鸡IgG快速分离纯化和纯度鉴定

随着免疫学实验技术的普及和发展,从鸡高免血清中提纯IgG已成为常用的免疫化学技术. 在提纯鸡IgG过程中,不但要保证除去绝大多数杂蛋白和白蛋白,保留大多数免疫球蛋白,包括各种IgG亚类,而且又不影响IgG生物活性.这就需要一种好的提纯方法,既要保证IgG纯度,又要保证其生物活性. IgG的经典提纯法是先用硫酸铵盐析,得到粗制的Ig(Immoun-globulin)然后再经分子筛层析,离子交换层析,亲和层析等方法进一步分离纯化IgG.这些纯化方法需要一定的仪器、设备,操作复杂,工艺流程较长,且试剂昂贵,在一般实验室难以推广使用.而且辛酸-硫酸铵两步法提纯的IgG同样能得到高纯度、高生物活性的IgG.     

MD病毒抗独特型抗体的研制

制备鸡马立克氏病病毒(MDV)抗独特型抗体(Ab2),探讨Ab2模拟抗原诱导免疫应答的能力.用MDV免疫SPF鸡,分离提纯鸡抗MD-IgG(Ab1),Ab1免疫BALB/C鼠,用鼠脾细胞与SP2/0细胞制备Ab2杂交瘤细胞株,间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞株,经克隆、纯化2×株抗MDV独特型抗体杂交瘤细胞株(6E5,7A12),其中6E5培养上清、腹水ELISA效价分别为4000×、10000×,免疫20 d攻毒,具有抗MDV感染保护.     

羊种布鲁氏菌疫苗株PCR-RFLP鉴定方法的建立

为建立一种羊种布鲁氏菌Rev.1疫苗株PCR-RFLP鉴定方法,利用羊种布鲁氏菌Rev.1具有链霉素抗性的特性,选取与链霉素抗性相关编码核糖体蛋白S12的rps L基因为模板设计引物,经PCR扩增后,将产物进行Nci I酶切,发现羊种布鲁氏菌疫苗株Rev.1出现约500 bp条带,而不具有链霉素抗性的羊种布鲁氏菌株16M则出现384 bp条带。结果表明,PCR-RFLP方法能够用于羊种布鲁氏菌Rev.1疫苗株的鉴定,这为今后区分羊种布鲁氏菌疫苗株Rev.1免疫与野株感染提供了基础。     

新疆2家牛场引进安格斯牛的牛病毒性腹泻、牛传染性鼻气管炎和布鲁氏菌病检测

为了解新疆当地牛病毒性腹泻(BVD)、牛传染性鼻气管炎(IBR)和布鲁氏菌病对引进安格斯牛的影响,对2家牛场新引进的和引进2年以上的安格斯牛进行BVD、IBR和布鲁氏菌病病原学和血清学检测。结果显示,新引进的安格斯牛未检测出BVD抗原、IBR病原核酸、布鲁氏菌感染抗体,而引进2年以上的安格斯牛虽未检出BVD抗原,但IBR病原感染抗体阳性率为100%,且PCR核酸阳性率为20%,布鲁氏菌感染抗体阳性率为5%。结果表明,新引进的安格斯牛虽未感染这3种疫病病原,但引进后有较大的感染风险。结果提示,牛场需加强BVD、IBR和布鲁氏菌病防控,实施全群免疫,筛选并淘汰感染牛,坚持自繁自养,慎重从场外引进牛只。     

羊种布鲁氏菌Rev.1突变株在BALB/c鼠中的免疫保护评价

为评价Rev.1-ΔKan-Vir B12突变株在BALB/c鼠中的免疫保护力,以Rev.1为参照,用Rev.1-ΔKanVir B12接种BALB/c小鼠,免疫45 d后用布鲁氏菌16M强毒株攻毒,15 d后取BALB/c鼠脾脏进行克脾指数测定和病理组织学检测。结果显示:BALB/c鼠免疫攻毒15 d后,Rev.1-ΔKan-Vir B12免疫组和Rev.1免疫组的克脾指数与对照组之间有显著性差异(P0.05),而Rev.1免疫组与Rev.1-ΔKan-Vir B12免疫组之间的克脾指数差异不显著(P0.05)。结果表明,羊布鲁氏菌Rev.1-ΔKan-Vir B12突变株与其亲本Rev.1株的免疫保护性无明显差异,具备作为布鲁氏菌病标记疫苗的潜力。     

布鲁氏菌病不同初筛方法及诊断试剂检测差异性分析

【目的】应用布鲁氏菌病4种初筛方法及11种商品化诊断试剂检测新疆地区采集的207份牛、羊血清学样品,分析结果差异,对方法及产品进行评价。【方法】以英国参考实验室APHA竞争性ELISA试剂盒检测结果为标准,确定布鲁氏菌病牛阳性血清78份、阴性57份,羊阳性血清52份、阴性20份。应用RBT抗原(Ⅰ)、(Ⅱ),FPA抗原(Ⅲ)、GICA(A、B、C、D)、iELISA抗体检测试剂盒(a、b、c、d)对上述样品进行检测。【结果】11种商品化诊断试剂检测结果敏感性介于42%~100%,特异性介于32%~100%,阴阳性符合一致率介于67%~98%,与英国参考实验室cELISA检测方法间的Kappa值介于0.35~1。【结论】采用不同方法、不同试剂检测结果间存有差异;应用同一方法,采用不同试剂结果存有差异;应用同厂家试剂,检测牛、羊血清,敏感及特异性结果也有不同。iELISA具有较好的敏感性,RBT有较好的特异性。RBT方法一致率最高,其次为FPA、GICA、iELISA。RBT、FPA与其完全或高度符合,GICA和iELISA为中度符合。RBT方法Ⅱ抗原优于Ⅰ抗原;GICA 4种试纸条差异较为显著,A最佳,B最差;iELISA试剂盒a、c优于b、d。     

布鲁氏菌种荧光定量PCR快速检测方法的建立

根据荧光定量PCR原理和技术,通过与Gene Bank数据库中布鲁氏菌基因组进行序列比对,选择不同种属布鲁氏菌的特异性位点,设计3对引物和Taqman荧光探针。将3对引物进行独立的种特异荧光定量PCR实验优化,最终实现在1次荧光定量PCR反应中完成对牛种、羊种、猪种布鲁氏菌的鉴别和定量。该检测方法特异、敏感、快速,既能实现对布鲁氏菌的分种,又能实现定量快速检测,对于布鲁氏菌病的流行病学调查和防治都具有重要意义。