4株芽孢杆菌的分离鉴定与生物学特性分析

从水产饲料中分离得到4株菌株,分别命名为A2、A3、A4、A5。通过16S r DNA基因序列分析,结合电镜结构观察、生长特征分析、产酶试验以及抑菌试验发现,菌株细胞形态为杆状,革兰氏染色呈阳性;A2、A4、A5菌株最适生长温度为45℃,A3菌株最适生长温度为50℃;4个菌株均产蛋白酶,A2菌株产蛋白酶能力最强;A2、A3菌株产淀粉酶,A4、A5菌株基本不产淀粉酶;4株菌株对大肠杆菌都没有抑菌作用,A2和A5菌株对共培养的沙门氏菌分别有31.2%和22.9%的抑菌效果。序列分析表明,A2菌株属于嗜热枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),A3、A4、A5菌株属于嗜热地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。通过对4株芽孢杆菌进行初步分析研究,可为后续试验以及微生态饲料添加剂的开发及应用奠定基础。     

APEC感染雏鸡小肠炎症相关基因的RNA-Seq分析

【目的】研究禽致病性大肠杆菌(APEC)感染雏鸡小肠炎症相关基因表达的变化。【方法】对14日龄雏鸡腿部肌肉注射0.5mL/羽1×106 CFU/mL的APEC菌液,观察雏鸡的发病情况,并取病变严重雏鸡空肠为测序样品,同时以注射等量生理盐水为对照,采用RNA高通量测序(RNA-Seq)技术,筛选分析感染和未感染APEC雏鸡小肠炎症相关基因表达的变化。【结果】以差异倍数在2倍及以上为标准,从试验组与对照组共筛选出差异表达基因131个。GO分类结果显示,有87个差异基因得到491个GO功能注释,这些基因主要富集在炎症反应、肝素整合、白细胞介素-6的生物合成等过程。基于KEGG分析,仅有29个差异基因得到注释,涉及41个信号通路,主要参与的信号通路有PPAR、花生四烯酸代谢、MAPK等。【结论】APEC感染雏鸡后会引起机体炎症相关基因表达的变化,从中筛选出10个可能在炎症反应中具有重要影响的炎症相关基因。     

一株孔雀源大肠杆菌分离鉴定与致病特性初步研究

无菌采取病死孔雀肝脏,进行病原菌的分离、鉴定、生化试验、毒力基因检测、动物毒力试验。结果表明：致病菌为大肠杆菌,至少携带有papC、iucD、tsh、irp2、iss5种毒力基因,具有高致病性,并且该菌对小白鼠和鸡有较强的致死性。     

内毒素血症山羊内皮衍生因子（ET／NO）,脂质介质（TXA2／PGI2）的？…

以内毒素诱发山羊微循环障碍为模型，同步测定发病山羊血浆内皮素，一氧化氮（ＮＯ），血栓素（ＴＸＡ２），前列环素（ＰＧＩ２）的动态变化。结果表明，注射内毒素后３ｈ，６ｈ，１２ｈ，２４ｈ后山羊乐ＥＴ，ＮＯ，ＴＸＢ２，６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１∞的含量，与对照组及发病前比较均显著升高。     

冷温血停搏液心肌保护效应血清CK—MB,CTn—T的变化研究

为探讨血停搏液不同灌注对心肌保护效应，２８只低温体外循环犬，按停搏液灌注方式随机分为四组：Ａ组为冷晶组，Ｂ组为冷血组，Ｃ组为温血组，Ｄ组为冷温血组。     

犬低温体外循环手术及其灌注管理的试验研究

试验应用现代体外循环技术，实施完全心肺转流的低温体外循环，首次在我国兽医临床建立了２８只犬低温体外循环实验模型。探索适用于小动物心脏直视手术的体外循环手术操作、心脏停搏与复苏、体外循环灌注管理的技术方法。研究表明，选择右侧第４肋间进胸，从右心房施行前后腔静脉插管及升主动脉根部置供血管是简便易行的手术通路。采用部分晶体液与全血作预冲液，体外转流维持中度血液稀释（平均２３６８±３２７％），最低温度控制２６℃左右（平均２６１４±０７７℃），血流复温至３６℃左右（平均３５９７±０６８）开放升主动脉，转流中灌注压维持５０～９０ｍｍＨｇ（平均７２±１３ｍｍＨｇ），灌注流量８０～１００ｍＬ·ｋｇ－１·ｍｉｎ范围，是低温体外循环下开展犬心内直视手术成功的基本保障。采用冷晶与冷温血停搏液不同灌注。结果显示，冷温血停搏液联合灌注组心脏自动复跳率最高，并且复跳迅速，心搏有力，正性肌力药应用剂量小，复跳后辅助循环时间明显低于冷晶停搏液灌注组（Ｐ＜００５）。     

鸡β-防御素-2基因的克隆及原核表达载体的构建

鸡β-防御素是一类广谱抗菌阳离子小肽的总称,一般具有3个分子内二硫键。防御素对细菌、真菌乃至某些被膜病毒具有广谱杀伤作用。试验根据已发表的Gal-2基因序列,设计并合成了一对引物。以骨髓中的总RNA为模板,利用RT-PCR技术扩增目的片段并克隆到pGEM-TEasy载体上,经筛选鉴定获得阳性重组子pGEM-T-Gal-2。再经EcoRI、XbaI双酶切,插入pMAL-c2x质粒构建表达载体。利用PCR技术和酶切反应筛选转化子成功获得pMAL-c2x-Gal-2重组质粒。     

鸡肠道抗菌肽的提取及活性研究

取新鲜鸡肠黏膜超声波破碎,乙酸浸提,经Sephadex G-50层析后,收集具有抑菌活性的组分进行超滤离心,抑菌实验表明滤过物具有抑菌活性.滤过物经SDS-PAGE分析为一个条带,分子量约为6.078KD,得到电泳纯的鸡肠道抗微生物肽.该肽具有一定的耐热性,但经90℃以上热处理后活性下降较大;pH值对其活性影响较大,在pH6～8时活性最强.     

10株乳酸菌产酸性能的研究

研究表明乳酸杆菌(Lactic acid bacteria)可抑制肠道病原菌生长,具有整肠、降低血清胆固醇、增强机体免疫力、提高乳糖消化和抗肿瘤等作用[1,2]。乳酸菌还是乳制品、泡菜、发醇香肠等传统发酵食品的主要发酵剂,对传统发酵食品实行专业化、安全化生产有积极的推动作用[9]。同时,     

禽致病性大肠杆菌Hcp2b对雏鸡气管黏膜细胞因子-细胞因子受体相互作用通路的影响

T6SS （type VI secretion system）是革兰阴性菌中常见的一种分泌系统,其效应蛋白Hcp2b作用机制迄今仍未明晰。本研究以禽致病性大肠杆菌（avian pathogenic Escherichia coli,APEC） Hcp2b蛋白为研究主体,旨在探究Hcp2b蛋白在APEC感染鸡气管黏膜过程中发挥的作用及机制。采用Red重组方法以质粒pKD3为模板构建hcp2b缺失株,pSTV-28质粒连接hcp2b目的片段构建重组载体,导入感受态Δhcp2b菌株构建回复株,并对Δhcp2b菌株的生长曲线进行测定。7日龄雏鸡气管感染hcp2b缺失株及野生株,感染后12、24 h收集鸡气管黏膜细胞进行转录组学测序及生物信息学分析。结果表明,hcp2b缺失株及回复株构建成功,hcp2b基因缺失对菌株的生长性能无影响。hcp2b基因缺失株感染气管黏膜后,mRNA的表达谱发生变化,感染后12 h,有144个基因表达量发生变化（上调差异基因87个,下调57个）;感染后24 h,有135个基因表达量发生变化（上调差异基因79个,下调56个）。生物信息学分析发现差异基因富集在Cytokine-cytokine receptor interaction、Protein processing in endoplasmic reticulum等信号通路。hcp2b基因缺失未影响APEC的生长特性,hcp2b基因缺失后影响雏鸡气管黏膜Cytokine-cytokine receptor interaction通路基因mRNA转录水平的变化,IL-1β、IL-12b的表达均上调。该结果为APEC的致病机制研究提供了理论依据。