水貂生长激素的原核表达及特异性抗血清制备

本研究旨在建立水貂生长激素(mink growth hormone,mGH)的原核高效表达体系,探索mGH蛋白规模化生产方法,利用获得的目的蛋白制备特异抗血清。将已构建的原核表达载体pET28b-mGH转化大肠杆菌Rosetta(DE3)TMpLysS感受态细胞,经IPTG诱导表达,超声破碎菌体后离心获得包涵体蛋白,利用8mol/L尿素对其进行溶解和复性,经Ni-NTA树脂亲和层析纯化获得重组蛋白。通过Western blotting检测及MALDI-TOFMS质谱分析对获得的蛋白进行鉴定。用SDS-PAGE电泳法检测蛋白纯度,用BCA法测定其浓度。复性mGH蛋白与完全弗氏佐剂或不完全弗氏佐剂乳化制备免疫抗原,采用皮下多点注射法免疫3只新西兰大白兔,首次免疫剂量为600μg/只,二免剂量为600μg/只,三免剂量为400μg/只。三免10d后分离制备血清,Western blotting法检测其特异性,间接ELISA法检测其效价。结果表明,原核表达的包涵体经Ni-NTA柱纯化后所得蛋白鉴定为mGH融合蛋白;SDS-PAGE电泳鉴定复性mGH蛋白条带单一,纯度达90%以上,BCA法计算蛋白浓度为669μg/mL,均达到了免疫动物的要求;制备的抗血清经Western blotting检测具有良好的结合特异性,间接ELISA法测定其抗体效价达1∶256 000以上。上述结果表明,原核表达载体pET28b-mGH可在大肠杆菌Rosetta(DE3)TMpLysS细胞中高效表达mGH融合蛋白,表达蛋白经变性、复性和纯化后免疫新西兰大白兔,可制备高效价特异性抗血清。     

疑似鸭瘟病毒的分离培养、鉴定

本实验通过鸭胚尿囊腔接种,对从山东采集的疑似鸭瘟的病鸭肝组织进行了病毒分离,获得了病毒分离株。此病毒用常规疫苗无法预防。对病毒进行负染、电镜观察。经形态学、理化特性、生物学特性、致病性、抗原性和分子生物学特性测定表明该病毒为不耐酸、不耐碱、不耐热、对氯仿处理敏感、核酸类型为双股DNA的有囊膜病毒,直径为120～200nm。此分离株对10日龄鸭胚的死亡率为100%,人工感染15日龄雏鸭的致死率为100%。通过人工感染雏鸭可成功复制出与自然感染病例相同或相近的肉眼病变及组织学病变。     

在收费服务大局中扎实做好反腐倡廉工作

胡锦涛总书记在第十七届中央纪委第三次全会上对领导干部提出了树立和坚持正确的事业观、工作观、政绩观的新要求。如何树立和坚持,笔者以为,纪检督查必须紧紧围绕中心,服务大局,认真贯彻落实中纪委全会精神,切实做好纪检督查各项工作,为促进高速公路收费服务平稳较快发展提供有力保证。     

抗菌肽天蚕素B突变体ABP-S1基因在E.coli中的融合表达

利用绿色荧光蛋白 (GFP)基因与天蚕素 B突变体 ABP- S1基因的融合基因 ,构建了 2个原核表达载体 p Am GS1和 p Bm GS1,转化表达宿主菌 E.coli BL 2 1(DE3)和 E.coli BL 2 1(DE3) p L ys S。结果 ,p Am GS1未能得到转化子 ,而p Bm GS1的转化子高效表达了融合蛋白 ,经 IPTG诱导 ,SDS- PAGE检查 ,融合表达产物最高可占菌体总蛋白的49.45 %。表达产物经包涵体复性 ,柱层析初步纯化 ,通过平板抑菌试验 ,对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、变形杆菌以及鱼类重要的致病菌嗜水气单胞菌等多种革兰氏阳性、阴性菌表现出较强的抗菌活性     

水貂肠道冠状病毒和呼肠病毒的病原性及在腹泻中的作用

1 前言水貂流行性腹泻是继水貂病毒性肠炎(MVE)、阿留申病、犬瘟热之后发现的传染性疾病。1975年首次报道于美国,称之为水貂流行性卡他性胃肠炎(ECG)或犹他州肠炎。我国自1987年起在许多貂场也有本病暴发,给养貂业造成严重的经济损失。1987年韩慧民等人报道在病貂粪便中发现有冠状病毒样粒子,但冠状病毒分离培养困难,因此无法进一步证实其对水貂的致病性。我们在研究过程中,用貂肺传代细胞系(ML)分离获得2株冠状病毒,用小鼠L细胞分离     

口蹄疫与经典猪瘟二联RT-PCR诊断方法的建立及其应用

根据口蹄疫病毒(FMDV)与猪瘟病毒(CSFV)基因组序列高度保守区,设计合成2对引物,以CSFV和FMDV培养物提取RNA并反转录,进行RT-PCR特异性片段扩增,扩增片段大小分别为200 bp、141 bp.结果表明,扩增产物与设计的2对引物之间的序列大小一致.通过特异性与敏感性试验,CSFV与FMDV培养物均可扩增至10-5倍稀释,最终建立的二联RT-PCR方法对上述2种病毒的敏感性亦可达10-4倍稀释,约10 pg的总RNA,证明本法对上述2种病毒具有快速、特异和高度敏感的特点.     

小齿短肛棒（虫脩）实验室饲养及断肢再生能力的观察

以榆树叶片为饲料 ,在室温条件下观察了小齿短肛棒 (Baculumminutidentatum)的发育过程及断肢的再生情况 ,并对虫体总RNA的提取方法进行了尝试。结果表明 :在实验条件下 ,小齿短肛棒整个发育期完成蜕皮 5次 ,7月份开始产卵 ,8月中旬成虫陆续死亡。断肢再生现象伴随蜕皮出现 ,是小齿短肛棒的一种极强的生物特性 ,且第 1次至第 3次蜕皮期间的再生现象明显 ,可能是研究断肢再生机制的理想时期。不同个体的再生能力未见明显差异 ,不同足的再生能力也没有显著差别 ,但伴随第 4次和第 5次蜕皮的再生现象较少出现。为小齿短肛棒的断肢再生机制研究积累了初步数据     

禽流感病毒、新城疫病毒、猪瘟病毒和口蹄疫病毒多联RT-PCR诊断技术的建立

选择禽流感病毒(AIV)、新城疫病毒（NDV)、猪瘟病毒(CSFV)和口蹄疫病毒(FMDV)基因组序列高保守区，按照多联PCR引物的设计要求，利用DNAsis计算机软件设计并合成了4对特异性扩增引物，扩增片段大小分别为470、320、200和140bp。以AIV、NDV、CSFV和FMDV的培养物提取RNA并反转录，进行RT-PCR特异性扩增。结果表明，各单项RT-PCR扩增产物与设计的4对引物之间的序列大小一致。在分别建立了各病毒单项RT-PCR及AIV与NDV、CSFV与FMDV二联RT-PCR的基础上，进一步优化各种多联PCR扩增条件，成功建立了上述4种病毒的四联RT-PCR技术。经特异性和灵敏度实验证明，本方法具有高度的特异性和灵敏性，其灵敏度为10pg总RNA。在3h内即可完成样品的检测。