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PCR检测鸭瘟病毒的研究 总被引:10,自引:0,他引:10
根据鸭瘟病毒DNA聚合酶基因序列,设计、合成了1对引物,以1株鸭瘟病毒疫苗株DNA为模板,进行:PCR扩增,扩增出预期563bp的目的DNA片段。将扩增出的DNA片段克隆到pMDl8—T载体,经Amp/IPTG/X-gal平板筛选,HindⅢ、XbaⅠ双酶切鉴定,获得阳性重组质粒。对重组质粒进行序列测定,与参考序列比较,二者同源性为99.3%。小鹩瘟病毒、鸭肝炎病毒、鹅副黏病毒:PCR扩增均为阴性。用此方法检测人工感染和自然感染鸭瘟的组织(脑、肝、脾),均能检测到鸭瘟病毒DNA。PCR检测鸭瘟病毒具有高度的特异性、敏感性,能够用于鸭瘟急性及亚临床感染的检测与诊断。 相似文献
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《现代畜牧兽医》2016,(10)
根据羊传染性脓疱病毒GeneBank基因序列,设计合成一对引物。通过对PCR反应条件的优化,敏感性及特异性试验,成功建立了用于检测羊传染性脓疱病毒DNA的PCR检测方法。该方法成功扩增出390 bp的目的基因片段,敏感性试验证明可以检测出320×10~(-2)ng/L的DNA。特异性试验羊痘病毒、山羊关节炎脑炎病毒均未扩增出相应片段。重复性试验对3份羊传染性脓疱病毒阳性病料进行检测,结果均为阳性。临床应用对临床送检的16份疑似羊传染性脓疱病毒感染病料用上述建立优化的PCR方法进行检测,结果显示,9份为阳性,阳性样品的PCR扩增产物克隆后进行序列分析显示均为羊传染性脓疱病毒。证明该方法具有良好的敏感性和特异性,可以用于临床诊断。 相似文献
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应用PCR检测鸭肠炎病毒弱毒在鸡胚体内的分布 总被引:2,自引:0,他引:2
根据GenBank已发表的鸭肠炎病毒(DEV)UL6基因的部分核苷酸序列,设计并合成一对引物.以鸭肠炎病毒中国商品化疫苗毒蚀斑纯化株(DEV Clone-03)DNA为模板,经PCR扩增出预期516bp的目的片段。将此片段插入克隆载体质粒pMD18-T,并进行序列测定,序列比较结果显示,此段序列与参考序列完全一致。用PCR检测DEV Clone-03在鸡胚体内的分布情况显示,接毒死亡鸡胚的尿囊膜、心、肝、脾、肺、肾和肌肉皮肤内均存在病毒。PCR敏感试验表明此方法可以检测到100μL尿囊液中提取的10^-3稀释的病毒DNA,相当于0.2个EID50病毒量的DNA。 相似文献
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猪细小病毒PCR检测方法的建立与应用 总被引:21,自引:0,他引:21
根据已报道的猪细小病毒基因组序列,设计并合成了1对寡核苷酸引物,通过对影响PCR扩增因素的筛选,成功地从猪细小病毒感染的组织和细胞中扩增出445bp片段,回收该片段用EcoR I酶切得到了预期的结果,证实了该扩增片段的特异性。敏感性试验表明,该方法可以检测出10^-4个TCID50的病毒含量。利用该方法对临床上24份流产病科的检测,查出阳性16份,而同时利用HA检测阳性只有10份。这些结果说明本试验建立的PCR诊断方法灵敏度高、特异性强。 相似文献
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快速鉴别诊断山羊痘病毒和羊口疮病毒二联PCR方法的建立 总被引:2,自引:1,他引:2
参照GenBmk已发表的山羊痘病毒(GPV)和羊口疮病毒(ORF)的核苷酸序列设计了两对引物,建立了一种可以快速鉴别山羊痘病毒和羊口疮病毒二重PCR方法,检测结果显示,对山羊痘病毒和羊口疮病毒可以分别扩增出413 bp和595 bp的特异性片段,经敏感性测定,最低能检测到4 pg的DNA。对广西的送检的山羊病料20份进行检测,其中7份可扩增出413 bp的山羊痘特异片段、1份可扩增出595 bp的羊口疮特异片段。该方法能在4 h内完成整个检测过程,不仅快速,而且特异强、敏感性高,很适合于快速诊断。 相似文献
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产蛋下降综合征病毒PCR检测方法的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
根据已报道的腺病毒DNA序列,设计合成了1对核苷酸引物,引物间隔约630bp。用该引物对EDS76病毒内蒙古分离株(N3,N4)和参考株(AV-127)核酸进行聚合酶链式反应(PCR)。结果,均扩增出了约630bp的特异性DNA片段。所建立的PCR方法可检出100pg的样品模板。结果表明,此PCR方法是检测EDS76病毒的一种简便快速、特异性强和灵敏度高的方法。 相似文献
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《现代畜牧兽医》2016,(3)
根据GenBank传染性喉气管炎病毒(ILTV)基因序列,设计合成了1对特异性引物。以ILTV DNA为模板,建立了检测ILTV的PCR检测方法。通过优化PCR反应条件,成功扩增出一条约690 bp的目的基因片段。而鸡传染性法氏囊病病毒、新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、禽流感病毒基因组均未扩增为出相应的片段。敏感性试验检测出其DNA最小检出量为10-2μg。重复性试验中对3份检测为传染性喉气管炎病毒阳性病料进行检测,发现3次重复检测的结果完全一致。临床应用中运用上述优化的PCR反应条件进行PCR检测临床送检的16份疑似鸡传染性喉气管炎病毒感染病料,结果显示检出阳性样品6份,将阳性样品的PCR扩增产物克隆后序列分析显示均为鸡传染性喉气管炎病毒。结果表明,建立的PCR方法具有良好的特异性,敏感性和稳定性,可应用于传染性喉气管炎病毒鉴定和临床诊断。 相似文献
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以猪弓形虫核糖体DNA第一内转录间隔区(ITS1)序列为模板自行设计引物,建立了猪弓形虫病特异PCR诊断方法,并从弓形虫国际标准强毒株RH速殖子和疑似T.gondii感染猪全血及肺脏组织样品基因组DNA中扩增出了预期长度273bp的目的DNA片段。敏感性和特异性试验结果显示,该PCR方法能检测到的最低DNA量为0.001ng,且与相关的9种对照寄生虫、细菌和病毒无交叉反应。用建立的PCR诊断方法对临床30份猪弓形虫疑似病料和60份健康猪抗凝全血样品进行检测,结果30份病料中有24份呈现阳性;60份健康猪血中有5份为阳性;随机取两个临床样品的阳性PCR扩增片段进行克隆测序表明,二者序列与Gen-Bank中已登录的猪弓形虫ITS1基因相应部分序列完全相同。以上表明所建立的PCR方法具有高度的敏感性和特异性;本研究为猪弓形虫病的快速诊断提供了一种新方法。 相似文献
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小反刍兽疫灭活抗原RT—PCR检测方法的建立及其相关序列分析 总被引:1,自引:0,他引:1
以灭活的检测用抗原为材料,抽提灭活小反刍兽疫病毒的基因组RNA作为模板,根据参考文献及GenBank下载的序列,设计3对位于F基因的引物(2对为套式引物),进行RT-PCR扩增及扩增片段的T载体克隆、序列分析。结果显示,所设计引物单独或套式RT—PCR对模板均有预期大小的片段扩增;扩增片段经核苷酸序列测定和分析,表明所扩增片段为小反刍兽疫病毒的F基因片段。且所设计引物对同属牛瘟病毒、犬瘟热病毒无扩增,证明所用引物为小反刍兽疫病毒特异性引物,此3对引物可用于小反刍兽疫与牛瘟等同属病毒的鉴别诊断。 相似文献
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PCR用于鸭瘟病毒诊断的研究 总被引:3,自引:0,他引:3
根据鸭瘟病毒UL6和UL7基因序列,设计合成了一对引物,以2株疫苗株、1株强毒株和1株山东分离株DNA为模板,进行PCR扩增,得到预期690bp的目的片段.将扩增的目的片段克隆到pMD18-T载体,经Amp平板筛选,HindⅢ、BamHⅠ双酶切鉴定,获得阳性重组质粒.对重组质粒进行序列测定,与参考序列比较,山东分离株与参考序列的同源性为99.7%,其余3株DPV与参考序列的同源性均为100%.应用PCR可检测人工感染和自然感染鸭瘟的组织中的鸭瘟病毒,表明PCR检测鸭瘟病毒具有很高的特异性、敏感性,该法能够用于鸭瘟急性及亚临床感染的检测与诊断. 相似文献
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根据已发表的减蛋综合征病毒(EDSV)核苷酸序列设计了1对扩增长度为1.1kb左右的引物,采取降落PCR对EDSV-gDNA进行扩增。结果,从2份EDSV鸭胚尿囊液、3份人工感染鸡输卵管组织液的核酸抽提物中,均扩增出与设计大小完全一致的目的片段,而对照样品的扩增均为阴性,该方法最低可检测到32Pg的EDSV-gDNA。表明该降落PCR用于检测EDSV特异性和敏感性均较强,可用于减蛋综合征的诊断。 相似文献
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鸡传染性喉气管炎病毒TK基因的克隆与鉴定 总被引:2,自引:0,他引:2
根据鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)TK基因的核苷酸序列,设计并合成了1对引物,利用该引物扩增出了长1800bp的TK基因核苷酸片段。将该基因克隆入PGEM-T载体后,对其进行酶切分析和序列测定。结果表明,扩增片段与发表的ILTV的TK基因核苷酸序列一致。以ILTV、正常绒毛尿囊膜组织、鸡传染性支气管炎病毒(IBV)、鸡新城疫病毒(NDV)感染鸡胚的尿囊膜DNA为模板进行PCR反应,结果该PCR反应体系对ILTV是特异的。敏感性试验表明,该PCR系统能检出50pg的ILTV感染尿囊膜的DNA。 相似文献
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犬附红细胞体PCR检测方法的建立 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 步建立犬附红细胞体PCR检测方法。方法 据已发表的附红细胞体基因序列,设计了一对特异性引物,以犬附红细胞体基因组DNA和附红细胞体可疑病犬样品DNA为模板,聚合酶链式反应(PCR)扩增,扩增产物经克隆测序分析。结果 CR扩增产物大小为541bp,序列分析表明与GenBank数据中发表的序列一致,表明这套引物成功扩增出目的基因序列,但正常犬血样品DNA和弓形虫、伊氏锥虫、吉氏巴贝斯虫、犬细小病毒、犬瘟热的DNA样品都不能扩增出目的基因片段。结论 研究建立的PCR方法可以用于犬附红细胞体的检测,为犬附红细胞体病的诊断及分子流行病学的调查提供了新的手段。 相似文献
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副鸡嗜血杆菌16 S rDNA PCR检测方法的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
根据副鸡嗜血杆菌的16 S rDNA基因序列设计一对特异性引物XZIC1和XZIC2,对6株副鸡嗜血杆菌进行PCR扩增。结果显示,该对引物对6株副鸡嗜血杆菌均扩增出与预期大小相一致的282bp片段,而对鸡毒支原体、禽巴氏杆菌、鸡传染性支气管炎病毒、鸡新城疫病毒、大肠埃希菌、鸡白痢沙门菌、禽流感病毒(H9)、鸡喉气管炎病毒及葡萄球菌等9种病原体的扩增结果均为阴性。该PCR敏感性结果表明,本方法可以检测到10pg的副鸡嗜血杆菌DNA模板。采用引物XZIC1和XZIC2,对分别用副鸡嗜血杆菌ctcc253、ctcc255、ctcc257、ctcc269株感染SPF鸡的临床病料DNA进行PCR扩增,均可扩增出单一的282bp的片段。 相似文献
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PCR检测犬腺病毒方法的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
利用人工合成的两条引物,对病犬肝脏和细胞培养物冻融上清中的1、2型犬腺病毒DNA进行多聚酶链式反应(PCR)检测;再将扩增产物进行同位素标记,与纯化病毒DNA进行打点杂交。扩增产物经电泳分析结果表明,其大小与设计的引物间的序列大小基本一致;扩增产物经标记后只与犬腺病毒DNA发生杂交反应,表明其为犬腺病毒特异性核酸片段。 相似文献
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旨在通过比较针对弓形虫529 bp重复序列片段(Rep-529)的环介导等温扩增(LAMP)和荧光定量PCR(qPCR),筛选出较优的弓形虫DNA检测方法,并初步应用于宠物猫弓形虫感染检测。试验以含有弓形虫Rep-529的质粒作为模板,比较文献报道和自主设计的引物组的最低检测限,并用其他病原DNA进行交叉反应性测试,用筛选出的最优引物组对宠物猫粪中弓形虫DNA进行检测。结果表明:以包含Rep-529的质粒为模板比较检出限,LAMP 529-11引物组检测限最低,为103 copies/μL;其次为文献报道的LAMP RE引物组和qPCR引物组,检测限均为104 copies/μL;LAMP 529-3和2021引物组的检测限最高,均为105 copies/μL;各引物组对隐孢子虫、贾第鞭毛虫、旋毛虫、大肠杆菌、鼠伤寒沙门菌、细小病毒DNA均无扩增;用LAMP 529-11引物组,对39只宠物猫弓形虫总检出率为33.33%(13/39),其中29份粪便中检出11份阳性(37.93%,11/29),10份肛拭子中检出2份阳性... 相似文献