贝类等无脊椎动物抗菌肽的研究进展

贝类养殖因其具有食物链短、定居性强、育苗和养殖基础好、成本相对较低等特点,已成为我国沿海地区海水养殖的重要支柱产业之一。但是随着养殖品种的增加,养殖规模的扩大,以及各地区间的频繁引种使养殖病害问题日益严重。据统计:2002年水产养殖病害种类多达185种,造成的直接经济损失达141亿元。研究贝类的免疫系统将有助于这些养殖种类的疾病控制,使贝类养殖业得到更好的持续发展。贝类缺乏特异性的免疫系统,它们的免疫防御主要由细胞和体液免疫系统所组成,通过血细胞或淋巴细胞的吞噬、包囊作用排除异己的微生物和病原体。抗菌肽作为其…     

扇贝生物抗病功能基因的克隆表达与应用

随着海洋环境逐渐恶化和养殖的规模化发展,病害问题已经成为目前严重制约贝类养殖业健康发展的主要障碍,世界各海洋大国对此给予了高度重视,围绕养殖环境、病原以及养殖技术等方面开展了大量的研究工作,提出了许多防病治病措施,也取得了一定的成效.但从长远角度考虑,我国扇贝养殖业健康可持续发展的有效途径则是抗病品种或品系的选育以及高效、无毒、广谱新型药物的开发和研制.扇贝中抗病基因的克隆和表达无疑是研究和开发新型天然抗菌物质以取代化学农药和抗菌素的新途径,同时也是研究扇贝免疫防御机制、提高机体抗病力、实现遗传改良,选育抗病品种的基础和关键.本文综述了我们在扇贝生物抗病功能基因的克隆表达与应用方面的研究进展.     

自然养殖水体投喂CpG ODN和表面展示VP28的解脂耶罗维亚酵母对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)抗WSSV的免疫保护作用

用添加CpG寡聚核苷酸(CpG ODN)和表面展示VP28的解脂耶罗维亚酵母(VP28-yl)的饵料投喂凡纳滨对虾,进行田间中试实验.投喂30 d后进行WSSV感染实验,评估其对凡纳滨对虾的免疫保护作用.投喂实验结束后,CpG ODN投喂组对虾的相对增重率达到(65.8±7.8)% (P＜0.05),这暗示CpG ODN可能具有促生长作用.WSSV攻毒后,CpG ODN和VP28-yl投喂组对虾中WSSV拷贝数与对照组相比均显著降低(P＜0.05),相对免疫保护率分别可达到 26.7%和 36.7%.在投喂结束和WSSV刺激后,CpG ODN组对虾中的呼吸爆发水平均显著升高(P＜0.05).而在VP28-yl投喂组,WSSV引起的细胞凋亡则显著受到抑制(P＜0.05).此外,WSSV刺激后,STAT基因在CpG ODN组和VP28-yl组对虾中的表达水平均显著上调(P＜0.05),分别在第5天和第3天达到最大值,而对照组中则显著下调.研究结果表明,CpG ODN和VP28-yl增强了凡纳滨对虾抗病毒免疫力,对养殖对虾病毒性疫病的防控具有显著作用,可以作为免疫增强剂添加在饵料中,具有在养殖生产中推广使用的前景.     

4个缢蛏群体遗传结构的RAPD分析

为从分子水平了解缢蛏的种质资源状况,采用RAPD(randomamplifiedpolymorphicDNA)技术,对福建、浙江临海和象山、辽宁大连4个地理种群滩涂养殖和野生的缢蛏的遗传多样性进行了研究。结果表明:(1)4种群多态位点比例和平均遗传杂合度较高,分别为69 52%、72 38%、55 24%、69 52%和0 1909、0 2067、0 1916、0 1979,表明缢蛏种质资源状况良好;(2)养殖种群与野生种群相比,养殖种群在各遗传参数上都有不同程度的降低,因此加强缢蛏现有资源保护势在必行;(3)UPGMA聚类分析表明:象山种群与庄河种群亲缘关系最近,与临海种群最远。据此推测:每年采集野生苗种和半人工育苗和养成苗种的幼虫漂浮期时间较短等因素是造成上述结果的主要原因所在。     

用RAPD技术对5种经济海胆基因组DNA多态性的研究

利用随机扩增多态DNA技术对紫海胆(Anthocidaris crassispina)、海刺猬(Glyptocidaris crenularis)、马粪海胆(Hemicentrotus pulcherrimus)、光棘球海胆(Strongylocentrotus nudus)和中间球海胆(Strongylocentrotus intermedius)等我国最主要的5种经济类海胆基因组DNA的多态性进行初步研究一经20个随机引物扩增,共得到377条扩增片段．片段长度为200～1600bp。根据片段的共享度计算出平均遗传距离并采用CPTGMA和NJ两种聚类分析方法进行处理得到系统树。从聚类图得知长海胆科与疣海胆科有较近的亲缘关系,球海胆科的光棘球海胆与中间球海胆有较近的亲缘关系,其次是马粪海胆。本研究还讨沦了RAPD技术在海胆的遗传学研究中的广阔应用前景以及从分子生物学方法上为海胆传统分类方法提供科学依据。     

军曹鱼白细胞介素1β基因的克隆、分析及表达

采用同源克隆和锚定PCR技术，从军曹鱼(Rachycentron canadium Linnaeus)中克隆到白细胞介素1β(interleukin-1β)基因cDNA的全序列。军曹鱼IL-1β的cDNA全长1104bp，3′非编码区域(UTR)为255bp，5′UTR为108bp，开放阅读框(ORF)为741bp，编码246个氨基酸，分子量大约为27．68kD，理论等电点为5．71。同源性分析表明，该序列与其他鱼类甚至哺乳动物的IL-1β基因具有很高的相似性，并含有白细胞介素家族的签名序列(signature)。同时，利用RT—PCR技术，对特异性病原刺激下该基因在鱼体内的表达情况进行初步研究，发现IL-1β基因在鱼体的多种组织中都有表达，而经过脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)刺激后，目的基因在组织中的表达明显增加，但是在不同组织内的表达存在差异。研究显示，军曹鱼IL-1β基因存在组成型和诱导型2种表达调控机制，在抵御病原感染过程中发挥重要作用。     

秦川牛线粒体DNA高变区序列分析

本文对秦川牛线粒体DNA D－loop高变区的核苷酸序列进行了分析，结果发现，秦川牛D－loop高变区的核苷酸变异率约为1．08％，其核苷酸变异类型包括转换、颠换和插入3种形式，其中转换最常见。     

蒙古牛mtDNA D-loop高变区序列分析

本文对蒙古牛线粒体DNAD-loop高变区的核苷酸序列进行了分析。结果发现，蒙古牛D-loop高变区的核苷酸变异率约为0.40%，其核苷酸变异类型只有转换1种形式。     

大连地区刺参幼参溃烂病细菌性病原的初步研究

2003年以来,大连地区养殖的刺参Apostichopus japonicus幼参出现溃烂病,其症状是刺参表皮某部位先出现白色斑点,继而开始溃烂,严重时全身溃烂、自溶。解剖观察发现,呼吸树水肿严重,有的甚至糜烂。从患病刺参的表皮溃烂组织和呼吸树中分离出优势菌,经人工感染试验证实,其中菌株HXS31、HXS32、HXS34、HXS22和BP12是引起刺参溃烂病的病原菌。对5株病原菌进行16SrRNA基因序列同源性分析的结果表明,菌株HXS31、HXS32、HXS34、HXS22属于弧菌属Vibriosp.。用常规细菌学方法对菌株BP12的鉴定结果表明,菌株BP12为假单胞菌属。5株病原菌均为革兰氏阴性菌,经常规负染方法染色后用电镜观察,菌株HXS31、HXS32、HXS22呈卵圆形;菌株HXS34和BP12分别为圆形和弯杆状,且都具有单极生鞭毛。药物敏感试验结果表明,呋喃妥因对5株菌有较强的抑菌作用。     

3种鲍基因组DNA多态性的RAPD分析

利用随机扩增多态DNA技术检测了中间鲍Haliotis midae、皱纹盘鲍Haliotis discus hannai和九孔鲍Haliotis diversicolor supertexte3种鲍基因组DNA的多态性，初步进行了分子水平上的分类研究。经24个随机引物扩增，共得到376条多态性片段，片段长度为250—2500bp。根据片段的共享度计算出平均遗传距离指数，并采用UPGMA和NJ两种聚类分析方法进行处理得到系统树。在UPGMA聚类中，中间鲍与九孔鲍先聚在一起，有较近的亲缘关系，其次是皱纹盘鲍，而它们之间的遗传距离相差不大，NJ聚类图上就反映出3种鲍聚为3类，所以两种聚类分析结果基本一致，与它们形态上存在明显差异的结果基本吻合，说明RAPD技术可以作为鲍种质鉴定和分类的一种有效、简便的辅助手段。