3种致猪腹泻病毒的多重RT-PCR检测

试验建立了用于检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)与猪轮状病毒(PRV)的三重RT-PCR方法,以调查猪群中腹泻病毒感染情况.通过该方法对采自广东省规模化猪场的95份临床疑似病毒性腹泻病料进行了检测,结果表明,猪流行性性腹泻病毒阳性率为33.7%,猪传染性胃肠炎病毒阳性率为4.2%,猪轮状病毒阳性率为20%;猪流行性性腹泻病毒和猪轮状病毒混合感染率为8.4%,猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒混合感染率为2.1%.     

PEDV、TGEV、PoRV和PKV多重RT-PCR检测方法的建立及初步应用

为快速鉴别诊断猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(PoRV)和猪嵴病毒(PKV),根据PEDV的M基因、TGEV的N基因、PoRV的VP6基因和PKV的3D基因序列设计4对特异性引物,通过PCR扩增目的片段并构建重组质粒,建立了一种可同时检测4种病毒的RT-PCR诊断方法,该方法可特异性扩增这4种病毒的相应片段,而对猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)均无扩增,最低检出量分别为1.33×10^4、1.33×10^3、1.33×10^4、1.33×10^5copies/μL。应用该方法对临床55份猪腹泻样品进行检测,结果检测出14份PEDV、1份PoRV和27份PKV,未检出TGEV,其中PEDV和PKV混合感染9份。上述结果表明,建立的多重RT-PCR检测方法快速、特异、敏感,可用于以上4种腹泻病毒的临床检测和流行病学调查。     

秋冬季节猪病毒性腹泻病的控制

每年11月份至次年4月份期间是病毒性腹泻的多发季节,一旦爆发,就会给猪场造成很大的经济损失。引起猪只腹泻的病毒种类较多,有腺病毒、呼肠孤病毒、杯状病毒、星状病毒、小圆病毒、轮状病毒和冠状病毒等十几种,但危害严重的主要有猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）、猪流行性腹泻病毒（PEDV）和猪轮状病毒（RV）三种,     

秋冬季节猪病毒性腹泻病的控制

每年11月份至次年4月份期间是病毒性腹泻的多发季节，一旦爆发，就会给猪场造成很大的经济损失。引起猪只腹泻的病毒种类较多，有腺病毒、呼肠孤病毒、杯状病毒、星状病毒、小圆病毒、轮状病毒和冠状病毒等十几种，但危害严重的主要有猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）、猪流行性腹泻病毒（PEDV）和猪轮状病毒（RV）三种，     

2008-2018年我国猪流行性腹泻病毒混合感染分析

为了解我国猪流行性腹泻病毒混合感染的地区分布情况、季节性特征和混合感染病原类型,基于中国知网、NCBI等数据库,对2008-2018年间我国猪流行性腹泻病毒混合感染病例进行统计.结果显示,全国18个省市地区统计样本数量共计6951份,其中猪流行性腹泻病毒阳性样本数3345(48.12%)份,混合感染阳性样本数1325(19.06%)份;我国中部地区猪流行性腹泻病毒混合感染率高于其他省市;冬季(12~2月)为猪流行性腹泻病毒混合感染多发季节;细菌和病毒是猪流行性腹泻病毒混合感染的主要病原,在与细菌的混合感染中,主要混合感染病原类型为大肠杆菌,在与病毒的混合感染中,可以与猪圆环病毒2型、猪轮状病毒、猪瘟病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪伪狂犬病毒、猪嵴病毒、猪Delta冠状病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒进行混合感染,混合感染主要以二重混合感染(15.41%)为主,三重混合感染和四重混合感染分别占总样本数的3.25%和0.40%.本文归纳了近10年我国猪流行性腹泻病毒混合感染的基本特征,为了解猪流行性腹泻病毒混合感染及提高疫病综合防控水平提供了一定的参考.     

猪流行性腹泻病毒双抗夹心ELISA的建立

用猪流行性腹泻病毒（PEDV）免疫蛋鸡后提取抗猪流行性腹泻病毒的特异性卵黄抗体为捕获抗体,鼠抗猪流行性腹泻病毒多克隆抗体为检测抗体,建立了猪流行性腹泻病毒病原检测的双抗夹心ELISA,其最适包被抗体浓度为1:4000（12.35μg/mL）,鼠抗猪流行性腹泻病毒的多克隆抗体最佳浓度为1:6000（10.25μg/mL）,样品反应时间为30min,酶标抗体工作浓度为1:6000,并以OD450≥0.130作为阳性判断标准。该方法与猪传染性胃肠炎、猪轮状病毒、猪流感病毒、大肠杆菌K88、K99、987P、F41等病原无交叉反应。对经猪流行性腹泻病毒PCR检测的100份粪便样本进行检测表明,8份PCR检测阳性样本中6份为本法阳性;PCR阴性者本法全部阴性。实验结果表明该方法具有良好的特异性和敏感性,可用于猪流行性腹泻病毒的快速检测。     

2016年山东省猪病毒性疫病的病原学检测

为了解2016年山东省几种主要猪病毒性疫病的流行情况,采用荧光定量RT-PCR或PCR方法,对山东省部分猪场送检的730份病料进行了病原学检测。结果检出248份阳性病料,样品个体阳性检出率由高到低的病原依次为猪圆环病毒2型（13.02%）、猪蓝耳病病毒（10.41%）、古典猪瘟病毒（8.08%）、猪流行性腹泻病毒（7.26%）、猪伪狂犬病毒（3.84%）、猪轮状病毒（1.65%）、猪传染性胃肠炎病毒（0.14%）;样品混合感染阳性率为8.08%,以猪蓝耳病病毒和猪圆环病毒2型混合感染最为常见（3.02%）。本次病原学检测为山东省猪场病毒性疾病的综合防控提供了数据参考。     

青海省部分地区PEDV、TGEV和RV感染情况调查与分析

为了解青海省部分地区猪群中猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪轮状病毒(RV)导致猪病毒性腹泻疫病的感染情况与发生现状,本研究首次应用RT-PCR方法对2012年采集的青海省部分地区60份伴有腹泻症状的疑似猪病毒性腹泻病毒感染的临床病料进行猪流行性腹泻病毒、猪轮状病毒和猪传染性胃肠炎病毒的检测与分析.结果显示PEDV、RV和TGEV的阳性率分别为76.7％、51.7％和30.0％;总单独感染率为35.0％,各自单独感染率分别为25.0％、8.33％和1.67％;总混合感染率为51.67％,PEDV/RV、PEDV/ TGEV、PEDV/RV/TGEV的混合感染率分别为23.33％、8.33％和51.67％,不存在RV/TGEV混合感染型.结果表明,青海省部分地区存在这3种导致猪病毒性腹泻疫病病毒的流行,包括单独感染流行和混合感染流行;单独感染中以PEDV流行为主,混合感染中以PEDV/RV和PEDV/RV/TGEV混合感染流行为主;总混合感染率比总单独感染率高.目前青海省部分地区发生的猪病毒性腹泻以PEDV为主要病因,且PEDV/RV、PEDV/RV/TGEV混合感染现象严重,为该地区猪病毒性腹泻的诊断和防控积累了资料.     

规模养猪场仔猪病毒性腹泻病原的分子检测

为了解保山市隆阳区规模养猪场仔猪病毒性腹泻的病原感染情况,应用RT-PCR或PCR方法对采自保山市隆阳区不同地方16家养猪场腹泻仔猪的肛门拭子样品进行了5种病毒性病原的检测。结果显示阳性检出率最高的为猪圆环病毒(PCV-2),16家猪场均检出阳性样品,阳性样品率最高达到100%,最低33.33%;其次为猪流行性腹泻病毒(PEDV),16家养猪场有4家猪场检出了PEDV阳性样品,占采样养殖场数的25.00%,阳性样品率分别为25.00%、33.33%、25.00%、20.00%。但此次所采样品中未检出猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(PoRV)及猪瘟病毒(CSFV)3种病原,3种病原的阳性样品率都为0;检测的这93份样品中存在部分混合感染的情况。     

猪腹泻粪便中分离出Ⅱ型呼肠病毒

从５份粪样（３份采自腹泻猪，２份采自３月龄临床健康猪）分离到呼肠病毒，命名为ＯＳ－３２４通过交叉中和试验确定这些分离株的血清型为Ⅱ型呼肠病毒，血球凝集试验结果表明，这些分离株不同于其他呼肠病毒，呼肠病毒中和抗体调查揭示，Ⅱ型呼肠病毒广泛流行于冈山地区的猪群，本文是从猪分离到Ⅱ型呼肠病毒的首篇报告。     

猪传染性胃肠炎病毒和猪流行性腹泻病毒二联RT-PCR检测方法的建立

为了研究出一种快速、敏感、特异的诊断猪传染性胃肠炎和猪流行腹泻的方法,试验参照国内外已发表的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)基因序列及其相关的RT-PCR检测方法,根据猪传染性胃肠炎病毒S蛋白基因和猪流行性腹泻病毒s蛋白基因各设计1套特异性通用引物,扩增目的带分别为426 bp和584 bp.结果表明:建立的猪传染性胃肠炎病毒和猪流行性腹泻病毒二联RT-PCR检测方法具有快速、敏感、特异等优点,可为猪传染性胃肠炎病毒和猪流行性腹泻病毒的检测、流行病学调查及疫苗使用等奠定基础.     

贵州省部分地区规模化猪场仔猪4种致猪腹泻病病毒感染调查

为了解贵州省规模化猪场猪病毒性腹泻的流行情况,从5个地区9个规模化猪场采集的腹泻仔猪的粪便和病死猪的肠内容物及肠系膜淋巴结共66份,采用PCR或RT-PCR方法,分别进行猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(RV)和猪圆环病毒2型(PCV-2)的核酸检测。结果显示,PEDV、TGEV、RV和PCV-2检出率分别为72.72%、1.52%、12.12%和3.03%;PEDV/PCV-2、PEDV/RV、PEDV/TGEV混合感染率分别为3.03%、15.2%和1.52%,总混合感染率为19.70%,其中5个猪场为PEDV单独感染。结果表明,贵州省部分地区规模化猪场发生腹泻病的主要病原为PEDV,其次是TGEV、RV和PCR-2,且存在混合感染,为贵州省猪病毒性腹泻的防控提供一定的参考资料。     

三峡库区仔猪传染性腹泻病原调查

为了弄清三峡库区仔猪传染性腹泻病原的感染及流行规律,本试验于2013-2015年从三峡库区的18个规模化猪场采集了180份发生腹泻的病料进行猪致病性大肠杆菌(EPEC)、猪流行性腹泻病病毒(FEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪轮状病病毒(RDV)4种病原的检测,结果表明,三峡库区6个地区4种仔猪腹泻传染性病原检出率由高至低顺序为PEDV、RDV、TGEV和EPEC,依次为22%、12.7%.5.5%和3.8%,表明三峡库区规模化猪场PEDV和RDV感染广泛,且三峡库区规模化猪场存在多种病原混合感染情况。     

猪嵴病毒RT-PCR检测方法的建立及应用

根据GenBank中登录的猪嵴病毒3D基因保守序列,设计合成1对引物,以腹泻哺乳仔猪的小肠为起始材料,建立了猪峭病毒的RT-PCR检测方法,并用该方法对收集的50份哺乳仔猪腹泻样本进行检测。结果显示,该方法对模板的最小检测量是2.3 pg,检测猪其他常见致腹泻病毒均为阴性,同一样品3次试验结果一致;所扩增的序列经测序分析均为猪嵴病毒的3D核苷酸序列;仔猪腹泻样本的猪嵴病毒检出率达58%。结果表明,该方法敏感度高、重复性和特异性良好,可用于猪嵴病毒的分子流行病学调查和临床病例的快速诊断。     

猪病毒性腹泻疫苗研究进展

猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒是当前猪病毒性腹泻的主要病原,临床表现主要为呕吐、水样腹泻、脱水、逐渐消瘦等症状。不同年龄和品种的猪均可感染,严重危害养猪业的健康发展。疫苗接种是防控猪病毒性腹泻的关键措施之一,但大量临床试验显示抗体阳性率低,免疫效果不佳。文章针对猪病毒性腹泻疫苗的研究进展进行综述,旨在为临床上预防猪病毒性腹泻提供参考。     

病毒性腹泻应用RT-PCR检测猪流行性腹泻病毒

应用RT-PCR方法对来自广西5个猪场疑似猪流行性腹泻(PED)的37份病料和2份细胞培养物进行了检测,检出阳性30份,阳性率为76.92%;5个猪场均检测出猪流行性腹泻病毒(PEDV),结果表明,本病在广西的猪场中普遍存在.RT-PCR检测PEDV具有快速,准确的优点.     

应用RT-PCR检测猪流行性腹泻病毒

应用RT-PCR方法对来自广西5个猪场疑似猪流行性腹泻(PED)的37份病料和2份细胞培养物进行了检测,检出阳性30份,阳性率为76.92%;5个猪场均检测出猪流行性腹泻病毒(PEDV),结果表明,本病在广西的猪场中普遍存在。RT-PCR检测PEDV具有快速,准确的优点。     

猪腹泻相关肠道病毒分离研究进展

猪腹泻是全球养猪生产中最常见的疾病之一,病毒性腹泻具有传播快、致死率高和防控难的特点。常见的引起仔猪腹泻的病毒包括猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪轮状病毒(PoRV),近几年新发现的猪δ冠状病毒(PDCoV)、猪嵴病毒(PKV)和猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)也与仔猪腹泻相关。病毒分离是病毒感染诊断的金标准,也是进行病毒研究的前提。对上述6种常见猪肠道病毒的分离进展进行综述,可为掌握这些病毒的分离情况、疾病发展动向监测、疫苗研发以及猪腹泻病的防控提供参考。     

新疆部分规模化猪场猪病毒性腹泻流行病学调查与防控

2011年11月—2012年12月,对新疆部分规模化猪场开展了猪病毒性腹泻病的流行病学和病原学调查。结果表明,本病发生传播快,无明显季节性,主要造成10日龄内的仔猪腹泻、呕吐、脱水死亡,发病率10%～50%,死亡率可达100%。通过实验室检测,10家调查猪场送检的259份临床病料中猪流行性腹泻病毒阳性163份,库伯病毒阳性97份,猪流行性腹泻病毒、库伯病毒混合感染96份,未检出传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒。因此,对于新疆猪流行性腹泻病毒阴性规模化猪场应制定有效、可行的猪流行性腹泻病毒综合防控措施,防止猪流行性腹泻病毒感染造成严重经济损失。