猪瘟病毒结构蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立及评价

通过研究猪瘟(CSF)疫苗免疫猪抗结构蛋白E2、E0和C抗体的产生规律,为临床制定合理的CSF疫苗免疫程序提供参考。利用间接ELISA方法检测CSF疫苗免疫猪过程中,抗E2抗原血清抗体的产生特征;分别以重组猪瘟病毒(CSFV)结构蛋白E0和C为抗原,建立检测血清抗体的间接ELISA方法,评价其敏感性和特异性,并检测疫苗免疫过程中抗E0和C蛋白抗体的消长规律。结果显示:CSFV-E0和CSFV-C间接ELISA抗体检测方法的抗原最佳包被质量浓度分别为2.09和1.59μg/mL,待检血清样本最适稀释度分别为1∶60和1∶80,酶标二抗稀释度分别为1∶100和1∶350,2种ELISA方法与常见猪病原的阳性血清无交叉反应,具有良好的特异性。CSF疫苗免疫后第7天即可检测到抗E2、E0和C蛋白的抗体,其中抗E2和E0的抗体在免疫后第21天达到最高水平,E2抗体滴度先上升后下降,E0抗体在免疫后第21天开始下降并最终趋于稳定;C蛋白抗体在免疫后第7天出现,随后开始下降,在第28天转为阴性。结果表明,利用重组抗原建立的CSFV血清抗体ELISA检测方法,可以用于评价CSF疫苗免疫后血清中针对3种结构蛋白的抗体消长特点,从而为临床猪瘟疫苗免疫程序的制定提供参考。     

著名兽医教育家、寄生虫学专家的学术历程——中国农业大学动物医学院孔繁瑶教授

<正>孔繁瑶教授,著名兽医教育家、兽医学家、寄生虫学家、线虫分类学家,中国农业大学教授、博士生导师。原北京农业大学兽医系主任,中国人民政治协商会议全国委员会第七届和第八届委员,国务院学位委员会第二届学科评议组农学学科成员、第三届学科评议组兽医学科召集人。     

接种鸡IBD弱毒疫苗后鸡脾脏TLR7基因表达的动态变化

给11日龄雏鸡分别口服接种鸡传染性腔上囊炎(IBD)弱毒疫苗(法贝灵,IBD-Blen)1头份和3头份后,于不同时间采集脾脏组织分离纯化淋巴细胞,用常规法抽提总RNA,以鸡β-actin基因为内参,采用半定量RT-PCR法检测脾脏组织中鸡Toll样受体7(chTLR7)基因的表达动态.结果表明:接种IBD弱毒疫苗前,试验鸡脾组织中chTLR7有微量表达;疫苗接种后,脾脏中chTLR7 mRNA的表达开始显著上升;接种后12小时达峰值,此后迅速下降;130小时降至疫苗接种前的基础水平.说明chTLR7可能参与了IBDV感染早期的天然免疫反应过程.     

鸭疫里默氏杆菌抗体检测的全菌体抗原间接ELISA方法的建立

本研究建立了检测鸭疫里默氏杆菌（Rimerrlla anatipestifer,RA）抗体的全菌体抗原间接ELISA方法,最佳血清稀释倍数为1：100。以RA1的甲醛灭活全菌体为包被抗原,棋盘滴定法试验确定其最适抗原包被浓度为5×10^8CFU／mL。与全菌体裂解抗原和重组P25蛋白为包被抗原的间接ELISA方法相比较,三者均可检测不同血清型RA标准阳性血清,结果符合性良好。用该方法检测雏鸭接种鸭疫里默氏杆菌蜂胶灭活疫苗后血清抗体水平的变化,发现免疫后10天抗体水平开始上升,二免后10天抗体水平达到峰值。     

鸭源大肠杆菌O_(78)菌蜕的制备及免疫原性研究

为制备大肠杆菌(E.coli)菌蜕并研究其免疫原性,本研究将带有裂解基因E的质粒pHH43转化致病性鸭源E.coli O78,构建获得E.coli O78/pHH43重组菌。于不同培养温度下研究重组菌E裂解蛋白表达所介导的宿主菌的裂解情况,结果显示在42℃培养时最佳诱导时间为4h,约90%的重组菌被裂解失活,以冻干法及添加庆大霉素完全灭活未裂解的细菌后制备"菌蜕疫苗"。雏鸭免疫试验表明,接种E.coli O78/pHH43菌蜕两周后免疫雏鸭可产生对同源强毒菌株致死剂量攻击的免疫保护。比较E.coli O78/pHH43菌蜕与甲醛灭活的同株E.coli所诱导的免疫保护效果,结果免疫保护率分别为87.5%和75%,表明菌蜕比甲醛灭活法能更有效地诱导机体的特异性免疫应答。     

顶复门原虫糖酵解代谢及其关键酶:己糖激酶的研究进展

顶复门原虫是包括刚地弓形虫、疟原虫及球虫等在内的一大类寄生性原虫的总称,引起重要的人畜寄生虫病。由于药物的长期使用,对于原有的药物产生了明显的抗药性,急需新型抗寄生虫药物的出现。顶复门原虫不能利用脂肪和蛋白质作为能量来源,只能依赖己糖激酶(Hex-okinase,HK)参与的糖酵解途径提供ATP。顶复门原虫HK的基因序列、结构特征与植物等一些低等生物更为接近,而明显区别于脊椎动物和大多数的真核生物,成为研究开发药物的理想靶位。本文对顶复门原虫糖酵解途径及其关键酶进行了综述。     

用抑制性差减杂交筛选鸭疫里氏杆菌2型可能毒力基因

为寻找鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)可能的毒力基因,以鸭疫里氏杆菌2型(RA2)毒力株RAF2及弱毒力株LY-58为研究对象,通过抑制性差减杂交(SSH)试验,从RAF2株中获得14个特异性差异基因片段。经同源性分析,其中6个差异基因片段分别与外膜蛋白、ATP结合蛋白、转录调节因子、氨基酸通透酶、胞外蛋白编码基因有同源性,为可能的毒力基因;4个差异基因片段与功能未知蛋白或假定蛋白编码基因有关;另外4个差异基因片段未找到同源序列。利用PCR对上述10个可能与毒力相关的差异基因片段在13株分别属于8个不同血清型RA中的分布进行了检测,结果表明除8型外,以上差异基因片段在RA中分布普遍。     

传染性腔上囊炎疫苗免疫鸡TLR7基因表达的动态变化

给11日龄雏鸡分别口服接种鸡传染性腔上囊炎（IBD）弱毒疫苗（法贝灵，IBD-Blen）1和3头份后，于不同时间采集脾和腔上囊组织，分离纯化淋巴细胞，常规方法抽提总RNA，以鸡伊actin基因为内参，采用半定量RT—PCR法检测两种组织中鸡Toll样受体7（ChTLR7）基因的表达动态。结果显示，接种IBD弱毒疫苗前，试验鸡脾和腔上囊组织中均有ChTLR7的微量表达，疫苗接种后第7h，脾中ChTLR7 mRNA的表达开始显著上调，至接种后第12h达峰值，此后迅速下降，至第130h时降至疫苗接种前的水平；而腔上囊组织中ChTLR7 mRNA的表达自接种后第12h开始增加，第24h时达峰值，随后迅速下降，约72h后恢复至疫苗接种前水平。表明ChTLR7可能参与了IBDV感染早期的天然免疫反应过程。     

青铜峡市设施农业的发展与思考

设施农业作为高效农业的一个重要载体，是先进农业生产力的重要标志，是建设现代农业、繁荣农村经济、增加农民收入的有效途径。     

常山口服液抗鸡柔嫩艾美耳球虫广东分离株的疗效研究

研究旨在明确常山口服液治疗鸡球虫病的疗效和最佳给药剂量。试验选取90只14日龄健康雏鸡,随机分为9组,每组10只,即常山口服液组(分别为2.5、5.0、15.0、25.0、35.0、50.0 m L/L水剂量)、妥曲珠利组(1 m L/L水)、感染对照组和健康对照组。除健康对照组外,每只鸡接种7×104个柔嫩艾美耳球虫广东分离株的孢子化卵囊,饮水给药7 d,观察其疗效。结果显示,常山口服液各剂量组其盲肠和十二指肠的肿胀现象较感染对照组明显减轻,血液性内容物明显减少,抗球虫指数(ACI)分别为87.7、136.2、141.8、136.2、109.7和108.0,均高于感染对照组;常山口服液按5.0、15.0及25.0 m L/L水剂量给药,抗球虫指数均高于对照药物妥曲珠利组(ACI=124.8)。结果表明,人工感染条件下,常山口服液较化学药物妥曲珠利具有更好的抗球虫疗效,且作为中药提取物,疗效对比试验效果较为理想。