利用CRISPR/Cas9技术构建PRVGD株gI和gE缺失毒株及其生物学特性研究

本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术对本实验室分离得到的PRV GD株的gI和gE基因进行基因敲除,经蚀斑纯化结合PCR鉴定的方法获得gI和gE基因缺失毒株,命名为PRV GD-delgI/gE。试验测定了该基因缺失病毒在PK-15细胞中培养的一步生长曲线及其对小鼠的致病力。试验结果表明,与亲本毒株PRV GD株相比,PRV GD-delgI/gE在PK-15细胞中的繁殖能力有轻微降低,对小鼠的毒力明显降低,且该基因缺失病毒遗传稳定,可作为新型PRV疫苗的候选毒株,并为针对变异毒株的控制和新型疫苗的研制奠定了一定的基础。     

猪圆环病毒2型的遗传变异和进化研究进展

猪圆环病毒2型(PCV2)是猪圆环病毒相关疾病的主要病原体,给世界养猪业造成了巨大的经济损失。随着分子生物学的发展,PCV2的研究取得了显著进展。本文综述了PCV2的遗传变异和病毒进化的研究进展,旨在为业界更好地了解PCV2的分子流行病学、控制策略,更能为新型疫苗的设计研发提供参考。     

三例禽巴氏杆菌病的诊断

通过对广州郊区3个发病鸡场进行病原菌的分离培养、涂片镜检、生化特性鉴定、致病性、药敏等试验,结果表明,分离的5株菌为多杀性巴氏杆菌,诊断为禽巴氏杆菌病.其对壮观霉素、呋喃妥因、头孢三嗪均高度敏感,对卡那霉素、红霉素、新霉素、痢特灵、头孢噻肟均中度敏感,对四环素、氟哌酸、杆菌肽、链霉素、林可霉素、青霉素、庆大霉素均低度敏...     

~(60)Co-r射线辐照处理后小豆农艺性状诱变参数研究

利用60Co－r射线对3个小豆品种的干种子加以辐照处理,其剂量分别为0（CK）、100、200、300、400、500、700Gy,研究了不同辐射剂量处理M1、M2代5个农艺性状的诱变参数．结果表明：（1）M1代农艺性状均有不同程度受抑制,其平均数与辐照剂量呈负相关,且M1的变异是多方向的,对剂量的敏感程度也因品种、性状而异;辐照处理致变力（h12）京农2号在400～500Gy剂量处理下综合5个性状为最大,而冀红四号在200Gy剂量处理下综合5个性状为最大．（2）M2代株高、主茎节数、单株荚数的平均数在400Gy处理时均比对照显著增高,从变异系数的大小来看,M2变异范围较大的剂量株高为400～500Gy、单株美数为300～400Gy、荚长为400～700Gy和单荚粒数为300Gy左右．（3）诱导变异遗传力（h22）反映了通过辐射诱变获得的遗传变异方差占总方差的比率,单株荚数在辐射剂量为300～400Gy、株高在400Gy时的h22、GS、RGS较大．     

荧光定量PCR检测2型猪圆环病毒方法的建立

通过克隆2型猪圆环病毒（PCV2）的开放阅读框2（0RF2）基因编码其核衣壳蛋白（Cap）的一段靶序列,构建重组质粒作为标准阳性模板.根据GenBank中的靶序列设计一对引物和一条TaqMan探针.对PCR反应条件优化后,对构建的标准阳性模板定量,然后1 0＆#215;倍比稀释进行荧光定量PCR（qPCR）扩增并制作标准曲线,初步建立了PCV2检测的qPCR方法.结果表明,该方法检测灵敏度可达1.0＆#215;102拷贝/μ L,线性范围为101 ～ 109,达9个数量级,并且具有很好的特异性.对起始浓度为1.0＆#215;108、1.0＆#215; 106、1.0＆#215;104拷贝/μL的标准品的最终实际测得CT均值分别为12.77、19.72和26.89;变异系数分别为0.25％、0.10％和0.13％,均小于1％,说明此方法具有良好的准确性和重复性.     

猪瘟疫苗的研究进展

猪瘟(classical swine fever,CSF)是一种高度传染性猪病,对动物健康和养猪业的发展影响巨大,至今仍然是全球重要的猪病毒性疾病之一。目前,疫苗接种仍然是防控猪瘟的主要有效手段。随着分子生物学的发展,猪瘟疫苗的研究取得了显著进展。本文综述了猪瘟疫苗的最新研究进展,为猪瘟疫苗的设计研发和猪瘟的控制和根除提供参考。     

猪乙型脑炎灭活疫苗安全性与免疫效力的研究

本研究对猪乙型脑炎灭活疫苗(GD株)的安全性和免疫效力进行了评估。用体重为8~10 g SPF鼠进行5批疫苗的安全性比较,结果:5批猪乙型脑炎灭活疫苗(GD株)的安检鼠精神、食欲正常,没有出现不良反应,表明猪乙型脑炎灭活疫苗对SPF鼠是安全的。用30日龄的健康易感仔猪进行疫苗的安全性比较,结果:5批猪乙型脑炎灭活疫苗(GD株)的安检猪体温、精神、食欲正常,没有出现不良反应,安检猪的平均增重与对照猪的平均增重无显著差异,猪的安全性试验结果表明猪乙型脑炎灭活疫苗对猪安全。用体重为8~10 g SPF鼠对猪乙型脑炎灭活疫苗进行免疫保护性试验,SPF鼠注射疫苗后21日,进行猪乙型脑炎病毒(GD株)(病毒含量为106.0TCID50/mL)强毒攻击,结果:攻毒后,5批猪乙型脑炎灭活疫苗(GD株)免疫小鼠的精神、食欲正常,全部健活,免疫组保护率10/10,对照组小鼠全部发病、死亡率10/10。小鼠的免疫攻毒试验结果表明猪乙型脑炎灭活疫苗(GD株)可以刺激机体产生良好的免疫应答,对小鼠的保护率高。     

羊草种子萌发相关基因的筛选及表达分析

前期实验表明,变温处理(28 ℃ 12 h/16 ℃ 12 h)可显著提高羊草种子的萌发率,且羊草种子萌发中的第1天是接受变温信号的关键时期。以此为研究基础,结合羊草种子变温萌发的转录组测序数据,针对羊草种子萌发初期对变温处理的响应筛选出与种子萌发、休眠及低温相关的基因24个,利用测序结果中这些基因的RPKM值制作基因表达热图并分析其表达差异。以萌发率高、低的两种羊草种质的种子为材料,对24个基因在恒温12 h(28 ℃)和变温1 d(28 ℃ 12 h/16 ℃ 12 h)萌发处理中的表达分别进行了定量分析。结果表明,与恒温对照相比,变温处理12 h后,表达明显上调的基因有SAIN1,PP2C62,EXPB3,EXPB4,GA3ox,EXPA2和EXPA7,而表达明显下调的基因有bHLH49,GID1,ABI8,Chi1,11833,CBF3,NAC2,PP2C72,SAIN2和5423。通过进一步分析相关基因在高、低萌发率两个种质中表达的差异,筛选出其中可能与羊草种子萌发相关的基因有几丁质酶基因Chi1,转录因子基因CBF3,羊草新基因5423,赤霉素合成基因GA3ox,细胞松弛素蛋白基因EXPB4和羊草新基因SAIN1,将为下一步阐明羊草种子萌发的分子作用机理奠定基础。     

羊草种子耐海水萌发特性初步研究

近年来,海水稻研究引起社会广泛关注。羊草作为耐盐碱乡土草种资源,尚未见羊草耐海水有关试验报道。本文选择S19和S11两份羊草种质,研究了不同海水浓度对种子萌发特性的影响,结果表明,羊草种子萌发率随海水浓度的增加而降低,萌发率与海水浓度呈明显负相关; S19比S11更耐受海水抑制;羊草胚根长度、第一片真叶长度均随海水浓度的增加而受到明显抑制,胚芽鞘所受抑制较小。这些结果对羊草种质资源的耐海水评价和新品种培育具有重要参考价值。     

羊草种质资源耐盐性评价

羊草[Leymus chinensis (Trin.) Tzvel.]是禾本科赖草属多年生优质牧草,具有较强的耐盐性,是非盐生植物中耐盐性最高的物种之一。本试验对100份羊草种质萌发和幼苗期耐盐性进行了评价。结果表明:盐胁迫下,羊草不同种质的萌发率为25. 33%～92. 67%,相对盐害率为-6. 31%～95. 54%,分为耐盐性极强、强、中、弱、极弱五种类型,其中耐盐性极强的种质如Z31、Z3、W36、C31等在盐胁迫下相对萌发率为85%左右;在1%Na Cl处理下,对盐敏感羊草种质的抑制作用大于对耐盐种质的抑制,盐胁迫对各器官的抑制强度不同,对根长的抑制大于对叶长的抑制,对胚芽鞘长度的影响差异不显著;不同时期盐处理的抑制效果不同,在一叶期的抑制作用大于萌发期;羊草萌发阶段盐敏感时期在第1～4d,此时进行盐处理对羊草的萌发率影响最大。这些结果对羊草种质资源的耐盐性评价和新品种培育具有重要参考价值,同时为羊草耐盐的分子作用机理和耐盐基因的挖掘提供了可靠的种质。