胎儿样品进行检测,在血液和所采组织样品中均未检测到PPV病毒抗原,说明ZH株免疫后不产生病毒血症,也不能通过胎盘垂直传染给仔猪。     

探索无止境

1科研工作方面作为课题主持人和执行人,开展的研究工作和取得的成绩有:●鸡毒支原体疫苗、诊断试剂和方法及综合防治技术研究。①研究出了用于鸡毒支原体和滑液支原体感染的血清平板凝集抗原,这两种抗原敏感、特异,使用方便,分别获得了农业部颁发的新兽药     

用生物信息学手段辅助分析猪瘟病毒的基因结构

借助生物信息软件,对猪瘟病毒的分子演化关系、RNA 3'端非编码区(NTR)序列及二级结构、E2基因的亲水性及抗原指数等进行了辅助分析.经检索得到CSFV全长序列23条,序列片段369条.确定了AF352565(LPC)株的碱基缺失在ORF的1174～1176位.采用基因组序列的全长ORF进行了比对并绘制了进化树,对E2基因的亲水谱与抗原指数进行计算,推测E2基因抗原性变化不大,但不同毒株之间可能存在微小差异.比较了CSFV 3'端NTR的序列并预测了3'端NTR的RNA二级结构,表明不同毒株之间存在较多差异.     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征 GD强弱毒株感染对猪外周血淋巴细胞亚群的影响

为了从细胞水平探讨PRRSV GD强毒株和PRRSV弱毒疫苗接种仔猪后对其外周血淋巴细胞亚群的影响,运用血常规技术和流式细胞技术分析了猪体外周血淋巴细胞亚群的动态变化。将30日龄20头SPF猪分成3组,分别感染HP-PRRSV GD第5代强毒株、GDr180弱毒疫苗株及留作对照。于感染后第0、3、7、10、14、21、28及35天采血进行外周血淋巴细胞亚群测定,分析淋巴细胞亚群的变化。结果表明:HP-PRRSV GD强毒株感染可导致白细胞、淋巴细胞数量、单核细胞、粒细胞、B细胞、Tc细胞、Th细胞、Tm细胞、和γδT细胞数量的下降;而弱毒疫苗GDr180株免疫则表现为白细胞、淋巴细胞、单核细胞、引起粒细胞、B细胞、Tc细胞、Th细胞和Tm细胞的上升,对γδT细胞的影响不大;阴性对照组在整个检测期间各种细胞基本上保持稳定状态。从实验结果可以看出:与HP-PRRSV GD强毒株破坏免疫细胞不同,PRRSV弱毒疫苗GDr180株免疫接种能刺激猪免疫细胞增殖,给试验猪提供良好的免疫反应。     

我国动物源细菌耐药性数据库的建立与应用

为加强全国动物源细菌耐药性监测数据统一管理,实时掌握我国动物源细菌耐药性的流行动态,中国兽医药品监察所联合多家国内细菌耐药性监测单位,开发了我国的动物源细菌耐药性监测数据库。该数据库为B/S架构,全国不同地区动物源细菌耐药性监测实验室均可通过网页浏览器连接服务器,实现了监测数据即时储存、统计分析和上报,为我国兽医临床细菌耐药性监测提供了重要的技术支持。     

壮观霉素对体外鸡毒支原体的抑菌试验和对鸡体内鸡毒支原体病的治疗试验

1　材料与方法1 .1　试验药物　壮观霉素为水溶性粉剂 ,批号940 71 2 ,由中国医学科学院医药生物技术研究所北抗药厂生产。对照药物壮观霉素 ,水溶性粉剂 ,由比利时生产 ,批号 573KS,由中国医学科学院医药生物技术研究所提供。1 .2　鸡毒支原体菌种　 R株、S6株 ,均由中国兽医药品监察所保存。1 .3　试验鸡　 9日龄北京白鸡 ,试验前经血清学检测 ,该鸡为鸡毒支原体血清学阴性反应。1 .4　鸡毒支原体血清平板凝集抗原　由中国兽医药品监察所生产 ,批号为 930 1。1 .5　抑菌试验　试验前将试验药壮观霉素用蒸馏水配成一定浓度的溶液过滤除菌…     

鸡群健康的潜在杀手--鸡毒支原体病的防制

鸡毒支原体病也称鸡慢性呼吸道病 ( CRD) ,除鸡、火鸡以外 ,鹌鹑、鸽子、珍珠鸡和一些观赏鸟类也可感染本病。该病呈世界性分布 ,是造成养鸡业重要损失的疾病之一。1　我国鸡群中鸡毒支原体病的危害根据对全国 2 0个省、市的血清学调查发现 ,鸡群中鸡毒支原体阳性感染率接近 80 % [1] ,鸡慢性呼吸道病已成为鸡场最难控制的疾病之一。在临床上 ,感染鸡通常表现为呼吸道症状 ,咳嗽 ,气管罗音 ,在感染严重的雏鸡群 ,可清楚的听到气管发出咝咝的声音 ,部分鸡张口呼吸 ,有的伸直脖子 ;从鼻孔中流出鼻涕 ,开始为清水样 ,到后期变成粘稠的脓样分…     

实时荧光PCR技术快速定量检测H5亚型禽流感病毒

选取H5亚型禽流感病毒血凝素(Hemagglutinin,HA)基因保守序列,使用Primer Express 2.0软件设计出特异性引物和TaqMan MGB探针,利用实时荧光PCR技术来定量检测禽流感病毒。使用含有选定检测序列的RNA标准品做标准曲线,结果表明该方法的灵敏度为10拷贝/反应,标准曲线的相关系数为0.998003,对H9亚型禽流感病毒和其他禽病病毒无交叉反应,特异性好、重复性佳。为禽流感病毒检测提供了一种特异、敏感、快速的定量检测方法。