禽劳斯肉瘤病毒群特异性抗原基因gp27片段的克隆及序列测定

以RT-PCR方法从人工感染禽劳斯肉瘤病毒(Rous sarcoma virus，RSV)SR-RSV的SPF雏鸡体内及SPF鸡胚成纤维细胞(CEF)培养物中分别扩增出720bp的gp27片段，将RT-PCR产物重组到质粒栽体pUCl9中，并对重组质粒进行酶切分析及序列测定。结果表明，克隆片段为完整的目的基因，该片段的核苷酸序列与国外分离株RSV J02342的同源性达97．3％。     

新城疫流行病学变化及综合防制进展

新城疫（ND）是由新城疫病毒（NDV）引起的一种禽类急性、高度接触性、致死性传染病,被国际动物卫生组织（OIE）列为危害禽类的两种A类传染病之一。尽管世界各国对ND采取了严格的防控措施,如对强毒感染的扑杀措施、限制使用中等毒力疫苗及强制性免疫等措施,但它仍然是危害禽类的主要传染病,并且呈现新的流行趋势,使防制工作变得复杂化。     

兔出血症病毒抗原捕获ELISA检测方法的建立

用兔出血症病毒（RHDV）单克隆抗体包被酶标板,以兔多克隆抗体作为夹心抗体,建立RHDV抗原捕获ELISA检测方法,优化反应条件并对该方法的敏感性、特异性、重复性、稳定性等指标进行了测试和评价。结果表明,单抗最佳包被质量浓度为1mg/L,兔多抗血清最佳质量浓度为4mg/L。本方法可特异性地检测出兔肝脏病料中的RHDV,纯化病毒的最低检出量为26μg/L。对已知阳性样品的检测显示,捕获ELISA检测的病毒滴度是HA试验的3～13倍。对67份可疑病料,捕获ELISA阳性检出率为62.7%,HA试验阳性检出率为55.2%。用不同批次包被的酶标板重复检测已知样品显示出良好的重复性。本方法敏感性、特异性、稳定性良好,可应用于RHDV的快速、批量、特异检测。     

应用PCR检测鸭肠炎病毒弱毒在鸡胚体内的分布

根据GenBank已发表的鸭肠炎病毒（DEV）UL6基因的部分核苷酸序列，设计并合成一对引物．以鸭肠炎病毒中国商品化疫苗毒蚀斑纯化株（DEV Clone-03）DNA为模板，经PCR扩增出预期516bp的目的片段。将此片段插入克隆载体质粒pMD18-T，并进行序列测定，序列比较结果显示，此段序列与参考序列完全一致。用PCR检测DEV Clone-03在鸡胚体内的分布情况显示，接毒死亡鸡胚的尿囊膜、心、肝、脾、肺、肾和肌肉皮肤内均存在病毒。PCR敏感试验表明此方法可以检测到100μL尿囊液中提取的10^-3稀释的病毒DNA，相当于0．2个EID50病毒量的DNA。     

新城疫病毒F_(48)E_9株重组NP蛋白单克隆抗体制备及鉴定

制备新城疫病毒(NDV)NP蛋白单抗,以期为NDV抗原表位研究及检测方法建立方面奠定基础。利用NDV F48E9株pET32a-NP重组蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤细胞技术,间接ELISA筛选,获得了2株稳定分泌抗NP重组蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1G3、4B12。经间接ELISA测定,腹水抗体效价分别为1 2.56×105、1 5.12×105。亚类鉴定结果表明这两株单抗均为IgG1。Western blot分析结果显示,1G3、4B12均能特异性识别重组NP蛋白。与NDV感染细胞经间接免疫荧光试验检测均呈黄绿色荧光。经相加ELISA测定表明两株单抗识别的抗原表位不同。     

新城疫病毒F基因重要功能区和HN基因单核苷酸多态性研究

对广泛应用的新城疫疫苗株La Sota进行了全基因组测序,并对来自9个不同基因型新城疫病毒株的血凝素神经氨酸酶(haemagglution-neuraminidase,HN)基因和融合蛋白(fusion protein,F)基因47～435 nt区域进行了用单核苷酸多态性(SNP)分析.结果表明:在F基因47～435nt间和HN基因中都存在高密度的SNP位点,Tajima's D检验结果表明这些核苷酸变化符合中性突变假说,Pi(a)/Pi(s)分析暗示F蛋白编码基因N端的一些区段和HN蛋白编码基因中散在的部分区域受到了正向选择.但F基因和HN基因在整体上却都受到了强大的负向选择压力的影响.     

鸽Ⅰ型副黏病毒的分离鉴定及其F基因、HN基因的序列分析

利用RT-PCR技术,将从江苏省分离到的2株鸽源NDV的融合蛋白(F)和血凝素神经氨酸酶(HN)基因重要功能区片段进行扩增和序列分析,发现F蛋白多肽裂解位点的氨基酸序列为112K-R-Q-K-R-F117,符合NDV强毒株序列特点.F基因分型及同源性比较显示,分离到的2株鸽源NDV PG-CH-JS-1-05,PG-CH-JS-1-06属基因Ⅵ型.与国内参考毒株YN-P1 F基因推导的氨基酸序列同源性最高为96.4%,与LaSota的同源性为84.1%～84.2%,与F48E9的同源性为86.0%～86.2%;与国外参考毒株Warwick66的同源性为92.7%～93.3%;HN基因氨基酸序列同源性比较显示,与PB9601的同源性最低,只有3.4%～3.7%,与LaSota的同源性也较低,为88.5 % ～88.7%.而与国外参考毒株IT-227-82的氨基酸序列同源性为95.4%～95.6%,与Pigen-NY-US-1984的同源性为94.8%～94.9%,与248 V B的同源性为92.5%～92.7%,说明与国外鸽源NDV分离毒株的遗传距离较近.     

黑龙江部分地区野鸟源新城疫病毒HN、P基因的克隆和序列分析

为了解野鸟源新城疫病毒(NDV)基因变异情况,我们对14株2005年～2006年分离自黑龙江三江自然保护区和哈尔滨周边地区健康野鸟体内的NDV的HN和P基因分别进行RT-PCR扩增,并将其克隆至pMD18-T载体进行核苷酸序列测定。结果显示:14株野鸟源NDVHN基因开放性阅读框架(ORF)均为1716bp,编码571个氨基酸;P基因开放阅读框均为1188bp,编码395个氨基酸。13株野鸟源NDVHN和P基因核苷酸同源性分别为96.4%～99.8%和95.8%～100%,分别与参考毒株HN和P基因相比,同源性为82.3%～98.7%和78.5%～99.4%。1株野鸟源NDV与参考毒株Mutkeswar的HN和P基因高度同源。分析表明:这14株NDV病毒与我国普遍流行的基因Ⅶ型和基因Ⅲ型NDV具有很高的同源性,提示野鸟与家禽新城疫的发生在流行病学和生态学上有着非常密切的关系。     

猪圆环病毒Cap蛋白羧基端特异性单克隆抗体的制备

利用IPTG诱导表达含有猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白羧基端421-37nt的重组大肠杆菌pGEX-PCV421-37,经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)粗分离,免疫BALB/c小鼠,利用PCV2感染PK15细胞筛选PCV2特异性单克隆抗体.共获得5株,腹水的IFA效价范围为1:1 600～1:8 000;除单抗26H5-A3为IgG1亚型外,32A8-G5、33G10-F4、12B5-G3和14E12-A6全部为IgM型;全部轻链都属κ型.