两种复合型卵黄免疫球蛋白粉对仔猪腹泻病防治效果的研究

试验旨在开发能够有效预防和治疗仔猪细菌性腹泻和病毒性腹泻的卵黄免疫球蛋白粉相关产品,将卵黄抗体的先进技术更好地应用于畜牧养殖中。采用两种复合型卵黄免疫球蛋白粉对人工感染细菌(ETEC)和病毒(PEDV和TGEV)的21日龄断奶仔猪进行预防和治疗试验。将复合型卵黄免疫球蛋白粉Ⅰ型按0.4%添加至仔猪断奶日粮中,攻毒后仔猪没有出现死亡情况,只有5头仔猪在攻毒初期出现轻微腹泻情况,随着饲喂的继续,5头仔猪腹泻很快得到控制,而攻毒对照组仔猪全部死亡;对21日龄仔猪攻毒,攻毒24h内仔猪陆续出现腹泻症状。在攻毒24h后采用复合型卵黄免疫球蛋白粉Ⅱ型产品以1∶3的比例配以葡萄糖生理盐水进行灌服治疗,经3d治疗后仔猪腹泻情况得到很大的改善,5d后腹泻仔猪基本痊愈,治愈率可达84%~88%。对存活仔猪进行带毒检测,结果显示,预防组存活仔猪带毒水平较其他组更低,治疗组其次,而药物治疗对照组带毒情况严重。     

猪流行性腹泻病毒双抗夹心ELISA的建立

用猪流行性腹泻病毒（PEDV）免疫蛋鸡后提取抗猪流行性腹泻病毒的特异性卵黄抗体为捕获抗体,鼠抗猪流行性腹泻病毒多克隆抗体为检测抗体,建立了猪流行性腹泻病毒病原检测的双抗夹心ELISA,其最适包被抗体浓度为1:4000（12.35μg/mL）,鼠抗猪流行性腹泻病毒的多克隆抗体最佳浓度为1:6000（10.25μg/mL）,样品反应时间为30min,酶标抗体工作浓度为1:6000,并以OD450≥0.130作为阳性判断标准。该方法与猪传染性胃肠炎、猪轮状病毒、猪流感病毒、大肠杆菌K88、K99、987P、F41等病原无交叉反应。对经猪流行性腹泻病毒PCR检测的100份粪便样本进行检测表明,8份PCR检测阳性样本中6份为本法阳性;PCR阴性者本法全部阴性。实验结果表明该方法具有良好的特异性和敏感性,可用于猪流行性腹泻病毒的快速检测。     

共表达K88/987p菌毛产肠毒素性大肠杆菌的分离鉴定及其卵黄抗体的制备

为制备针对一些大型养猪场产肠毒素性大肠杆菌(enterotrxigenic Escherichia coli,ETEC)分离株的特异性卵黄抗体(egg yolk immunoglobulin,IgY),试验对从这些养殖场分离的ETEC分离株菌毛基因类型进行了PCR鉴定,纯化该分离株的菌毛蛋白免疫蛋鸡制备IgY,对该IgY的效价、特异性和体外抑菌效果进行了检测。结果表明,该分离株具有K88和987p 两种菌毛基因,纯化后的分离株菌毛具有较强的免疫原性,经3次免疫后产生的IgY对K88和987p全菌和菌毛的效价可达到1:64 000,分离株菌毛IgY能特异地与K88和987p反应,与K99、F41无交叉反应,5 mg/mL分离株菌毛IgY在体外具有很好的抑菌效果。