青海贵南某牧场犊牦牛腹泻病原的分子鉴定分析

青海省贵南县某牧场发生犊牦牛腹泻疾病,为快速确诊发病犊牦牛腹泻的致病原因,及时防控和治疗,采集犊牦牛腹泻样品15份,利用形态学方法和分子生物学方法进行鉴定与分析。结果显示:引发该牧场犊牦牛腹泻的病原是隐孢子虫(Cryptosporidium)和邱氏艾美耳球虫(Eimeria zurnii,E.zurnii)、牛艾美耳球虫(Eimeria bovi,E.bovi)、椭圆艾美耳球虫(Eimeria ellipsoidalis,E.ellipsoidalis)的混合感染,测序结果显示,瑞氏隐孢子虫(Cryptosporidium ryanae,C.ryanae)的18S rRNA基因与参考序列中国株CP031554/3/2/1同源性在99%以上,各个种球虫与引用参考序列的同源性均在98%以上。同时,遗传进化树显示:本次检测的C.ryanae与中国株C.ryanae 18S rRNA基因同源性关系近,聚成一大支;三种球虫分别与其相同种聚集在一支上。结果表明,该牧场犊牛腹泻是由隐孢子虫和球虫的混合感染造成的,该研究为犊牛腹泻的病原学研究和流行病学调查提供了参考数据,为寄生虫性病原的对症治疗、对因治疗和辅助支持治疗提供了帮助。     

牦牛肺炎病原多杀性巴氏杆菌和殊异支原体的分子鉴定与分析

青海省刚察县某牦牛产业基地牦牛发生咳嗽,鼻孔有分泌物流出,呼吸困难等症状的疾病。为快速确诊发病牛的致病原因,及时防控和治疗,从发病和病死的牦牛中,采集鼻腔拭子和肺脏、胸腔积液,利用PCR方法进行分子鉴定与分析。结果显示:此牛场中引发肺炎的病原是A型多杀性巴氏杆菌和殊异支原体两种病原体混合感染,测序结果显示5个有效样品中鉴定的为完全相同的病原,P.multocida-GC1的Kmt基因与参考序列中国株CP031554/3/2/1同源性在99%以上,M.dispar-GC1与参考序列的16S rRNA基因同源性在97%以上。同时在遗传进化角度再次分析确认了鉴定的P.multocida与中国和俄罗斯的A型多杀性巴氏杆菌聚成一大支;鉴定的M.dispar与殊异支原体聚为一支。结果表明,青海刚察地区牦牛存在感染多杀性巴氏杆菌和殊异支原体的潜在风险,该研究为牦牛呼吸道疾病与肺炎的病原学调查和病原的流行病学调查提供了参考数据。     

一例羔羊腹泻疾病中沙门氏菌的分离鉴定及药敏试验

从送检的死亡羔羊中分离到1株病原菌,经病原菌的分离、生化试验、动物致死试验、药物敏感性试验,对该菌株进行了鉴定。结果表明:该病原菌为沙门氏菌。药敏试验表明在检测的17种抗生素中该菌株仅对头孢吡亏和诺氟沙星药物敏感,对多粘菌素E、环丙沙星和氧氟沙星等药物中敏,对杆菌肽、氯霉素和青霉素等药物耐药。     

自然青贮玉米饲料开窖后微生物菌群的动态变化

本试验对青海省乐都区自然青贮玉米开窖后饲料中的微生物进行了检测,本试验是从开窖开始至当年青贮玉米饲料饲喂结束共计285d。检测结果表明:青贮玉米饲料在开窖后的100d内pH值≤4.01,在100～255d pH值≤4.53,255～285d上升幅度较快达到4.92;在开窖后的第30d(8.67×10~5个·g^-1)乳酸菌的数量最多,之后随着贮存时间的延长乳酸菌数量呈波浪式的波动,总体呈减少的趋势;酵母菌和霉菌的数量在开窖后的第255d(8.17×10~6个·g^-1)最高,随着贮存时间的延长呈增加的趋势;好氧细菌的数量在开窖后的第285d(1.44×10~7个·g^-1)最高,随着贮存时间的延长也是呈增加的趋势。     

青海省刚察县某牧场牦牛源坏死杆菌的分子鉴定与分析

为确定青海省刚察县某牧场发生牦牛脾脓肿的病原菌,以便于及时防治,本研究于患病解剖牛的脾脓肿部位进行无菌采样,并进行染色形态观察、16S rRNA基因和lktA基因扩增与序列分析等。结果显示:脾脏脓汁涂片瑞氏染色后在显微镜下呈现紫色、丝状、长短不一的杆菌。基于细菌16S rRNA基因通用引物和lktA基因特异性引物扩增,均得到预期的基因目的片段。经测序后分析,两基因分别与坏死杆菌两种基因参考序列具有较高的同源性,都高达99%以上,此病原在分子生物学上鉴定为坏死杆菌,命名为Fusobacterium necrophorum QHGC;基于16S rRNA基因和lktA基因构建的进化树显示:本研究鉴定的克隆序列(16S rRNA和lktA基因)均与其他F.necrophorum分离株聚在一个分支上,在进化角度鉴定了此菌确实为坏死杆菌。本研究表明引起牦牛脾脓肿的病原菌是坏死杆菌,这为本地区牦牛脾脓肿的病原学研究和流行病学调查提供了初步数据,为牦牛脾脓肿的防治提供了参考依据。     

兔瘟病毒西宁分离株的分子鉴定及进化分析

本研究首次对处于青藏高原的西宁的兔瘟病毒分离株(命名为RHDV-QHXN1)进行了VP60基因克隆、测序,并与参考株、我国各地区流行株和其他国家流行株进行了基因非同义置换氨基酸分析,以及基因同源性的比较和进化树分析。兔子解剖病理学显示为典型的兔瘟临床症状;并进行了PCR分子鉴定,获得了预期大小的基因片段,测序分析比对分析后确定为兔瘟病毒,命名为RHDV-QHXN1分离株。该分离株与其他参考毒株AY269825(中国江苏南京)和DQ530363(中国陕西杨凌)的核苷酸同源性分别为97.41%和97.13%,氨基酸同源性达99.14和99.31%。进化树分析显示,RHDV-QHXN1与AY269825(中国江苏南京)株聚成微小分支。对RHDV-QHXN1分离株VP60基因的非同义置换的氨基酸分析结果显示,突变位点共有6处,分别位于第351位、359位、370位、432位、508位和573位的氨基酸处。     

青海牦牛脑多头蚴的线粒体cytb和nad4基因的序列测定及种系发育分析

本研究旨在鉴定牦牛疑似脑多头蚴病的病原,通过PCR分子生物学方法扩增了囊泡状样品的cytb基因和nad4基因序列,并进行分子鉴定与系统发育分析。结果:经分子鉴定,病原确诊为脑多头蚴;克隆的cytb和nad4基因序列分别与GenBank上的多头带绦虫参考序列的同源性达到98.7%和99.2%以上;利用GenBank中其他带属绦虫的cytb和nad4基因序列构建系统发育树,均与已鉴定的多头带绦虫聚在同一支上,但并未形成微小分支,与其它绦虫所属分支相距较远。本研究初步分析了脑多头蚴青海分离株与其他种属之间的系统发育关系,丰富了脑多头蚴的群体遗传学研究资料,为牦牛脑多头蚴病的诊断研究等提供科学参考。     

青海刚察某牧场牦牛犊牛腹泻病原的分子鉴定分析

青海省刚察县吉尔孟乡某牧场发生牦牛犊牛腹泻疫病,为快速诊断发病犊牛腹泻的致病病原,保证及时采取防控治疗措施,特采集牦牛犊牛腹泻粪便样本8份,利用显微镜镜检方法和分子生物学方法进行鉴定分析.结果显示:此牧场中引发犊牛腹泻的病原是隐孢子虫(Cryptosporidium),贾第鞭毛虫(Giardia)和牛轮状病毒(Bovi...     

天峻县羊传染性胸膜肺炎病的诊治

利用细菌分离培养方法和PCR方法对天峻县快尔玛乡某养殖户中2只病死绵羊组织进行检测,经细菌分离培养未分离到可疑病原,用PCR方法检测2只病死绵羊肺脏及1号羊脾脏,均为绵羊肺炎支原体阳性。综合临床症状、常规检测以及PCR检测结果,诊断为羊群感染了绵羊肺炎支原体,从而导致了传染性胸膜肺炎。     

山羊支原体山羊肺炎亚种单克隆抗体的制备及抗体结合抗原表位的筛选

本研究旨在制备山羊支原体山羊肺炎亚种(M.capricolum subsp.capripneumoniae, Mccp)的单克隆抗体并筛选与抗体结合的抗原表位。试验用甲醛灭活的Mccp免疫BALB/c小鼠,运用传统的细胞融合技术进行融合获得杂交瘤细胞,亚克隆,制备单克隆抗体腹水,采用酶联免疫技术（ELISA）和免疫印迹（Western blotting）技术鉴定单克隆抗体的特异性及胶内酶切鉴定与抗体结合的抗原表位。最终成功筛选获得5株单克隆抗体,鉴定到3个与抗体结合的抗原表位,为下一步科学研究提供了初步且可靠的试验基础。