团头鲂促甲状腺激素β亚基基因的克隆及序列分析

利用RT-PCR和cDNA末端快速扩增法（RACE）克隆团头鲂（Megalobrama amblycephala）脑下垂体中促甲状腺激素β亚基（TSHβ）基因，并对其基因结构和系统进化进行分析。该基因cDNA序列全长614bp；5’端非翻译区100bp；3’端非翻译区61bp；开放阅读框架（ORF）453bp，共编码150个氨基酸。其编码的氨基酸序列与鳙鱼（Aristichthys nobili5）、鲤鱼（Cyprinus carpio）、金鱼（Carassius auratus）、斑马鱼（Daniorerio）、鲑鱼（Salmo salar）、虹鳟（Oncorhynchus mysiss）、欧洲鳗鲡（A．nnguilla）的相似性分别为：99．3％、92％、92％、82％、62．6％、62．6％和56％。核苷酸序列分析显示，团头鲂与鳙鱼相似性最高，为98．23％；与欧洲鳗鲡相似性最低，为48．7％。说明唧亚基在长期的进化中相当保守。在所比较的9种鱼类该基因ORF氨基酸序列中都含有定位相同的12个半胱氨酸残基，它们在成熟肽中形成6个二硫键，这对保证促甲状腺激素的空间结构，维持促甲状腺激素的生理功能起着重要的作用。该基因的成功克隆不仅为TSHβ的分子进化和相似性比较研究提供了新的资料，而且对进一步研究该基因的功能、表达具有重要的意义。     

鲮β-肌动蛋白基因和启动子的克隆及序列特征分析

鲮(Cirrhinus molitorella)是华南地区重要的淡水养殖品种之一,但是鲮生长速度慢,且不耐低温,是目前鲮养殖产业所面临的主要问题。作为利用转基因技术培育快速生长鲮新品系研究工作的一部分,本实验利用PCR和一种新的染色体步移方法克隆了鲮β-肌动蛋白(β-actin)基因启动子和全基因组DNA序列。鲮β-actin基因长4 351 bp,由6个外显子和5个内含子组成。鲮β-actin基因启动子区域包含1个TATA盒,1个CCAAT盒,2个CArG调控元件和1个CRE调控元件,并且鲮β-actin基因内含子1中也含有一个CArG调控元件。这些结构特征说明本研究所克隆的鲮β-actin基因序列具有典型的启动子特征。鲮β-actin基因启动子的克隆为转基因鲮表达载体的构建提供了一个重要的调控结构元件。     

暗纹东方纯线粒体COⅢ克隆及序列分析

克隆并测定了暗纹东方纯线粒体基因组（mtDNA）含完整的细胞色素氧化酶亚基Ⅲ（COⅢ）及其下游70bp的tRNA^cly序列。COⅢ基因编码框包含786个核苷酸，编码262个氨基酸的蛋白质。鱼类COⅢ的序列组成对A＋T核苷酸的偏倚程度比较低。通过暗纹东方奎屯与GenBank中8个目12种鱼类的COⅢ序列同源性比较，显示暗纹东方纯与这些鱼类的COⅢ基因具有较高的同源性。根据暗纹东方纯与纯目其他5种鱼的COⅢ基因序列所建立的进化树。与传统的分类地位相吻合。推定的tRNA的二级结构具有典型的三叶草型结构。根据COⅢ序列构建的分子进化树分析，认为在采用线粒体基因序列进行分子进化分析时，应综合考虑物种遗传变异的特点。     

军曹鱼MHC-Ⅰα基因全长cDNA的克隆及其组织表达分析

采用同源克隆和末端快速扩增（RACE）方法，得到1330bp的军曹鱼（Rachycentroncanadum）MHC-Ⅰα全长cDNA片段。该序列包括76bp的5’末端非编码区（UTR），189bp的3’UTR及1065bp的开放阅读框（ORF），编码354个氨基酸，预测其蛋白质分子量约40．10kDa，等电点5．70。构建MHC-Ⅰα氨基酸序列的系统进化树并进行氨基酸相似性比对，结果表明，军曹鱼和已知鱼类及人类（Homosapiens）MHC-Ⅰα氨基酸的同源性在27．9％～67．1％之间。所推测的蛋白序列具有一些重要特征，包括前导肽、α1、α2、α3区、CP／TM／CYT区和保守的半胱氨酸等。Real—timePCR检测结果显示，MHC-Ⅰα基因在各个正常军曹鱼组织中均表达，但表达量各有不同，其中较强的表达于头肾；中等程度表达于鳃、脾和肠；在心、脑和肌肉中表达较弱。     

表达序列标签数据库搜索克隆斑马鱼QM基因及其数字化差异显示分析

QM基因是一种与肿瘤抑制、细胞生长、分化、发育和凋亡等有关的重要基因，已在人类及许多物种中得到了克隆，但鱼类中尚无报道。我们利用表达序列标签数据库和电子克隆等技术，成功克隆了斑马鱼QM基因，并对该基因的结构进行了系统分析。结果显示，斑马鱼QM基因cDNA全长769bp，含648bp开放阅读框架，编码215个氨基酸，5’UTR 25 bp，3’UTR122 bp，所编码的QM多肽分子量24.6kDa，等电点（pI）10．6，含潜在的蛋白酶C磷酸化位点、N-酰基化位点和酰胺化位点。比较斑马鱼QM和人等13个物种QM的同源性，发现其氨基酸序列相似性为66％～92％。数字化差异显示分析结果表明，QM基因在斑马鱼胚胎及成体多种组织中均有广泛表达。研究结果为今后利用生物信息学快速克隆新的鱼类功能基因打下了方法学基础，也为进一步研究鱼类QM基因功能提供了依据。     

3种野鲮亚科鱼类16SrRNA基因序列分析

野鲮亚科(Labeoninae)隶属鲤形目(Cypriniformes)中的鲤科(Cyprinidae,约有26个属近300个种。为研究其在鲤科鱼类中的系统发育关系,以16S rRNA基因作为遗传标记进行鲤科鱼类的系统发育分析。通过PCR方法, 扩增了长度为361-362 bp的3种野鲮亚科鱼类的16S rRNA基因部分序列,序列比对得到364个排列位点,其中94个为信息位点,占全部位点的26.8%。用Mega 2.1软件的NJ法构建分子系统树,结果表明:野鲮亚科鱼类没有形成单系类群,野鲮亚科的鲮、角鱼与鲤亚科的鲤、鲫形成姐妹群,然后再与野鲮亚科的麦鲮和露斯塔野鲮聚在一起,说明鲮与鲤亚科鱼类具有较近的亲缘关系。     

唐鱼β-肌动蛋白基因启动子的分离及其驱动活性的检测

利用PCR技术克隆唐鱼（Tanichthys albonubes）β-actin基因。所克隆的β-aetin基因片段为1464bp，包含长为1374bp的启动调控区和90bp的部分开放阅读框。启动调控区包括105bp的β-actin基因上游调控序列、第一个外显子和第一个内含子。上游调控序列中含有对转录起重要作用的CAAT Box、TATA Box、CArG Box等元件。将唐鱼β-actin启动调控区克隆到红色荧光表达载体pDsRed2-1上，并显微注射到唐鱼受精卵中，荧光显微镜观察红色荧光蛋白（RFP）的表达。结果表明，RFP在转基因唐鱼中的表达阳性率较高，最高可达51．8％，且RFP的表达水平较高。PCR检测转基因唐鱼的部分器官组织，在被检组织器官中均能检测到外源RFP基因；而RT-PCR以及Southern blot验证显示RFP mRNA的表达有所不同；Southern blot检测肌肉组织基因组DNA，可见比阳性载体大的杂交条带。说明所检测的组织中已发生外源基因RFP的整合，但有些组织存在表达水平较低或者不表达的现象。本实验分离到的β-actin基因启动子序列具有有效的驱动功能，可启动外源基因在唐鱼体内的高效表达，从而为下一步进行功能基因的转化研究奠定基础。     

军曹鱼白细胞介素1β基因的克隆、分析及表达

采用同源克隆和锚定PCR技术，从军曹鱼(Rachycentron canadium Linnaeus)中克隆到白细胞介素1β(interleukin-1β)基因cDNA的全序列。军曹鱼IL-1β的cDNA全长1104bp，3′非编码区域(UTR)为255bp，5′UTR为108bp，开放阅读框(ORF)为741bp，编码246个氨基酸，分子量大约为27．68kD，理论等电点为5．71。同源性分析表明，该序列与其他鱼类甚至哺乳动物的IL-1β基因具有很高的相似性，并含有白细胞介素家族的签名序列(signature)。同时，利用RT—PCR技术，对特异性病原刺激下该基因在鱼体内的表达情况进行初步研究，发现IL-1β基因在鱼体的多种组织中都有表达，而经过脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)刺激后，目的基因在组织中的表达明显增加，但是在不同组织内的表达存在差异。研究显示，军曹鱼IL-1β基因存在组成型和诱导型2种表达调控机制，在抵御病原感染过程中发挥重要作用。     

中华鳖群体间编码MHCⅠ类分子α2结构域基因的克隆及序列分析

通过主要组织相容性复合体（MHC）基因的分析，探讨了中华鳖5个群体（黄河、淮河、洞庭湖、鄱阳湖、太湖）间的遗传变异与分化。中华鳖编码MHCⅠ类分子α2结构域基因的多态性很丰富。主要表现在：（1）中华鳖编码MHCⅠ类分子α2结构域的基因序列存在插入或缺失变异，共获得7种不同长度的基因序列，其中222bp、231bp分别在42、23个体出现，为两种主要长度的基因序列；（2）共获得41种不同的核苷酸序列，这些核苷酸序列的相似度在0．386—0．995之间，表明序列间的歧异度较大；（3）在所有核苷酸序列中，共有250个有效位点，其中174个为变异位点，多态位点百分率达69．6％，但群体间存在差异：①多态位点百分率大小顺序为鄱阳湖鳖（71．02％）〉太湖鳖（58．05％）〉淮河鳖（57．69％）〉黄河鳖（55．32％）〉洞庭湖鳖（48．09％）；②核苷酸多样性指数（π）大小顺序为鄱阳湖鳖（0．4273）〉太湖鳖（0．2872）〉洞庭湖鳖（0．2840）〉黄河鳖（0．2727）〉淮河鳖（0．2463）；（4）分子方差分析（AMOVA）表明，太湖鳖与黄河鳖、淮河鳖2群体间，淮河鳖与洞庭湖鳖间有极显著的遗传分化（P〈0．001）；（5）根据核苷酸序列的平均遗传距离，用UPGMA和NJ法进行聚类分析，黄河鳖与淮河鳖、洞庭湖鳖与太湖鳖分别先聚在一起，最后再与鄱阳湖鳖聚类，显示鄱阳湖鳖与其它4群体中华鳖在MHC基因上有明显歧化。     

日本鳗鲡脂肪酸去饱和酶和延长酶基因的克隆与分析

利用RT—PCR和RACE方法克隆得到日本鳗鲡（Anguilla japonica）肝脏中控制高不饱和脂肪酸（highly unsaturated fatty acids，HUFA）合成的脂肪酸去饱和酶（fatty acid desaturase，FAD）和脂肪酸延长酶（fatty acid elongase，ELO）全长cDNA序列。结果表明，2456bp的FAD全长cDNA序列含长达1046bp的3’-UTR、75bp的5’-UTR和编码444个氨基酸的长1335bp的阅读框。编码的蛋白序列含有FAD全部的特征结构区，包括3个组氨酸簇、2个跨膜区和1个细胞色素h5结构域，与其他具有不同生活史鱼类的FAD氨基酸序列具有70．5％～77．5％的同源性；分析显示其在系统树中与溯河洄游鱼类的亲缘关系最近。克隆得到的ELO全长cDNA序列长1239bp，含有885bp的开放阅读框，编码294个氨基酸，该蛋白序列含有单一的氧化还原中心组氨酸簇、内质网停留信号和多个跨膜区等ELO特征结构，与其他鱼类ELO氨基酸具有87．1％～88．8％的同源性；其在系统树中与北非鲶鱼（Clarias gariepinus）和斑马鱼亲缘关系较近。日本鳗鲡FAD和ELOcDNA全序列的获得为今后进一步研究其体内高不饱和脂肪酸合成途径及阐明该途径在不同鱼类中的分子进化机理奠定基础。     

虾蟹血淋巴的抽取与固定

随着人们对甲壳动物生理生态学研究的逐步深入,尤其是与免疫应答密切联系的血液生理学领域被广泛关注.抽取和固定血淋巴,成为进行血液学研究必不可少的步骤.那么如何更好地抽取和固定血淋巴呢,本文以虾蟹为例做了总结,以供参考.     

UHMWPE绳网的研究进展

超高分子量聚乙烯(UHMWPE)是目前强度最高的绳网产品.本研究项目中使用的国产绳断裂强度为PA、PP绳的3.7倍,为HDPE、钢丝绳的5.2和8倍,伸长率为5%～9%,承载断裂强力的50%后,断裂伸长率为4%;安全性好,比常规化纤绳储存能量减少80%,反弹速度降低35%;有优异的疲劳强度,用负荷为断裂强力50%至95%共加载和卸载7000次,其剩余强力上升为原断裂强力的130%.采用国产UHMWPE制成拖网,扩大了网口扫海面积且有节约油耗的效果.应用胺脂类多组分树脂对绳网进行复合处理后,强度和耐磨性明显提高,在海洋、渔业工程、航天、石油、军事及公安等领域得到了应用.对其在各领域的应用研究进展和成果及前景进行了分析和预测.     

鱼类配子和胚胎冷冻保存研究进展及前景展望

种质资源是水产养殖生产、优良品种培育及水产养殖业可持续发展的重要物质基础。我国是一个水生生物种质资源较为丰富的国家 ,丰富多样的水生生物种质资源和遗传多样性对于我国水产养殖业的快速发展起到了非常重要的作用。然而 ,由于渔业资源的过度捕捞、无序利用及人工放流等 ,造成了某些鱼类资源的衰退和濒临灭绝 ,如不及时采取保护措施 ,若干年后 ,在自然界中将难以找到上述鱼类原种、良种的遗传资源 ;由于忽视鱼类种质保护及品种选育的工作 ,养殖鱼类近亲交配越来越严重 ,造成种质退化 ,遗传多样性减少 ,生长速度减缓 ,品质下降 ,对病害…     

鱼类产卵孵化方式及其适应意义

综述了卵生鱼类的浮性卵、粘性卵、沉性卵及特殊类型的产卵孵化方式及其适应意义,也描述了卵胎生和胎生鱼类的胚胎发育及产仔特征。     

温度与盐度对老年低额蚤和蚤状蚤生长及生殖的影响_

温度与盐度对老年低额蚤和蚤状蚤生长及生殖的影响王丹丽，李明云，杨天勇，胡章（宁波大学，３１５０１０）关键词老年低额　，蚤状　，温度，盐度，生长，生殖ＥＦＦＥＣＴＳＯＦＴＥＭＰＥＲＡＴＵＲＥＡＮＤＳＡＬＩＮＩＴＹＯＮＧＲＯＷＴＨＡＮＤＲＥＰＲＯＤＵＣＴ...     

水生环境中微藻与细菌相互作用机制及应用研究进展

藻类是水生生态系统的主要生产者,在水生生态系统中,细菌的生长依赖于藻类产生的有机物,并且使营养物质得以循环使用。生态学研究已经确定了特定种类的藻类和细菌的共同存在,表明了微藻和细菌之间存在特定的相互作用关系。本综述概述了这些相互作用对水生环境的影响,它们在自然环境中对物质循环的生态作用以及相互作用的形式。最后探讨了藻菌相互作用在各种环境和生物技术方面的应用及未来发展方向。     

国内外口蹄疫的流行情况及防制

口蹄疫是一种高度传染性疾病,以传播迅速和发病率高而被国际兽医局列为法定报告动物疫病之首。该病不但严重危害畜牧业和经济,还对国家声誉、国际关系也有很大影响。本文在查阅近几年国内外有关口蹄疫文献的基础上,对其流行情况、防制策略等方面进行了总结,为该病的预防和控制提供参考和依据。     

Composition and diversity of fish and fish catches in closures and open-access fisheries of Kenya

Abstract  Catch composition, relative abundance and diversity of fish catches in open access and three old fisheries closures were compared and contrasted with previous ecological studies. There was less variation in catch community composition among the fishing grounds than the closures, suggesting that fishing has homogenised catch composition. The trap survey found that some parrotfish [ Leptoscarus vaigiensis (Quoy &Gaimard), Calotomus carolinus (Valenciennes) and Scarus ghobban Forsskål] were relatively more common and that some important predators of macro-invertebrates [ Balistapus undulatus (Mungo Park) and Cheilinus chlorourus (Bloch)] were less common in the fishing grounds than closures. Unexpectedly, and in contrast to visual census results, cumulative number of species in catch surveys was higher in open access than closures sites. This may result from fishers covering more area and habitat or a reduction in the catch of competitively subordinate and rare species by aggressive, early-caught fish that can dominate bait. Comparisons of ecological visual census surveys and fisheries-dependent methods indicated that small differences in catch composition can reflect larger ecological differences and that baiting methods can underestimate biodiversity. Ecological impacts of fishing and large-scale changes in marine ecosystems must be considerable given the many fisheries-dependent assessments report modest changes.     

章鱼(Octopus)及头足类(Caphalopoda)的生产和消费对章鱼养殖的影响

通过对世界章鱼及头足类的生产和消费进行分析发现，阿根廷、摩洛哥、日本是头足类主要生产国，其中，摩洛哥、日本是章鱼主要生产国。世界的头足类消费国主要为日本、韩国、阿根廷等，其中日本是章鱼的主要消费国，其次为韩国等。上世纪章鱼产量逐渐提高．2000年达到顶峰。此后逐年下降，价格逐渐上扬。头足类。特别是章鱼的消费，与地区性和民族性有关，地中海区域及东亚和东南亚是消费章鱼及头足类的主要区域。头足类，特别是章鱼的消费，与国家的经济发展水平有关。随着东亚及东南亚，特别是中国的经济发展，头足类，特别是章鱼的消费量将逐渐增大。为了解决资源减少和消费量增大的矛盾，进行章鱼的人工养殖将是必然．作为世界加工厂的中国。为了满足逐渐增大的章鱼加工原料的需求，更应该进行真蛸的研究和养殖。     

幼蟹"登陆"现象的判析及防治措施

幼蟹“登陆”现象指培育幼蟹时，幼蟹成群结队爬上岸边．区应迟钝．行动缓慢，如果措施不得力，将出现大量死亡，目前对此产生的原因众说不一．笔者根据多年培育幼蟹的实践，对此现象进行判析并提出防治措施，供生产者参考。一、幼蟹“登陆”现象产生的原因幼蟹登陆现象是幼蟹在水中不能生存，自我保护的行为反应，它产生原因是多方面的，不管什么情况，“登陆”现象是一种反常现象，如不采取得力措施，轻的成活率低，重者全军覆没，对生产者造成极大的经济损失，笔者认为产生“登陆”现象主要是以下因素造成的：l购回的大眼幼体，淡化未到…