鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及生物学特性研究

从通辽地区养鸭场病死鸭的脑、肝、脾脏组织和心脏血中分离到4株细菌,经对分离菌进行染色、形态观察及生化鉴定,其中3株鉴定为Ⅰ型鸭疫里默氏杆菌,1株为Ⅱ型鸭疫里默氏杆菌。经动物回归试验,表明该菌对雏鸭有较强的致病力。对4株鸭疫里默氏杆菌进行了12种常用抗菌药物药敏试验,结果4株鸭疫里默氏杆菌分离株对头孢曲松、头孢唑啉、复方新诺明高度敏感,对强力霉素、新霉素、红霉素中度敏感,对庆大霉素、卡那霉素、四环素、环丙沙星、氨苄青霉素、丁胺卡那等均不同程度地产生耐药性。     

广东地区鸭疫里默氏杆菌RAPD分型研究

为了解广东地区鸭疫里默氏杆菌的流行情况,研究采用随机引物初步建立了鸭疫里默氏杆菌RAPD扩增多态性方法,对分离自广东地区的20株鸭疫里默氏杆菌进行鉴定。结果显示:20株鸭疫里默氏杆菌产生16种不同的指纹图谱;有些鸭场存在两种或两种以上基因型的菌株并且不同鸭场流行基因型不一样。该结果可为该地区鸭疫里默氏杆菌病的防治提供参考。鸭疫里默氏杆菌RAPD指纹图谱存在丰富的多样性,可用于鸭疫里默氏杆菌的快速基因分型及分子流行病学调查。     

鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定

从广州市郊区几个鸭场发病或死亡鸭的脑、心血、肝、脾等组织中分离到6株革兰氏阴性杆菌,经形态学检查、生化试验、动物实验等鉴定均为鸭疫里默氏杆菌。通过凝集试验和琼脂扩散试验鉴定：2株为鸭疫里默氏杆菌Ⅰ型,4株为鸭疫里默氏杆菌Ⅱ型。     

鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及药敏试验

对武汉周边地区发病鸭场的病死鸭进行了病理剖检,直接从病死鸭肝脏、心血及脑组织中进行细菌分离培养,通过培养特性、生化鉴定、动物回归试验确定为鸭疫里默氏杆菌感染.分离到8株鸭疫里默氏杆菌,对分离株进行了药敏试验,结果表明分离株对头孢唑啉钠、先锋V、丁胺卡那霉素、新霉素、氨苄青霉素的敏感性较高.     

广东地区鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及双重PCR检测方法的建立

对来自广东地区疑似鸭疫里默氏杆菌病的病鸭组织进行了病原菌的分离培养和生化鉴定,确定得到20株鸭疫里默氏杆菌,动物回归试验结果表明,分离的鸭疫里默氏杆菌具有很强的致病性.对这20株鸭疫里默氏杆菌进行的药敏试验表明,分离株已广泛产生耐药性.参照已经发表的2对引物以细菌全菌体为模板建立双重PCR方法,结果均能扩增出2条目的片段,经测序证实为鸭疫里默氏杆菌,而对鸭源大肠杆菌、鸭源禽多杀性巴氏杆菌、鸭源沙门菌和鸭源葡萄球菌的扩增结果均为阴性.说明建立的双重PCR方法能快速、准确的检测出鸭疫里默氏杆菌,并具有高度特异性,可用于鸭疫里默氏杆菌的快速鉴定和快速诊断.     

宜良商品肉鸭鸭疫里默氏杆菌的初步研究

从宜良等地 198份病、死鸭组织中分离到 5 2株鸭疫里默氏杆菌 (RA)。并进行了生理生化、药敏、血清学、免疫学试验。试验结果表明 :5 2株鸭疫里默氏杆菌 (RA)有 3个优势血清型 ;RA对氨苄青霉素、头孢噻吩、头孢氨苄、左旋氧氟沙星、硫酸安普霉素等药物敏感 ,对链霉素、柱晶白霉素等药物不敏感 ;受试菌株制备的灭活疫苗免疫雏鸭后 ,对同原菌株的攻击显示出良好的免疫保护。     

鹅源血清11型鸭疫里默氏杆菌分离株生物学特性分析

从福建漳州某鹅场死亡鹅体内分离到1株细菌,经形态观察、生化试验和PCR鉴定确定为鸭疫里默氏杆菌。凝集试验表明其为血清11型菌株,该菌对阿莫西林、氨苄青霉素、氟苯尼考、复方新诺明、头孢唑啉、氧氟沙星、壮观霉素和左氧氟沙星敏感,对丁胺卡那霉素、多黏菌素、红霉素、环丙沙星等12种药物不敏感,属于多重耐药的鸭疫里默氏杆菌。     

鸭疫里默氏杆菌培养特性的研究

鸭疫里默氏杆菌标准1型和2型与野毒株进行各种培养基培养特性的对比,并利用标准1型和2型菌株免疫的实验鸭鲜血制备成鸭疫里默氏杆菌鲜血平板,建立鸭疫里默氏杆菌鲜血平板实验室初步鉴别诊断法。结果表明:不同来源的鸭疫里默氏杆菌在显微形态、生化试验略有不同;不同培养基上鸭疫里默氏杆菌表现出不同的生长速度,不同来源的鸭疫里默氏杆菌在固体培养基上的菌落形态大小、显微形态略有不同;鸭疫里默氏杆菌鲜血平板能对标准1型、2型、鸭疫里默氏野毒株、大肠杆菌、巴氏杆菌及疑似里氏杆菌进行实验室的初步鉴别诊断。     

一例鸭疫里默氏杆菌病的实验室诊断

为确诊贵州省三穗县某养鸭场疑似鸭疫里默氏杆菌感染病例,通过实验室细菌分离培养、生化试验、PCR检测及基因测序对病原进行鉴定,并进行药物敏感性试验。结果:分离细菌为革兰氏阴性杆菌;生化特征与鸭疫里默氏杆菌相符; PCR检测及基因测序与鸭疫里默氏杆菌OmpA基因同源性达100%;药敏试验对卡那霉素、新霉素、哌拉西林3种抗菌素高度敏感。结论:确诊病例为鸭疫里默氏杆菌病,可根据药敏试验结果选择高敏药物进行防治。     

木姜子油对鸭疫里默氏杆菌和黄曲霉菌的体外抑菌效果

为探究木姜子油对鸭疫里默氏杆菌和黄曲霉菌的抑菌效果,本试验以木姜子油为试验材料,采用平皿打孔法测定不同浓度的木姜子油对鸭疫里默氏杆菌和黄曲霉菌的抑菌效果。结果显示,木姜子油对鸭疫里默氏杆菌和黄曲霉菌均有很好的抑菌作用,为研究新的抗菌药物及新药研发提供指导作用。     

江西地区鸭疫里氏杆菌的鉴定及药敏试验

从江西部分地区的25份临床疑似鸭疫里氏杆菌(RA)病例中分离到19株RA。生化特性测定结果表明,19个RA菌株的过氧化氢酶、尿素酶均为阳性,除1株发酵葡萄糖、1株发酵麦芽糖外均不发酵各种糖类,5个RA菌株能液化明胶,15个RA菌株氧化酶阳性,不产生H2S,不还原硝酸盐,吲哚试验、MR试验、VP试验均阴性;80%的菌株对头孢曲松、头孢哌酮、头孢唑啉、罗红霉素等高度敏感,而对阿米卡星、庆大霉素、复方新诺明、卡那霉素、青霉素等耐药。     

武汉地区鸭疫巴氏杆菌的分离鉴定

２０００年３～５月,对送检于华中农业大学兽医院的病鸭进行病理剖检及细菌分离鉴定,确定送检病例５０％以上由鸭疫巴氏杆菌（ＰＡ）引起,其发病日龄为７～５０日龄。从病鸭的脑脊液、心血、肝等均易分离到ＰＡ。药敏试验显示所有菌株对氯霉素高度敏感。此次试验结果说明,在武汉地区鸭疫巴氏杆菌确已存在,并已成为严重危害当地养鸭业的重要疾病之一。     

1型鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及基因组文库的构建

从临床病鸭中分离并鉴定了1型鸭疫里默氏杆菌,并在提取鸭疫里默氏杆菌的基因组DNA后,用Sau3A I酶切,回收大小为0．07～4 kb的片段;将酶切片段与酶切的质粒载体pRSET连接后,电转化大肠杆菌Rosetta,成功构建了1型鸭疫里默氏杆菌的基因组文库,经检测库容量约为40000个。随机筛选30个单菌落,用pRSET通用引物进行PCR鉴定,统计结果显示插入片段的大小93．3％在1～3 kb范围内,成功构建了鸭疫里默氏杆菌基因组文库,为鸭疫里默氏杆菌功能基因的克隆及鉴定奠定了基础。     

鸭疫里默氏杆菌免疫原性研究Ⅱ.荚膜提取物免疫原性测定

本研究对Ⅰ型鸭疫里默氏杆菌的荚膜提取物的免疫原性进行了研究，结果表明，荚膜粗提物和经过苯酚抽提纯化后的荚膜提取物经２次免疫７日龄北京鸭后对同源细菌的攻毒保护率分别为９０％和７０％；采用ＥＬＩＳＡ检测荚膜提取物免疫后抗体产生规律显示，二者刺激机体产生的抗体水平有一定的差异，荚膜粗提物免疫组抗体水平高于纯化后的免疫组，前者抗体下降速度较后者慢。     

1株无致病力的鸭疫里氏杆菌的分离及鉴定

从安徽和县无病鸭场的健康鸭咽部分离到1株革兰氏阴性短杆菌,定名为LY-58株。经分离培养、形态学检查、生理生化试验、血清学鉴定及PCR鉴定,分离菌株被鉴定为2型鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)。毒力实验显示,2型RA参照菌株RAF2对10日龄北京鸭的LD50为5.57×107CFU,而分离菌株LY-58的LD50大于1.0×1010CFU,可确定为无致病性。     

Taxonomy of pasteurella anatipestifer. 1. DNA base composition and DNA-DNA hybridization analysis

DNA was isolated from 15 strains of Pasteurella anatipestifer and from one strain each of Moraxella nonliquefaciens, M. bovis, Pasteurella multocida, P. haemolytica, P. gallinarum, P. pneumotropica, and P. ureae. The guanine-plus-cytosine contents of P. anatipestifer ranged from 32 to 35 mole %, whereas those of Moraxella and Pasteurella spp. were much higher, ranging from 40 to 45 mole %. DNA-DNA hybridization analysis revealed that homology of nine P. anatipestifer strains to strains ATCC 11845 and PA 15 was 52 to 100%, whereas homology of Moraxella and Pasteurella strains to these strains was only 3 to 17%. Similarly, homology of P. anatipestifer strains, Moraxella, and Pasteurella species other than P. multocida to P. multocida reference strain P-2192 was low. These results strongly suggest that P. anatipestifer is genetically unrelated to either Pasteurella or Moraxella.     

一株鹅源鸭疫里氏杆菌与鸭源分离株的致病性比较

从某发病的鹅场分离到 1株血清 1型的鸭疫里氏杆菌 ,与同地区分离到的 1株血清 1型鸭源鸭疫里氏杆菌分离株 ,分别经腿肌注射的途径攻雏鸭和雏鹅。结果表明鸭源分离株对雏鸭和雏鹅的致病性比鹅源分离株强 ,而且这 2株鸭疫里氏杆菌对雏鹅的致病性比雏鸭强     

北京地区鸭传染性浆膜炎的流行病学调查

１９９７ 年１０ 月～１９９８ 年１２ 月, 从北京地区３０ 个商品鸭场随机收集自然死亡鸭５６１ 只, 经过病理剖检和细菌分离鉴定, 确定２９ 个鸭场存在鸭传染性浆膜炎, ６１ ％ 的病例患有本病, 其日龄范围为７ ～４２ 日。结果说明,一年四季中, 鸭传染性浆膜炎均是引起北京地区肉鸭死亡的主要疾病, 广泛分布于该地区各养鸭场; 肉鸭日龄越小, 对本病越易感, 随着肉鸭日龄的增加, 尤其在５ ～６ 周龄后, 肉鸭对本病的抵抗力增加。从死亡鸭的脑、心血、肝脏、脾脏和胆囊均易分离到鸭疫里氏杆菌, 但从脑组织最易分离到该菌; 共分离到鸭疫里氏杆菌４２１ 株, 分别属于１ 、２ 、６ 、１０ 、１３ 、１４ 型, 其中１ 、２ 、６ 、１０ 型占总分离株的９６ ％ , 是目前主要流行的血清型。给健康鸭注射各血清型分离株的液体培养物均可复制出鸭传染性浆膜炎的临床症状和病理变化, 并引起鸭死亡。１０９ 株受试菌对红霉素、青霉素 Ｇ、新生霉素、痢特灵、氯霉素高度敏感。     

Vaccination of ducks with recombinant outer membrane protein (OmpA) and a 41 kDa partial protein (P45N') of Riemerella anatipestifer.

The generation of protective immunity against Riemerella anatipestifer infection in ducks were investigated by immunizations with recombinant glutathione sulfatransferase (GST) fusion's proteins of OmpA, a 42kDa major outer membrane protein, and P45N', a 41kDa N-terminal fragment of a newly identified 45kDa potential surface protein from R. anatipestifer. The DNA encoding OmpA and P45N' were isolated from R. anatipestifer serotype 15 (field strain 110/89) and serotype 19 (reference strain 30/90), respectively. Immunoblotting and ELISA results showed that the purified recombinant proteins induced the production of antibodies in immunized ducks. However, neither was protective against subsequent challenge with the virulent serotype 15 strain, 34/90. All the five ducks immunized with formalinized R. anatipestifer strain 34/90 survived the challenge with the homologous strain whereas six out of seven ducks in the non-immunized control group died within a week following the challenge.     

Exclusion of strain 670/89 as type strain for serovar 20 of Riemerella anatipestifer

Classical phenotypic characterisation and numeric analysis of whole-cell fatty acid patterns of twenty-one type strains of hitherto reported Riemerella anatipestifer serovars revealed that the type strain of serovar 20 does not belong to the species Riemerella anatipestifer sensu stricto and, therefore, it has to be excluded as a representative Riemerella anatipestifer serotype strain.