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盐酸克伦特罗单克隆抗体的制备及检测方法的初步建立 总被引:1,自引:0,他引:1
选择一种新型载体阳离子化牛血清白蛋白(CBSA)与半抗原盐酸克伦特罗(CL)进行偶联.鉴定后作为免疫原免疫Balb/C小鼠,同时以卵清白蛋白(OVA)与CL偶联制备筛选抗原。应用杂交瘤细胞融合技术筛选后获得了1株稳定分泌抗CL单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为2H5。抗体的亚类为IgM,腹水及细胞上清间接ELISA效价分别为1:20480和1:320,通过竞争阻断实验证明其具有良好的特异性及敏感性,将半抗原经酶标后应用竞争ELISA方法初步建立了CL的检测方法,检测限可达1ng/mL,为进一步制备CL残留检测试剂盒打下了基础。 相似文献
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磺胺二甲嘧啶免疫抗原的合成研究 总被引:1,自引:1,他引:0
试验旨在研究磺胺二甲嘧啶(SM2)免疫抗原的合成。用重氮化方法将SM2分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,合成了免疫抗原SM2-BSA和包被抗原SM2-OVA。紫外扫描和聚丙烯胺凝胶电泳结果表明, SM2-BSA的紫外吸收光谱与BSA、SM2相比均发生了改变,证明偶联成功,并测得SM2-BSA的结合比为13∶1;用SM2-BSA免疫BALB/c小鼠,获得了高效价和特异的多克隆抗体。结果表明,半抗原SM2和载体蛋白偶联成功,并可获得高价、敏感的多克隆抗体。 相似文献
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为提高酶联免疫方法测定喹乙醇残留标志物(MQCA)的检测性能,设计了一种新型MQCA人工半抗原,该半抗原既完整保留MQCA分子特征性基团和结构,又具有便于和蛋白质载体偶联的基团-NH2。通过三步化学反应合成该半抗原,将其与蛋白质载体偶联成为免疫抗原后,进一步制备特异性抗体,研制了MQCA酶联免疫试剂盒,灵敏度高,特异性好,IC50为1.94μg/L。建立了测定动物性产品中MQCA残留量的直接竞争酶联免疫法,测定猪肝、猪肉、鸡肉、鸡蛋中MQCA的检测限分别为0.42、0.23、0.28、0.28μg/kg。猪肉中不同添加浓度MQCA(1,2,4μg/kg)的回收率为70%~97%;批内、批间变异系数均低于12%。本试剂盒可同时快速检测大批样品,有望在MQCA残留检测中发挥重要作用。研究有助于指导小分子药物半抗原的合理设计,为现有的半抗原设计方法提供新的理念和思路。 相似文献
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本研究旨在制备山羊支原体山羊肺炎亚种(M.capricolum subsp.capripneumoniae, Mccp)的单克隆抗体并筛选与抗体结合的抗原表位。试验用甲醛灭活的Mccp免疫BALB/c小鼠,运用传统的细胞融合技术进行融合获得杂交瘤细胞,亚克隆,制备单克隆抗体腹水,采用酶联免疫技术(ELISA)和免疫印迹(Western blotting)技术鉴定单克隆抗体的特异性及胶内酶切鉴定与抗体结合的抗原表位。最终成功筛选获得5株单克隆抗体,鉴定到3个与抗体结合的抗原表位,为下一步科学研究提供了初步且可靠的试验基础。 相似文献
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将与牛血清白蛋白(BSA)偶联的阿维菌素人工合成抗原AVM-BSA免疫8周龄雌性BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术获得了2株分泌抗阿维菌素特异性抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2F2和2H10.生物学特性鉴定的结果表明,2株杂交瘤细胞株诱生腹水的效价为1∶6 400,分泌的抗体亚型均为IgM;间接竞争酶联免疫吸附试验结果表明,抗体的50%抑制质量浓度(IC50)为101 ng/mL,2株单克隆抗体与伊维菌素、多拉菌素、红霉素和白霉素均无交叉反应,证实单克隆抗体2H10具有很强的特异性,可用于阿维菌素药物残留免疫分析方法的建立. 相似文献
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用抗原免疫构建分泌兔出血症病毒抗独特型抗体的杂交瘤细胞 总被引:3,自引:0,他引:3
用纯化的兔出血症病毒(rabbithaemorhagicdiseasevirus,简称,RHDV)免疫Balb/c小鼠。正如网络学说所指出的,从免疫鼠的杂交瘤细胞克隆中,不仅筛选出能分泌抗RHDV抗体(Ab1)的细胞克隆,同时也筛选出能分泌抗RHDV独特型抗体(anti-idiotypicantibodies,Ab2)的杂交瘤细胞,用抗原而不用单克隆抗体(Ab1)免疫,诱导产生抗独特型抗体(Ab2)是一种具有广阔的应用前景的新技术 相似文献
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以人工合成的氯霉素-牛血清白蛋白(CAP-HS-BSA)免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤技术获得了一株分泌抗氯霉素单克隆抗体(CAP-McAb)的杂交瘤细胞5D7,并对其进行效价、亲和力和特异性测定。结果显示,其分泌的抗体亚类为IgG1,间接ELISA检测细胞培养上清效价为1∶512,诱生的腹水经纯化后效价为1∶2×105,亲和常数为3.6×108L/mol;应用上述单抗建立的检测氯霉素的化学发光酶免疫分析法(ci-CLIA),其检测范围为0.001μg/L~10μg/L,检出限达0.0025μg/L,IC50为39.6μg/L,且与L-苯丙氨酸、L-酪氨酸、青霉素、四环素、庆大霉素等的交叉反应率均小于0.01%,可满足我国对水产品中氯霉素残留检测的要求。 相似文献
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甘肃省河西五市重大动物疫病免疫效果评价与分析 总被引:1,自引:0,他引:1
为评估甘肃省河西五市2015年春季重大动物疫病集中免疫效果,在河西五市共采集强制免疫畜禽血清640份,对家禽和家畜血清分别采用微量红细胞凝集抑制试验(HI)和酶联免疫吸附试(ELISA)验进行抗体检测,结果表明河西五市重大动物疫病免疫效果总体较好。 相似文献
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猪生长激素抗独特型抗体的制备及免疫学鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
应用猪生长激素(Ag)纯品,通过杂交瘤技术制备了猪生长激素单克隆抗体(Ab1)。Ab1经免疫亲和层析柱纯化后免疫新西兰白兔,其血清经饱和硫酸铵纯化后获得猪生长激素抗独特型抗体(Ab2)。再应用ELISA等方法进行鉴别。Ab2与Ab1呈阳性反应,与BALB/c小鼠r球蛋白呈阴性反应;Ab2与Ag竞争结合Ab1;Ab2抑制Ab1与Ag的结合。Ab1是针对猪生长激素纯品的单克隆抗体。Ab2是具有猪生长激素抗原内影像的抗独特型抗体。 相似文献
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从半抗原的术的最新研究情况,旨在为制备一些采用常规设计与合成、新型载体和佐剂的使用、基因工程抗体的应用等方面论述了小分子半抗原抗体制备技方法不易获得的小分子半抗原抗体提供新的方法和思路。 相似文献
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将已制备的抗磺胺甲噁唑(SMX)单克隆抗体(AbSMX)与温度敏感水凝胶(pNIPA)偶联形成水凝胶复合物(pNIPA—AbSMX),用异硫氰基荧光素(FITC)标记的抗原(FITC-AgSMX)和游离半抗原SMX竞争地与有限量的AbSMX和pNIPA—AbSMX反应,根据水凝胶相变温度以上免疫复合物沉淀的特性进行分离,结合接原抗体免疫反应测定SMX,建立了一种检测SMX的控温相变免疫分析方法。结果表明,SMX浓度在0.1ng/mL-100μg/mL范围内有良好的线性关系,60%抑制率时灵敏度为0.03μg/mL。 相似文献
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己烯雌酚完全抗原及其单抗的制备与分析 总被引:1,自引:0,他引:1
为建立己烯雌酚免疫学检测技术,试验采用混合酸酐法制备完全抗原DES-HS-BSA,并对制备产物进行紫外光谱、红外光谱、SDS-PAGE、MS分析鉴定,以DES-HS-BSA免疫Balb/c小鼠,用ELISA试验测定抗体.结果表明:半抗原衍生物DES-HS已被成功地偶联到牛血清白蛋白上,计算得每分子牛血清白蛋白上结合26个DES-HS;ELISA试验结果证实免疫小鼠血清中含有抗己烯雌酚的抗体,将免疫好的小鼠脾脏细胞和SP2/0细胞融合,筛选出了1株能稳定分泌己烯雌酚单抗的杂交瘤细胞株18G5,抗体亚型为IgG3. 相似文献
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酶免疫分析法诊断家畜妊娠研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
刘瑞生 《江西畜牧兽医杂志》1997,(3):7-9
母畜配种(或授精)后不久,必须进行妊娠诊断,以便加强怀孕母畜的饲养管理,保证顺利分娩或对未孕母畜及时补配,减少空怀。生产实践中广泛应用的直肠检查等方法,尽管简单易行,不需特殊设备,但检出时间长,判断结果不够准确。随着集约化畜牧业的发展,生产上迫切需要一种简单易行的早期妊娠诊断方法。酶免疫分析法(EnzymeImmunoassay,简称EIA)是由Dray等(1975)建立起来的一种早期妊娠诊断方法,以抗原抗体结合为基础,以酶促反应作为检测信号,将抗原抗体反应的特异性和酶的高效催化反应的灵敏性有机地结合起来,测量母畜体液… 相似文献
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犬瘟热病毒抗体检测方法的比较研究 总被引:19,自引:0,他引:19
用犬瘟热(CD)弱毒和自制的高免犬血清,建立了检测犬瘟热病毒(CDV)抗体的中和(SN)试验、间接荧光抗体技术(IFAT)和间接免疫酶染色法。这3种方法对38份CD弱毒疫苗免疫犬血清抗体效价的测定结果表明,当被检血清稀释度为1∶100时,SN试验、IFAT和间接免疫酶染色法测定时的阳性血清数分别为29,7和31份,IFAT和间接免疫酶染色法测定结果相对于SN试验结果的符合率分别为42.1%和94.7%。同时发现,当SN试验测定的血清效价在1∶100以上时,IFAT测定结果总是在1∶25以上,间接免疫酶染色法测定结果总是在1∶100以上。3种方法以各自初步确定的CDV血清抗体效价完全保护值指标计算所测血清的完全保护率,SN试验为76.3%,IFAT为78.9%,间接免疫酶染色法为81.6%。据此认为,IFAT和间接免疫酶染色法均可部分代替SN试验用于CD疫苗免疫效果的评价、免疫犬抗体水平的监测以及CD的流行病学调查 相似文献
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酶免疫法在检测动物性食品中药物残留的应用前景 总被引:1,自引:0,他引:1
酶免疫法(EIA)是以酶学和免疫化学为基础发展起来的一门新技术。自从本法引入实际应用以来,已被生物学、生物化学和医学等领域普遍采用。特别是在疾病的诊断方面应用更广。近年来有关使用本法测定动物的乳和血浆中有机化学残留物已有报道。这标志着本法在动物性食品卫生监测方面具有新的应用趋势。1 酶免疫法测定有机化学残留物的理论依据免疫学认为所有生物性和非生物性的有机化学物质都可被视为半抗原性物质,半抗原性物质具有反应原性 相似文献
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