四川省猪繁殖与呼吸综合征病毒分子流行病学调查

为了解2012-2013年四川省猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株的遗传变异背景和分子流行病学情况,对PRRSV阳性病料中的Nsp2、ORF5基因进行RT-PCR扩增和序列测定,所获得的序列分别与美洲型代表株(VR2332)、欧洲型代表株(LV)、标准毒株和变异毒株进行相似性分析。结果本研究成功获得8条Nsp2基因序列和17条ORF5基因序列,序列分析表明所有PRRSV流行毒株均属于美洲型,其中8株Nsp2基因序列与标准毒株和变异毒株的核苷酸相似性分别为75.2%~88.6%和94.8%~97.1%,推导的氨基酸相似性分别为58.7%~79.2%和92.8%~94.8%;17株ORF5基因序列与标准毒株和变异毒株的核苷酸相似性分别为90.1%~96.6%和95.6%~99.4%,推导的氨基酸相似性为77.2%~93.0%和88.0%~96.8%;与标准毒株相比,8株Nsp2基因有30个不连续氨基酸缺失,17株ORF5基因序列有点突变。从遗传进化分析看,所有流行毒株均属于PRRSV亚群Ⅲ。     

一例猪瘟、高致病性猪蓝耳病、猪伪狂犬病混合感染的实验室诊断

对南充市某猪场的一起疫情进行确诊,采集病死仔猪的病料进行实验室检查。PCR结果显示猪瘟病毒、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪伪狂犬病毒均为阳性。试验结果表明,该猪场疫情是由CSFV、PRRSV和PRV混合感染所致。     

重组猪α干扰素在仔猪腹泻疾病防控中的应用

为研究重组猪α干扰素(IFN-α)对仔猪腹泻疾病的防控效果,分别在2个猪场对腹泻仔猪进行重组猪IFN-α治疗试验。试验猪场1为猪伪狂犬病野毒感染场,仔猪1日龄腹泻发病率约60%,4日龄腹泻发病率约30%;试验1组,仔猪1日龄滴鼻接种猪伪狂犬病疫苗SA215株,4日龄仔猪腹泻发病率降低至11.8%,比对照组低18.3个百分点;试验2组,仔猪1日龄滴鼻接种猪伪狂犬病疫苗SA215株,母猪与仔猪连续3 d肌肉注射重组猪IFN-α,4日龄仔猪腹泻率降低至2.2%,比对照组低27.9个百分点;试验3组,母猪与仔猪连续3 d肌肉注射重组猪IFN-α,4日龄仔猪腹泻率为6.3%,比对照组低23.8个百分点。试验猪场2,仔猪1日龄腹泻发病率50%左右,4日龄仔猪腹泻率为28.7%;重组猪IFN-α治疗试验组,4日龄仔猪腹泻率降低至9.6%,比对照组低19.1个百分点。母猪与仔猪连续3 d肌肉注射重组猪IFN-α,能够有效降低仔猪腹泻发病率。     

青川举办第二届“七佛贡茶杯”评比活动

4月22日，四川省青川第二届“七佛贡茶杯”评比活动开幕。活动分茶叶评审、采茶比赛、产品展示、茶艺表演四个主要内容。全县25家企业选送29只茶样参加评审，16个乡镇的30个采茶能手参赛。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒流行病学研究进展

<正>猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)又称为"猪蓝耳病",是猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染而引起的一种病毒性传染病,以仔猪的呼吸道疾病和母猪生殖障碍为主要特征。该病发生以来,给世界各地区养猪业造成了不可估量的经济损失,蓝耳病已经成为集约化养猪的主要疫病之一。就目前PRRSV基因的多样性及我国现阶段主要流行的PRRSV基因变异情况作一个概述。1 PRRSV的发现猪繁殖与呼吸道综合征是猪的一种破坏性疾病,感染后可出现发热、呼吸系统和生殖功能的衰竭、母猪流产、公猪生精功能下降等症状并具有高度传染性。20世纪80年代,美国率先报道了一种新型猪群传染病。其临床表现为母猪严重繁殖障碍,断奶仔猪发生肺炎,生长迟缓,新生仔猪死亡率明显增加。当时该病的病因不明,人们通常称其为猪的"神秘病"。1990年11月,在欧洲的德国暴发了一种传播迅速的疾病,该病与MSD临床症状十分     

不同剂量的猪瘟活疫苗单次免疫效果评价及疫苗存留试验

用1 200 RID、6 000 RID和24 000 RID 3种不同剂量的猪瘟活疫苗单次免疫9头30日龄的断奶仔猪,检测试验猪的抗体消长和疫苗毒核酸在猪体内的存留时间,并用6头猪进行攻毒保护试验.结果表明:不同免疫剂量的试验猪其抗体水平的动态变化没有显著差异,免疫后21 d试验猪的猪瘟抗体均成阳性,63 d后至578 d猪瘟抗体阻断率仍然高于85％,应用荧光定量RT-PCR技术检测,猪瘟疫苗毒核酸在猪血液和扁桃体中的检出时间分别达28 d和42 d;免疫后370 d进行猪瘟强毒攻击后,免疫猪没有出现明显的临床症状,存活且不带毒.本研究证实,没有其他疫病和母源抗体的仔猪单次接种合理剂量的猪瘟活疫苗就能产生坚强的保护力,提出加强种猪场各种病原监测,淘汰病原阳性种猪,净化种猪群对提高猪瘟疫苗免疫效果,最终控制猪瘟具有重要意义.     

应用CSFV-E2基因噬菌体肽库筛选猪瘟病毒抗原表位

采用猪瘟单抗对猪瘟病毒石门株E2基因噬菌体随机肽库(SM-E2库)进行淘洗以研究猪瘟病毒E2抗原表位.运用猪瘟单克隆抗体WH303、WH211和M56对SM-E2库进行4轮生物淘洗,对阳性克隆再经噬菌体原位杂交、特异PCR测序分析,然后人工合成阳性多肽进行ELISA反应.经鉴定分析发现单抗WH303从SM-E2库中筛选得到一段CSFV特异的抗原多肽IECTAVSPTTLRTEVVKT,并且该段多肽与已知CSFV表位TAVSPTTLR极为相似;单抗WH211和M56未能筛选到包含CSFV序列的克隆.结果表明,利用靶基因噬菌体随机多肽库筛选抗原表位能够得到更接近于真实表位的抗原表位.     

急性感染猪瘟病毒猪体外排毒规律的观察

为研究CSFV感染后在体外的传播途径、排毒规律,针对CSFV基因组设计了一对引物和一条探针,建立了一套CSFV荧光定量PCR(FQ-PCR)检测方法,并以质粒为标准品得到扩增标准曲线.对18个CSFV阳性质控样本检测全阳性,6个CSFV阴性质控样本检测全阴性,显示良好敏感性和特异性.应用此方法对石门株感染的16头60日龄长白猪和1头阴性对照猪的粪便、尿液、眼分泌物和唾液中病毒含量进行了动态测定,结果表明从感染后第1天到频死前第8天,粪便中均能检测出病毒;尿液和眼分泌物至少能从第3天,唾液从第4天开始检测出病毒,且病毒含量呈增加趋势.本研究对急性感染猪瘟病毒猪体外排毒规律进行了系统研究,为弄清CSFV感染病程、致病机理及临床诊断奠定了重要理论基础.     

四川规模化猪场腹泻仔猪病毒性腹泻病原的分子检测

为了解四川地区仔猪腹泻中病毒性病原的感染情况,应用RT-PCR方法对来自四川不同地区的20个猪场的仔猪腹泻病料进行了9种病毒性病原的检测。结果显示阳性率最高的为PRoV,其次为PKBV、PEDV、PBoV、PToV、MRV、AV、TGEV、PSaVPNoV;检测的这20份样品中均存在混合感染的情况。     

猪轮状病毒四川株的分离鉴定及增殖规律

为了解猪轮状病毒（PoRV）在MARC-145细胞系上的培养特性及增殖规律,本试验利用MARC-145细胞,从四川仔猪腹泻样品中分离到1株PoRV,并通过PCR检测、病毒理化实验与微量中和实验证实,命名为SC-R株。用含不同浓度胰酶营养液培养SC-R株48h后,分别收集病毒液进行定量分析;同时,以SC-R分离株感染MARC-145细胞,在感染后不同时间分别收集感染病毒液,利用PoRV荧光定量检测方法对不同样品中病毒RNA进行定量分析,绘制PoRV生长曲线。结果表明,用含3％胰酶营养液培养的细胞液中PoRV的RNA含量明显高于其他组;-步生长曲线显示细胞外病毒RNA含量呈“s型”曲线增长,感染后0～8h为潜伏期,病毒RNA含量维持在较低水平;8～36h为突破期,病毒RNA含量呈对数增长;感染48h增长速度减缓,维持在较高水平,逐步进入稳定期。胰酶可增加PoRV对细胞的感染性,3％是本试验最为适用的胰酶浓度;PoRV感染MARC-145后在细胞内增殖并逐步释到细胞外。