应用套式RT—PCR检测广西临床病料猪流感病毒

套式RT-PCR技术是在常规RT-PCR的基础上设计1对内套引物,对常规RT-PCR的产物再进行一次PCR扩增,该技术比常规RT-PCR技术的检测敏感度更高,更适于检测病原RNA含量极其少的临床病料。通过应用套式RT-PCR方法对来自广西7个市不同猪场的疑似猪流感的临床病料进行猪流感病毒检测,结果发现,被检的7个市均检出猪流感病毒,72份病料中31份为阳性,阳性率为43．06％,可见广西有呼吸道症状的病猪中有较高猪流感病毒感染率,必须重视和加强广西猪流感的监测与防控工作。     

豚鼠对猪细小病毒弱毒苗抗体反应的研究(摘要)

用不同批次、不同剂量、不同保存时间的猪细小病毒Ｎ株弱毒苗接种豚鼠 ,观察豚鼠对ＰＰＶＮ株弱毒苗的抗体反应。其结果如下 :用 4种不同剂量的ＰＰＶＮ株弱毒苗免疫豚鼠 ,免疫后 14天均产生抗体反应 ,ＰＰＶＨＩ价分别为 :0 1ｍｌ剂量为 1:16～ 1:6 4;0 2ｍｌ为1:8～ 1:32 ;0 5ｍｌ为 1:16～ 1:32 ;1 0ｍｌ为 1:16～ 1:6 4,而对照豚鼠抗体反应为阴性 ,可见仅需 0 1ｍｌＰＰＶＮ株弱毒苗便可引起豚鼠产生抗体反应。同时比较了不同批次的ＰＰＶＮ株弱毒苗接种豚鼠产生抗体反应的情况 ;3批ＰＰＶＮ株弱毒苗接种豚鼠后 14天全部出现抗体反…     

鹅副黏病毒广西分离株生物学特性的研究

采用鸡胚接种和细胞培养的方法，从广西武鸣县某鹅场患病鹅脑、肝、脾中分离获得了2株病毒；经RT-PCR、HA和HI试验等研究，证实其为鹅副黏病毒。经测定，分离毒23-7-F3株的ELD50为10^-7.25／0．1mL。TCID50为10^-6／0．1mL，MDT为38．8h，ICPI为2。将该分离毒10倍稀释，接种鸡胚成纤维细胞，40h后出现细胞病变，证实该分离毒为强毒株。病毒能凝集鸡、番鸭、鸽、猪、山羊、兔、豚鼠、黄鳝及人O型红细胞。56℃10min、60℃10min、pH4溶液处理1h均不能使该病毒灭活，而50mL／L氯仿处理10min、60℃水浴30min能灭活该病毒。人工感染的11日龄雏鸡全部发病和死亡；感染的10日龄雏鹅60％发病，发病鹅全部死亡；感染的30日龄肉鸽发病率达83．3％(5／6)，死亡率100％。对1日龄肉鸭无致病性。     

猪细小病毒疫苗研究进展及应用情况

猪细小病毒病是由猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)引起的,该病的主要特征为受感染的母猪,特别是初产母猪及血清学阴性经产母猪发生流产,不孕、死胎、畸形胎、木乃伊胎及弱仔等,尤其以产木乃伊为主,而母猪本身并不表现除流产之外的临床症状,其他猪感染后也无明显的临床症状.血清学调查表明PPV感染在猪群中普遍存在,90%以上的老母猪和78%的小母猪呈PPV抗体阳性,第1次怀孕的6～9月龄小母猪若遭受PPV感染,最容易发生繁殖障碍.     

用狄高辛标记DNA探针从人工感染鸡脏器检出Ⅰ型马立克氏病病毒

用狄高辛标记ＤＮＡ探针从人工感染鸡脏器检出Ⅰ型马立克氏病病毒（ＭＤＶ），检出结果表明，人工感染ＧＡ强毒第三天就可从５只鸡中的三只心、肝、肺、肾、法氏囊、胸腺、肌胃检出Ⅰ型ＭＤＶ，第２５天５只鸡的脏器均能检出Ⅰ型ＭＤＶ。同时从感染第１０天就可从羽囊检出Ⅰ型ＭＤＶ，到第１５天羽囊检出阳性率１００％。     

猪细小病毒N株弱毒苗的保存温度和时间对豚鼠抗体反应的影响

用不同保存温度和时间的猪细小病毒Ｎ株弱毒苗注射豚鼠,检测ＰＰＶ－Ｎ株弱毒苗的保存期,结果为４℃至少能保存一年,－２０℃至少能保存３年。根据抗体反应的规律性,证明豚鼠可用作ＰＰＶ弱毒苗抗体检测的试验动物。     

猪细小病毒N株弱毒苗的免疫效果观察

经调查，广西猪群普遍存在猪细小病毒感染［１］。为了有效防制该病，本研究室已研制出能预防猪细小病毒感染的弱毒疫苗（简称ＰＰＶ－Ｎ株弱毒苗）。该弱毒苗用于预防猪细小病毒引起的繁殖失败，具有良好的免疫原性和安全性［２］。我们用四批ＰＰＶ－Ｎ株弱毒苗对广西多个流行该病的猪场的后备母猪进行免疫，取得了良好的效果，现将结果报告如下。１　材料和方法１．１　ＰＰＶ－Ｎ株弱毒苗本实验室研制，种毒按蒋玉雯等［２］的方法进行培养。１．２　试验动物５００克左右健康青年豚鼠，并经ＰＰＶ－ＨＩ检测为阴性。１．３　猪细小病毒…     

应用RT-PCR检测猪流行性腹泻病毒

应用RT-PCR方法对来自广西5个猪场疑似猪流行性腹泻(PED)的37份病料和2份细胞培养物进行了检测,检出阳性30份,阳性率为76.92%;5个猪场均检测出猪流行性腹泻病毒(PEDV),结果表明,本病在广西的猪场中普遍存在。RT-PCR检测PEDV具有快速,准确的优点。     

猪细小病毒自然弱毒N株遗传稳定性研究

本研究将PPV-N株通过敏感猪三代、猪肾传代细胞25代,测定该毒株对敏感猪的致病性,结果表明将PPV-N株连续分别通过PPV HI抗体阴性的4月龄小猪、后备母猪、怀孕母猪三代,均未从试验猪检出病毒血症和分离到病毒,且母猪产仔正常。在IBRS-2细胞中连续传代,随着传代次数的增加其细胞病变未见异常,毒价稳定在103.5TCID50/mL。将第1、5、10、15、20、25代病毒培养物接种PPV HI抗体阴性怀孕母猪,未从母猪测出病毒血症和检出病毒,所产仔猪PPV HI抗体阴性,未从弱仔猪脏器分离到病毒,说明该毒株毒力不返强,具有良好的遗传稳定性。这为该弱毒株成为一株良好的自然弱毒疫苗株提供了依据。     

猪细小病毒自然弱毒N株VP1基因的扩增与序列分析

对猪细小病毒自然弱毒N株（PPV—N株）VP1基因扩增及测序,利用生物信息学技术预测VP1蛋白的二级结构与B细胞抗原表位,以及分析该蛋白的氨基酸差异位点及密码子偏爱性。结果表明,PPV—N株VP1基因与弱毒参考毒株NADL-2VP1基因同源性最高,亲缘关系最近。PPV—N株VP1蛋白的二级结构较为复杂,以β-折叠为主,并有较多的转角和无规则卷曲区域,在序列的20～56、61～80、86～130、136～188区域为B细胞抗原表位的优势区域。PPV强、弱毒株VP1蛋白存在5个氨基酸差异位点（T-365-I,G-528-D,Q-533-H,P-586-S,K-715-R）,这些位点处氨基酸残基抗原性与毒力成正相关。PPV—N株VP1蛋白在A、C、E、G、H、I、K、N、Q、R、S、T、V和Y氨基酸于密码子选择上存在一定的偏爱性。