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1.
为了获得有特色的观赏鱼,本实验室在2003年将含有海葵红色荧光蛋白基因的表达载体(同时含有标记基因新霉素磷酸转移酶基因(NPTⅡ))转入唐鱼(Tanichthys albonubes)的受精卯,获得转红色荧光蛋白基因唐鱼,对其外源标记基因NPTⅡ的表达产物和存在时间进行分析,为评价转基因鱼的生物安全提供依据.本实验对转基因唐鱼和非转基因唐鱼肌肉中抗生素标记基因(NPTⅡ)进行PCR检测和NPTⅡ表达产物的免疫检测试剂条检测,结果显示,转基因唐鱼检测到NPTⅡ基因和表达产物,而非转基因唐鱼中均没检测到该基因和表达产物存在.同时在唐鱼死亡后(水温20~25℃),应用酶联免疫吸附测定法(ELISA)对死亡0 (鲜活肌肉)、24、48、72、96、120和144 h组的转基因唐鱼肌肉中NPTⅡ蛋白的含量进行定量检测,结果表明,转基因唐鱼鲜活肌肉中NPTⅡ蛋白在肌肉中的含量为9.12 ng/g,随着转基因唐鱼死亡时间增加肌肉中NPTⅡ蛋白含量逐渐减少,死亡96 h组转基因唐鱼肌肉中NPTⅡ蛋白已经接近为0.结果表明,转基因唐鱼肌肉中NPTⅡ蛋白在白然环境中容易降解,推测其对环境安全隐患相对较低.  相似文献   
2.
养殖大口黑鲈的遗传多样性分析   总被引:7,自引:0,他引:7  
用RAPD技术分析了广东养殖大口黑鲈Micropterus salmoides 3个群体基因组DNA的多态性.结果表明:用12条随机引物对3个群体共88尾大口黑鲈的基因组DNA进行扩增,共获得了106个位点,平均每条随机引物扩增出8.8个位点;广州群体、顺德大良群体和顺德南水群体的多态位点比例分别为32.08%、33.02%和40.57%;Nei遗传多样性指数分别为0.1151、0.1176和0.1627;Shannon's遗传多样性指数分别为0.1708、0.1742和0.2378.这表明目前广东地区养殖大口黑鲈种质资源还具有一定的遗传多样性,但养殖群体的遗传多样性在降低,且具有不同程度的种质退化.  相似文献   
3.
鳜hepcidin cDNA的分子克隆及序列分析   总被引:6,自引:0,他引:6  
Hepcidin是近年来发现的一类具有独特性质的抗菌肽,根据C-enBank中收录的鱼类抗菌肽hepcidin的cDNA序列设计一对简并引物,用RT-PCR方法从鳜(Sinipercachuatsi)肝脏组织中克隆到hepcidin的cDNA,并构建pMD18-T-hep-cidin载体进行序列测定和分析。结果表明,该cDNA长为381bp,其中第20-277位是该基因的开放阅读框(ORF),编码86个氨基酸,形成由信号肽(24个残基)、前肽(42个残基)和成熟肽(20个残基)3部分序列组成的前体肽,与已报道的其他鲈形目鱼类hepcidin相比较,核苷酸序列的同源性为72.2%-92.0%,所推导的成熟肽与包括人类在内的其他生物hepcidin成熟肽的同源性在50%-86.4%,都含有8个保守的cys残基,可形成4个链内二硫键。鳜hepcidin cDNA片段的获得为以后的重组表达奠定了实验基础,也为抗菌肽hepcidin家族找到了新的成员。  相似文献   
4.
采用PCR方法从剑尾鱼(Xiphophorus helleri)线粒体基因组中扩增到1段约15.5kb的片段,测定了其中627个碱基的序列。经测序分析表明,该扩增片段包括486bp的D—环的部分序列以及D—环5端的tRNA^trh和tRNA^pro基因的完整序列。其中486bpD环序列包含3段保守的终止相关序列TAS、与TAS互补的序列以及类似其他鱼类线粒体CSB序列。tRNA^trh由线粒体DNA的H链编码,长度为72bp。tRNA^pro由线粒体DNA的L链编码,长度为69bp。并绘制了这2种tRNA的二级结构图。本研究所测定的基因序列已登录国际GenBank数据库,序号为AF489918。  相似文献   
5.
利用PCR技术克隆唐鱼(Tanichthys albonubes)β-actin基因。所克隆的β-aetin基因片段为1464bp,包含长为1374bp的启动调控区和90bp的部分开放阅读框。启动调控区包括105bp的β-actin基因上游调控序列、第一个外显子和第一个内含子。上游调控序列中含有对转录起重要作用的CAAT Box、TATA Box、CArG Box等元件。将唐鱼β-actin启动调控区克隆到红色荧光表达载体pDsRed2-1上,并显微注射到唐鱼受精卵中,荧光显微镜观察红色荧光蛋白(RFP)的表达。结果表明,RFP在转基因唐鱼中的表达阳性率较高,最高可达51.8%,且RFP的表达水平较高。PCR检测转基因唐鱼的部分器官组织,在被检组织器官中均能检测到外源RFP基因;而RT-PCR以及Southern blot验证显示RFP mRNA的表达有所不同;Southern blot检测肌肉组织基因组DNA,可见比阳性载体大的杂交条带。说明所检测的组织中已发生外源基因RFP的整合,但有些组织存在表达水平较低或者不表达的现象。本实验分离到的β-actin基因启动子序列具有有效的驱动功能,可启动外源基因在唐鱼体内的高效表达,从而为下一步进行功能基因的转化研究奠定基础。  相似文献   
6.
鳜鱼病毒核酸随机引物扩增与克隆↑(*)   总被引:3,自引:0,他引:3  
从感染鳜鱼病毒( Siniperca chuatsi Virus,简称SCV) 的鳜鱼体中分离病毒,提纯核酸作模板。通过RAPD 法,用带酶切位点的引物进行病毒核酸随机引物扩增,获得扩增带谱。从带EcoRⅠ酶切位点的引物扩增产物中,用琼脂糖凝胶电泳回收大小约为0 .4 和0 .5 Kbp 的片段,经EcoRⅠ酶切处理制备成带粘性末端的片段,分别插入质粒pUC19 的EcoRⅠ位点。EcoRⅠ酶对重组子进行了酶切鉴定,获得2 种带插入SCV 核酸PCR扩增产物的重组子。  相似文献   
7.
加州鲈卵泡抑素cDNA的克隆、分析和原核表达   总被引:1,自引:0,他引:1  
卵泡抑素是TGF-β超家族中一些成员的抑制蛋白,具有促肌肉生长的作用。采用RT-PCR和RACE技术从加州鲈成鱼卵巢总RNA中扩增得到卵泡抑素cDNA,序列分析结果表明,加州鲈卵泡抑素cDNA全长1444bp,包括开放阅读框966bp,5¢非编码区82bp,3¢非编码区359bp。该基因编码321个氨基酸,其中信号肽31个氨基酸,成熟肽290个氨基酸,成熟蛋白由四个功能区组成,分别为:N-domain、Domain Ⅰ、Domain Ⅱ和Domain Ⅲ,其中N-domain具有与TGF-β超家族中一些成员特异性结合的结构,可抑制这些蛋白发挥作用。将加州鲈卵泡抑素氨基酸序列与红鳍东方鲀、草鱼、斑马鱼、大西洋鲑和斑点叉尾鮰比较,同源性分别为97%、89%、88%、88%和70%,其中N-domain氨基酸序列的保守性更高一些,与红鳍东方鲀、草鱼、斑马鱼、大西洋鲑、斑点叉尾鮰、非洲爪蟾、人、猪、大鼠、鸡的相比较,同源性为75%~100%。为获得重组卵泡抑素蛋白,将成熟肽cDNA插入表达载体pET-32a(+),转化大肠杆菌,IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测,结果检测到一分子量约52kD的特异蛋白带,与预期大小一致,Western blot检测到表达产物表明成功获得了卵泡抑素的融合蛋白。加州鲈卵泡抑素cDNA序列和重组蛋白的获得为进一步研究鱼类卵泡抑素的促肌肉生长奠定了基础。  相似文献   
8.
牙鲆干扰素调节因子核心区序列的克隆及初步表达   总被引:2,自引:0,他引:2       下载免费PDF全文
采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,从牙鲆(Paralichthys loivaceus)肝脏总RNA中扩增出干扰素调节因子(fIRF)的核心区序列,定向插入质粒pUC18,克隆的牙鲆IRF cDNA序列分析表明,与Yabu报道的牙鲆IRF cDNA相比有1个碱基差异,但与推断的氨基酸序列完全一致,将牙鲆IRF的核心区序列 cDA定向插入原核表达载体pBV220,构建成牙鲆IRF表达载体pBVfIRF22,SDS-PAGE分析表明,经42度诱导,含pBVfIRF22质粒的大肠杆菌可表达一分子量约12000的特异蛋白。  相似文献   
9.
鲤生长激素酵母工程菌的分泌表达和产物纯化   总被引:1,自引:0,他引:1       下载免费PDF全文
取本室构建的鲤生长激素毕赤酵母工程菌GS115 (pPICZαA -GH) ,甲醇诱导 ,SDS -PAGE检测 ,证明重组鲤生长激素 (RecombinantCarpGrowthHormone ,rcGH)在酵母中得到分泌表达。重组酵母菌生长曲线显示 ,细胞从培养第 8小时进入对数生长期 ,至 32hOD660 升至峰值 11.5 ,此后OD660 缓慢下降。在以 10 0 %甲醛按 0 .5 %添加量诱导至 72h、pH为 6 .0时 ,rcGH表达量最高。凝胶扫描分析 ,分泌表达的rcGH占上清总蛋白的 36 .4 1% ,表达量为 30 0~ 4 0 0mg/L发酵液。经离子交换层析法纯化表达产物 ,纯度可达 95 %。纯化的rcGH注射奥尼罗非鱼 ,结果表明具有明显的促生长作用  相似文献   
10.
重组虹鳟生长激素酵母对罗非鱼的促生长作用研究   总被引:5,自引:0,他引:5  
采用表达重组虹鳟生长激素的酵母工程菌Y33作为饲料添加剂投喂奥尼罗非鱼鱼种。结果表明,酵母胞内表达的虹鳟生长激素具有生物活性,能够经口服被鱼体肠道吸收,对罗非鱼具有明显的促生长作用。  相似文献   
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