益生菌发酵乳无菌提取物对空肠弯曲杆菌flaAσ28启动子的抑制作用

为了研究益生菌发酵乳无菌提取物对食源性有害微生物(空肠弯曲杆菌)有毒基因表达的抑制作用,以利用空肠弯曲杆菌的有毒基因flaA σ28启动子和无启动子的质粒pRYluxCDABE联结构建的生物冷光转基因模型为试验材料,通过检测生物发光特性的方法,研究了空肠弯曲杆菌有毒基因flaA表达与益生菌(5种双岐杆菌,6种乳酸杆菌)发酵乳无菌提取物之间的关系。结果表明,益生菌发酵乳无菌提取物对空肠弯曲杆菌flaA σ28启动子的活性有显著的抑制作用(P<0.05),并可显著抑制空肠弯曲杆菌有害基因flaA的表达。     

贵阳市市售鸡肉中五种食源性致病菌污染状况调查研究

对贵阳市市售鸡肉中5种食源性致病菌的污染情况进行调查,结果表明:50份样品中食源性致病菌总检出率为48%,其中空肠弯曲菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌和单核细胞增生李斯特菌的检出率分别为24.0%、22.0%、6.0%、2.0%、0,40份冻鸡肉样品的检出率为55%,10份鲜鸡肉样品的检出率为20%。对农贸市场市售冻鸡肉样品进行抽查,34份样品中5种致病菌的检出率为58.8%,其中空肠弯曲菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌和单核细胞增生李斯特菌的检出率分别为32.3%、17.6%、5.9%、2.9%、0;对6份超市冻鸡肉样品进行检测,食源性致病菌的检出率为33.3%,其中空肠弯曲菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌和单核细胞增生李斯特菌的检出率分别为0、16.7%、16.7%、0、0。     

Convergence of Campylobacter species: implications for bacterial evolution

The nature of species boundaries in bacteria remains controversial. In particular, the mechanisms of bacterial speciation and maintenance in the face of frequent genetic exchange are poorly understood. Here, we report patterns of genetic exchange that show two closely related zoonotic pathogenic species, Campylobacter jejuni and Campylobacter coli, are converging as a consequence of recent changes in gene flow. Population expansion into a novel ecological niche generated by human activity is the most probable explanation for the increase in genetic exchange between these species. Bacterial speciation can therefore occur by mechanisms analogous to those seen in metazoans, where genetic diversification and incipient speciation caused by ecological factors have been reported in several genera.     

鸡肉中弯曲杆菌属的分离与鉴定

对从长春地区某一肉鸡屠宰加工厂在９个月期间内抽取的１５２份冻鸡肉样品进行弯曲杆菌检查,发现３８．２％的样品为弯曲杆菌属阳性。经ＡＰＩ Ｃａｍｐｙ鉴定系统鉴定,其中３２．９％为空肠弯曲杆菌（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）和大肠弯曲杆菌（Ｃ．ｃｏｌｉ）阳性。本次调查结果证实：在我国市场上销售的鸡肉中存在弯曲杆菌属的污染,如果加工不当或加工卫生不良,会对消费者的健康构成潜在的威胁。     

应用DNA环介导恒温扩增技术快速检测空肠弯曲菌

【目的】空肠弯曲菌是一种重要的人畜共患病致病菌,主要经被污染的水源、乳制品、生禽肉进行传播,建立快速、准确的诊断方法是防控空肠弯曲菌感染的重要措施。【方法】本文引入一种新型的核酸检测技术--DNA环介导恒温扩增 (loop-mediated isothermal amplification, LAMP),以空肠弯曲菌ORF-C序列为检测靶基因,建立了空肠弯曲菌LAMP快速检测方法。【结果】利用本LAMP方法对21种病原菌进行检测,仅空肠弯曲菌为阳性结果,说明该方法具有高度的特异性。该LAMP方法对空肠弯曲菌纯培养菌的检测灵敏度达6CFU/反应管,对污染材料中空肠弯曲菌的检测灵敏度为9CFU/反应管。【结论】本研究建立的空肠弯曲菌LAMP检测方法操作简便、检测快速,具有良好的实用性。      

蛋鸡和鲜蛋空肠弯曲菌带菌状况的研究

对420只蛋鸡和200枚鲜蛋进行了空肠弯曲菌检查。结果表明,蛋鸡平均带菌率为66.2％,在43～46用龄时带菌率最低(34.0％),26～28周龄时带菌率最高(92.0％),19～20周龄时带菌率居中(45.3％),差异极显著(P<0.01)。在200枚鲜蛋中未检出空肠弯曲菌。对15只空肠弯曲菌阳性蛋鸡进行该菌在体内分布的研究表明,十二指肠、空肠、回肠、盲肠、直肠和泄殖腔为空肠弯曲菌的主要栖居场所,在咽喉、腺胃、卵巢和输卵管内也有该菌检出,而在嗉囊中未检出该菌。同时,对蛋清抑制空肠弯曲菌的平板试验显示,蛋清没有抑菌作用。本文并对空肠弯曲菌在鸡体的垂直传播途径进行了讨论,认为空肠弯曲菌不经鲜蛋而垂直传播于仔鸡。     

空肠弯曲菌质粒DNA提取条件的优化

在碱解法的基础上,优化了提取空肠弯曲菌质粒DNA的条件。细菌经37℃,5%CO2培养48h后,每个样品以长满一个φ90mm平板(约2.86×106个/mL)的细菌用量为宜;溶菌液的最适SDS浓度和pH值为2%和12.0～12.5;最适温育温度和时间为55℃、60min。在该条件下用该方法提取了219株不同畜禽来源的空肠弯曲菌质粒DNA,质粒阳性率为10.96%,最大质粒DNA108kb,最小质粒DNA1.9kb。     

An alternative menaquinone biosynthetic pathway operating in microorganisms

In microorganisms, menaquinone is an obligatory component of the electron-transfer pathway. It is derived from chorismate by seven enzymes in Escherichia coli. However, a bioinformatic analysis of whole genome sequences has suggested that some microorganisms, including pathogenic species such as Helicobacter pylori and Campylobacter jejuni, do not have orthologs of the men genes, even though they synthesize menaquinone. We deduced the outline of this alternative pathway in a nonpathogenic strain of Streptomyces by bioinformatic screening, gene knockouts, shotgun cloning with isolated mutants, and in vitro studies with recombinant enzymes. As humans and commensal intestinal bacteria, including lactobacilli, lack this pathway, it represents an attractive target for the development of chemotherapeutics.     

西南部分地区圈养非人灵长类贾第虫感染情况调查及多位点基因序列分析

为了解西南部分地区非人灵长类贾第虫的感染情况及其集聚体和基因亚型分布,收集了西南地区部分动物园、养殖场以及试验动物养殖基地的207份猕猴、长臂猿、金丝猴和食蟹猴新鲜粪便,采用饱和蔗糖漂浮法处理样品,提取DNA,经巢式PCR扩增β-giardin(bg)、tpi和gdh基因,扩增产物经测序后进行分子生物学分析。结果表明:西南部分地区圈养非人灵长类贾第虫感染率为7.73%(16/207),16份阳性样品均为集聚体B(assemblage B)。感染的品种包括猕猴、长臂猿及食蟹猴。长臂猿感染率最高(38.89%),不同品种非人灵长类贾第虫感染率差异极显著(P<0.01)。所有阳性样品均成功扩增出bg、tpi和gdh三个基因的特异性产物。多位点基因序列分析和种系进化树分析结果显示,bg及tpi基因位点多态性变异明显,gdh位点多态性变异较小。本次调查结果表明,西南部分地区非人灵长类所携带的贾第虫具有人兽共患风险。     

四株猪伪狂犬病毒株的分离鉴定与主要毒力基因分析

猪伪狂犬病毒(PRV)的流行对中国养猪业造成巨大损失,而2011年后许多已免疫PRV疫苗的猪场频繁出现gE抗体转为阳性现象,感染猪出现PRV的临床症状,并出现所谓的“流产风暴”,学者们怀疑PRV的重新流行与病毒毒力增强和基因变异有关。为了解PRV变异情况,从各地疑似PRV阳性病料中,通过PK-15细胞分离出4个毒株,对毒株传代培养,进行TCID₅₀与LD₅₀测定,对主要毒力基因gB、gC、gE和TK进行扩增测序后分析,确定该4株病毒为PRV株,分别命名为FJ01株、FJ03株、YK株和MS2018株,滴度分别为10^-6.63、10^-7.08、10^-8.10、10^-7.18 TCID_50s·0.1mL^-1,对Balb/c小鼠的LD₅₀分别为10^2.17、10^2.72、10^3.44、10^3.51 TCID_50s,可见FJ01株的毒力最强。对4个毒株的毒力基因与其他PRV毒株进行同源性比对并建立进化树,FJ01株、FJ03株、MS2018株与中国近几年流行的变异毒株如HNX株、HNB株、JS-2012株等在一个大进化分支上,亲缘性较近,而与疫苗株Bartha-K61、SA215等,国际经典毒株Becker、Kaplan等亲缘性较远,变异较大。YK株与国际毒株亲缘性更近,其原因有待进一步探索。     

不同地区致奶牛乳房炎金葡菌毒力因子的分布

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)是引起奶牛乳房炎的重要病原,该致病菌主要通过毒力因子刺激乳腺组织引起炎症反应。为研究金黄色葡萄球菌重要毒力因子分布的地域性差异,本试验从上海以及云南的3个奶牛场采集奶样和环境污水,利用PCR技术对70株分离菌株和2株标准菌株进行检测。结果显示,在上海地区分离的18株金黄色葡萄球菌中,有7种毒力基因nuc(94.4%)、FnBPA(77.8%)、Hla(88.9%)、Hlb(94.4%)、ClfA(88.9%)、spa(61.1%)和coa(94.4%)的检出率超过50%;在云南分离到的19株金黄色葡萄球菌中,有8种毒力基因nuc(84.2%)、FnBPA(78.9%)、Hla(100%)、Hlb(78.9%)、ClfA(52.6%)、spa(78.9%)、set1 (57.9%)和coa(84.2%)的检出率超过50%,这说明该8种毒力因子可能是致奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌中主要的毒力因子。     

天津某牧场奶牛乳房炎奶样与环境中细菌的分离与鉴定

为了解天津某牧场奶牛乳房炎奶样及环境中细菌的种类和流行性,采用美国加州乳房炎(CMT)方法筛选6头乳房炎患病奶牛,通过传统培养方法对乳房炎奶样、患病牛畜舍及奶厅样品进行细菌分离与鉴定。结果显示,乳房炎奶样及环境样品中共分离鉴定出217株菌株,主要优势菌为芽孢杆菌属(Bacillus)(146/217株,67.28%),乳房炎奶样中占比25%(3/12),畜舍样品中占比为47.87%(45/94),奶厅样品中占比为88.29%(98/111)。乳房炎奶样中主要鉴定出4株葡萄球菌属(Staphylococcus);畜舍样品中共鉴定出10株Staphylococcus和8株肠杆菌属(Enterobacter),新垫料与饲料中各鉴定出1株克雷伯氏菌属(Klebsiella);在奶厅样品前药浴液与后药浴杯样品中分离鉴定出3株BMV7。综上,本研究探究了天津某牧场中主要流行的微生物种类,提出该牧场卫生管理防控薄弱环节,为牧场奶牛乳房炎防控与卫生管理提出建议与意见,为进一步研究乳房炎致病菌溯源奠定基础。     

天祝白牦牛饲草致病菌分析

以天祝白牦牛的饲草为对象,定量研究了天祝县石门、炭山岭、松山、西大滩、抓喜秀龙 5 个地点的白牦牛饲草(夏秋牧草、冬春牧草)中志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、病原性大肠艾希氏菌、沙门氏菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌、空肠弯曲菌 7 种消化道致病菌的污染情况,并分析了造成白牦牛饲草料污染的 7 种致病菌。夏秋牧草中各种消化道致病菌检出率顺序为:志贺氏菌(41.24 %)>金黄色葡萄球菌(12.19 %)>沙门氏菌(7.32 %)>病原性大肠艾希氏菌(4.88 %),而小肠结肠炎耶尔森氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌、空肠弯曲菌未检出;冬春牧草中致病菌的检出率顺序为:志贺氏菌(10.25 %)>金黄色葡萄球菌(7.69 %),而病原性大肠艾希氏菌、沙门氏菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌、空肠弯曲菌均未检出。5 个采样点中,夏秋牧草中 7种消化道致病菌总体污染程度为石门(100.00%)>炭山岭(62.5%)>松山(60.00%)>西大滩(14.28%)>抓喜秀龙(0);冬春牧草总体污染程度为炭山岭(33.33 %)>石门(28.57 %)、松山( 25.00 %)>西大滩(0)、抓喜秀龙(0)。致病菌污染夏秋季高于冬春季。天祝白牦牛饲草已经存在轻度致病菌污染.     

合肥市超市售鸭肝主要微生物污染状况调查

采用国标法对合肥市2个超市销售的鸭肝共180份进行细菌总数、大肠菌群及4种常见食源性致病菌等微生物指标检测鉴定。结果表明:随机抽检的180份鸭肝中,菌落总数和大肠菌群的总超标率分别达32.2%和15.8%,沙门氏菌检出率为7.2%;金黄色葡萄球菌检出率为2.2%;志贺氏菌检出率为0.55%;肠出血性大肠杆菌O157∶H7未被检出。     

猪肉及其制品中几种病原微生物芯片检测方法的建立及应用

[目的]建立金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、大肠杆菌O157：H7、单增李斯特氏菌和空肠弯曲杆菌检测的基因芯片方法,并在实际应用中检测芯片的效果。[方法]以5种目标菌保守基因片段为模板设计引物,用待检样品增菌后提取的DNA模板进行2个独立的多重PCR扩增。扩增产物与固定有5种目标致病菌特异性探针的基因芯片进行杂交,用芯片扫描仪对芯片杂交结果进行扫描并判定结果。[结果]使用基因芯片检测5种细菌的检测下限分别为：金黄色葡萄球菌8.7×105cell/ml;大肠杆菌O157：H7 5.0×105cell/ml;沙门氏菌4.4×105cell/ml;单增李斯特氏菌2.4×105cell/ml;空肠弯曲杆菌6.2×106cell/ml。[结论]与传统方法比较,芯片法具有较高的特异性和灵敏性,是一种能应用于实际的快速高通量检测细菌的方法。     

新疆地区牛分枝杆菌29个毒力基因的突变分析

为了解我国新疆地区牛分枝杆菌的毒力基因变异情况并初步评估其毒力变化,利用聚合酶链式反应(PCR)检测临床分离的66株牛分枝杆菌的29个毒力基因,经Sanger测序后与标准株AF2122/97和本实验室保存的两株牛分枝杆菌(M.bovis C68004和M.bovis N)进行序列比对,对基因突变情况进行统计,分析基因突变对其编码蛋白功能和结构的影响。结果表明:1)临床分离株与本实验室保存的高毒力菌株M.bovis N毒力基因突变位点具有很高的相似性,在检测的29个毒力基因中,50%以上临床分离株与M.bovis N共有25个基因序列一致;2)临床分离株广泛存在的Mb2958、Mb2982C和Mb1553C基因突变PROVEAN评分均低于-2.5,可能改变其编码的酶催化活性,进而影响细胞壁脂类合成;3)Mb0607、Mb0609、Mb0606、Mb2979C和Mb1214基因突变分别造成哺乳动物细胞入侵蛋白、甲基转移酶和酰基转移酶蛋白二级结构改变,或许对细菌的胞内生存产生影响。综上,本研究筛选出8个关键毒力基因,这些基因的突变可能在新疆地区牛分枝杆菌流行菌株的毒力变化中发挥重要作用;同时,本研究揭示了关键毒力基因的突变特征,为进一步研究牛分枝杆菌遗传多样性及进化规律奠定了基础。     

空肠弯曲菌flaA基因序列及功能预测分析

[目的]对空肠弯曲菌空肠弯曲菌flaA基因的序列及功能进行预测分析。[方法]分析了多个空肠弯曲菌flaA核酸及氨基酸序列组成和序列差异性;预测分析了flaA基因密码子使用偏好性、蛋白结构和功能域、Fla A与相关功能蛋白的互作情况。[结果]不同菌株的flaA基因序列存在差异性,且差异主要存在于序列的中间区域。不同空肠弯曲菌菌株的同一基因在密码子选择上存在差异。Fla A与多个蛋白存在不同形式的相互作用。[结论]该研究可为空肠弯曲菌flaA基因序列分析和功能研究应用提供基础和依据。     

多重耐药大肠杆菌中前噬菌体的分布特征及诱导分离

[目的]通过调查前噬菌体在多重耐药大肠杆菌中的分布特征、诱导分离以及前噬菌体中耐药基因与毒力基因的流行状况,为研究前噬菌体介导耐药基因在细菌的传播提供科学依据.[方法]挑选前期保存的2018-2019年广东省分离的131株禽源多重耐药大肠杆菌进行核酸提取及全基因组测序,将二代测序的结果组装拼接成全基因组序列,上传至噬菌...     

The cheetah is depauperate in genetic variation

A sample of 55 South African cheetahs (Acinonyx jubatus jubatus) from two geographically isolated populations in South Africa were found to be genetically monomorphic at each of 47 allozyme (allelic isozyme) loci. Two-dimensional gel electrophoresis of 155 abundant soluble proteins from cheetah fibroblasts also revealed a low frequency of polymorphism (average heterozygosity, 0.013). Both estimates are dramatically lower than levels of variation reported in other cats and mammals in general. The extreme monomorphism may be a consequence of a demographic contraction of the cheetah (a population bottleneck) in association with a reduced rate of increase in the recent natural history of this endangered species.