血清5型鸭疫里氏杆菌在我国的发现及其病原特性研究

1994年1月至2000年10月，从全国25个省、自治区、直辖市的5－90日龄患典型鸭疫里氏杆菌病的种鸭和商品鸭中分离到89株血清5型鸭疫里氏杆菌。对其病原学特性研究结果表明，血清5型鸭疫里氏杆菌病在我国鸭群感染范围极广；分离菌株对雏鸭具有很强的致病性，对小白鼠无致病性；各地分离菌株表现出一致的形态特征和非常相似的生理生化特性；各地分离力株耐药谱很广，但对头孢类药物和利福平高度敏感。用分离菌株制备的灭活疫苗免疫雏鸭具有很好的免疫原性。     

山东鸭疫里氏杆菌血清型鉴定及免疫防制

从山东部分鸭场分离到51株鸭疫里氏杆菌并用凝集试验进行了血清型鉴定,结果表明:山东存在鸭疫里氏杆菌的血清1型、2型、3型、7型、8型及血清未定型,其中血清1型和2型为主要血清型,占分离株的66.8%。将分离到的鸭疫里氏杆菌作成油佐剂多价灭活苗,其免疫效果显著。     

鸭疫里氏杆菌的分离鉴定

2009年4月从扬州某鸭场分离到一株细菌,经分离培养、染色镜检、生化特性和玻片凝集试验确定其为ⅩⅤ型鸭疫里氏杆菌。动物致病性试验表明,鸭疫里氏杆菌分离菌株可以通过肌肉注射、皮下注射和滴鼻三种途径感染试验鸭,使攻毒鸭发生100%死亡,说明该鸭疫里氏杆菌分离株具有很强的致病性。     

3株鸭疫里氏杆菌的分离鉴定

对广东某鸭场疑似传染性浆膜炎病鸭进行细菌分离鉴定和致病性考察。从濒死鸭脑、肝脏和心血中进行细菌分离,通过鉴别培养、染色镜检、生化试验和PCR检测进行细菌的鉴定,将最终确定为鸭疫里氏杆菌的分离菌株进行扩增培养后,进行动物回归试验,考察其致病性。结果显示分离到的3株细菌均为鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer),动物回归试验中试验组鸭均发病,并表现典型传染性浆膜炎症状,甚至死亡。表明所分离的3株鸭疫里氏杆菌具有较强的致病性。     

山东部分地区3型鸭疫里氏杆菌感染流行病学调查

利用血清3型鸭疫里氏杆菌制备兔抗高免血清和平板凝集诊断抗原,对收集的2010年3月~10月来山东畜牧兽医职业学院动物医院就诊的鸭传染性浆膜炎疑似病例进行血清3型鸭疫里氏杆菌分离培养及鉴定。同时,采集山东养殖量较大的9个县、市、区的13个养殖场372份鸭血清,利用平板凝集试验对3型鸭疫里氏杆菌的流行情况进行血清学调查。结果显示：共分离得到39株鸭疫里氏杆菌,且19株为血清3型,占鸭疫里氏杆菌总数的48.7%;在采集的血清样本中,3型鸭疫里氏杆菌阳性率为21.7%。可见,3型鸭疫里氏杆菌在山东上述地区感染较为普遍。     

鸭疫里氏杆菌病的病原学特性研究

2001年6月至2002年4月，从浙江省7个地、市患典型鸭疫里氏杆菌病的不同品种病死分离到20株鸭疫里氏杆菌（RA），所分离菌株对各品种雏鸭具有很强的致病性，各分离菌株表现出一致的形态特征和正常相似的生理生化特性。     

鸭疫里氏杆菌不同血清型广西株的分离鉴定

从广西部分地区9个发病鸭场的病料中分离出9株疑似鸭疫里氏杆菌，经培养特性、形态、染色性及生化反应特性等鉴定为鸭疫里氏杆菌（RA）。RA血清型分型试验结果表明，9株分离菌中有7株（GX1、GX2、GX3、GX4、GX5、GX6、GX8）属血清型Ⅰ型；另2株（GX7、GX9）与GX1株的阳性血清无交叉凝集反应，GX7、GX9株制备的阳性血清也无交叉凝集反应，表明这2株菌既非Ⅰ型又不属同型的RA。经致病性试验，GX1株具很强的致病力，能使北京鸭和本地麻鸭发病死亡，GX7和GX9株仅能使北京鸭发病死亡，而不致本地麻鸭发病。结果表明，广西存在着不同血清型的RA，而且有的菌株致病性很强。     

鹅源2型鸭疫里氏杆菌的分离与鉴定

从剖检表现纤维素性心包炎、肝周炎和气囊炎的病死雏鹅脑内分离到1株细菌，定名为G0201B株，经形态学观察、生化试验及血清型鉴定，确定为2型鸭疫里氏杆菌。经人工感染试验，表明该菌对雏鹅有极强的致病力，致死率高达100％。     

2007年宁波地区鸭传染性浆膜炎的流行情况调查

鸭传染性浆膜炎是由鸭疫里氏杆菌(RA)引起的一种接触性传染病,主要侵害雏鸭、雏鹅等多种禽类,多发于2～7周龄的雏鸭,呈急性或慢性败血症.鸭疫里氏杆菌血清型众多,已经公开报道的就达25种,不同血清型的RA菌株、同一血清型不同源的RA分离菌株,其致病性存在差异,且不同血清型的菌株之间缺乏免疫交叉保护能力.     

苏北及周边地区鸭疫里氏杆菌分离鉴定与药敏试验

2018—2019年对苏北及周边地区多个设点连续采样255份鸭和鹅组织病料。通过细菌培养、染色及种属特异性基因的检测,分离得到30株鸭疫里氏杆菌。用1型、2型阳性血清对其进行血清型鉴定证实,15株为1型,未检出2型,其余15株为未定血清型。采用K-B纸片法对分离菌株进行了药物敏感试验。分离菌株对多黏菌素B耐药,对复方新诺明、克林霉素、庆大霉素、新霉素、氨苄西林有不同程度的耐药性,对阿莫西林中度及高度敏感,对头孢哌酮、环丙沙星、多西环素、氟苯尼考高度敏感。进一步的分析表明,在不同菌株中,利福平的耐药性呈现离散分布,头孢哌酮、环丙沙星、多西环素、氟苯尼考耐药性呈现集中分布,同样属于1型鸭疫里氏杆菌的菌株中,耐药性的差别也较大,提示为不同菌株所引起。结果表明,近期苏北及周边地区鸭疫里氏杆菌的流行呈现多血清型特点,可同时感染雏鸭雏鹅,耐药情况较严重,特别是出现了对多黏菌素的耐药性,值得关注和进一步研究。     

鹅源鸭疫里默氏杆菌的分离和鉴定

为研究鹅源鸭疫里默氏杆菌的生化特性、药敏情况、血清型和致病性,从扬州郊区发病鹅场分离到1株细菌,经分离培养、染色镜检、生化特性鉴定、玻片凝集试验,确定为Ⅱ型鸭疫里默氏杆菌。对病料进行病毒分离试验,经过血凝试验和琼脂扩散试验,没有发现鹅新城疫病毒、禽流感病毒和小鹅瘟病毒。动物致病性试验结果表明,鸭疫里默氏杆菌分离菌株可以通过静脉注射、皮下注射和滴鼻3种途径感染鹅,出现100%的死亡率,说明分离株对扬州鹅具有很强的致病性,同时提示在鹅的免疫计划中也应该充分考虑到鸭疫里默氏杆菌的致病和传播。     

1型鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及基因组文库的构建

从临床病鸭中分离并鉴定了1型鸭疫里默氏杆菌,并在提取鸭疫里默氏杆菌的基因组DNA后,用Sau3A I酶切,回收大小为0．07～4 kb的片段;将酶切片段与酶切的质粒载体pRSET连接后,电转化大肠杆菌Rosetta,成功构建了1型鸭疫里默氏杆菌的基因组文库,经检测库容量约为40000个。随机筛选30个单菌落,用pRSET通用引物进行PCR鉴定,统计结果显示插入片段的大小93．3％在1～3 kb范围内,成功构建了鸭疫里默氏杆菌基因组文库,为鸭疫里默氏杆菌功能基因的克隆及鉴定奠定了基础。     

Diagnosis of Duck Hepatitis Virus Type 1 and Serotype 11 Riemerella anatipestifer Mixed Infection and Isolation and Identification of Pathogens

To determine the pathogens that caused the death of the 10-day-old sheldrakes of a outbroke epidemic duck farm at the end of June 2015,at Cangshan District in Fuzhou,the liver,spleen and brain of dead sheldrakes were collected,and then tested by virus isolation,isolation and purification of bacteria,PCR detection,serology and drug susceptibility test.The results showed duck hepatitis virus type 1 and 11 type Riemerella anatipestifer were detected and isolated,and the isolated duck hepatitis virus type 1 had the highest homology with MPZJ1206 strain and GD strain,and the percentage of homology were 98.7%.Laboratory isolation and identification of pathogen determined that the case was duck hepatitis virus type 1 and serotype 11 Riemerella anatipestifer mixed infection.     

一例鸭1型甲肝病毒和11型鸭疫里默氏杆菌混合感染的诊断及其病原的分离鉴定

为确定引起2015年6月底福州仓山区某一养鸭场10日龄左右麻鸭发病死亡的病原,无菌采取病死鸭的肝脏、脾脏、脑等组织,经病毒分离、细菌分离纯化、PCR检测、血清学检测、药物敏感性试验,结果检测并分离到鸭1型甲肝病毒和11型鸭疫里默氏杆菌,该鸭1型甲肝病毒分离株与MPZJ1206株和GD株同源性最高,均为98.7%。结果表明,该病例为鸭甲肝病毒1型和11型鸭疫里默氏杆菌混合感染。     

鸭疫里默氏菌铁依赖抑制子基因的克隆及序列分析

本研究根据鸭疫里默氏菌铁依赖抑制子(RaDtxR)基因序列特征设计特异性引物,利用PCR方法从已鉴定为2型鸭疫里默氏菌RA-FJ株的基因组DNA中扩增目的基因片段,胶回收PCR扩增片段,克隆到pMD18-T载体后进行序列测定.采用生物信息学软件对测序结果进行分析,结果表明所获得的RaDtxR基因编码完整的开放阅读框,全基因长度为654 bp,编码217个氨基酸.所编码的蛋白大小为24.82 ku,理论等电点为5.69,不稳定系数为38.45,属于稳定蛋白质类.将其与GenBank中已发表的RaDtxR基因序列进行核苷酸同源性比对分析,结果显示其与鸭疫里默氏菌疫苗株RA-CH-1株(GenBank登录号:CP003787)的核苷酸同源性为100.0%,与其他4株核苷酸同源性均为99.8%,仅在186位处存在无义突变.利用该基因对福建省农业科学院畜牧兽医研究所分离鉴定的鸭大肠杆菌、禽多杀性巴氏杆菌和沙门氏菌进行扩增,结果显示均未扩增到条带,对福建省农业科学院畜牧兽医研究所分离鉴定的1型、2型、3型、11型和13型鸭疫里默氏菌均可扩增出特异性目的条带,表明RaDtxR基因可作为鸭疫里默氏菌鉴别诊断的靶基因.试验结果表明,本研究成功克隆到鸭疫里默氏菌RaDtxR基因,为研究其功能奠定基础.     

鸭疫里默氏杆菌PCR快速检测方法的建立

在鸭疫里默氏杆菌外膜蛋白保守区设计了一对特异性引物,建立PCR方法,对5株已知血清型的鸭疫里默氏杆菌纯培养菌和6株临床分离未定型的里默氏杆菌菌株以及病死鸭病料组织进行检测,结果表明不同样品都可扩增出592bp的特异目的条带,而对鸭源大肠杆菌、鸭源多杀性巴氏杆菌、鸭源沙门氏菌的扩增结果均为阴性,说明该PCR法具有较好的特异性,可用于快速鉴定鸭疫里默氏杆菌,也适用于病料的直接检测.     

鸭疫里默氏杆菌血清7型的病原特性

1994年1月～2000年10月,从全国23个省(市、自治区)不同代次(原种、祖代、父母代和商品代)的5～90日龄患有典型鸭传染性浆膜炎的病死鸭分离到87株血清7型的鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA).对其病原学特性研究的结果表明,血清7型RA在我国鸭群感染分布的范围极广,分离菌株对雏鸭具有很强的致病性,对小鼠无致病性,各地分离菌株表现出一致的形态特征和非常相似的生化特性;各地分离菌株耐药谱很广,但对头孢类药物(如头孢拉啶、头孢克洛等)和利福平却普遍高度敏感.用分离菌株制备的灭活疫苗免疫雏鸭具有良好的免疫原性.     

西南地区鸭疫里默氏菌血清型调查和三价灭活油乳剂疫苗的研制

本文对2006～2009年从四川、重庆、云南等主要养鸭区分离鉴定的261株鸭疫里默氏菌（RA）的血清型进行鉴定，结果显示血清Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ型RA占总分离株的68．20％。筛选出免疫原性好的Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ型RA分离株各1株，制备三价灭活油乳剂疫苗，安全性和效力检验结果显示该三价苗安全，接种后无不良反应，3日龄雏鸭首免后14～31d对Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ的攻毒保护率均在83．33％以上。     

我国鸭疫里默氏杆菌血清型调查及新血清型的发现和病原特性

从全国29个省(市、自治区)不同代次(原种、祖代、父母代和商品代)的5～90日龄患有典型鸭传染性浆膜炎的病死鸭分离到l842株鸭疫里默氏杆菌,血清型分布为l(638株)、2(367株)、3(102株)、4(146株)、5(89株)、6(49株)、7(87株)、8(68株)、10(43株)、ll(35株)、13(56株)、14(61株),另有101株不属于1～2l血清型,而分属于4个相同的抗原型,被命名为22(2l株)、23(18株)、24(34株)和25(28株)血清型。各血清型对雏鸭均具有较强致病性和免疫原性。