大熊猫轮状病毒可视化LAMP检测技术的建立及应用

根据大熊猫轮状病毒CH–1株VP4基因设计3对引物,建立大熊猫轮状病毒可视化环介导等温扩增(LAMP)检测技术,对其反应条件进行优化及特异性和灵敏度进行验证。结果表明：用可视化LAMP方法检测大熊猫轮状病毒时,在62 ℃条件下,反应体系中加入终浓度为8 mmol/L Mg2+、0.6 mol/L甜菜碱、12 U Bst DNA聚合酶和1×LAMP可见光染料,扩增40 min后,阳性样本颜色由紫色变为蓝色,电泳分析扩增产物可观察到明显的梯状条带;用建立的LAMP方法对大熊猫轮状病毒进行扩增,特异性好;其批内及批间的变异系数均小于1%,重复性好;其最低检测限为5×10–5 ng/μL RNA,灵敏度比常规PCR高约100倍;采用该方法检测50份大熊猫粪便样的轮状病毒,共检测到阳性样本22份,比常规PCR方法检测到的阳性样本多5份,与荧光定量PCR方法的吻合度为100%。可见,用LAMP方法检测大熊猫轮状病毒具有操作简便、反应时间短、特异性强、结果判定快速等特点,可用于临床上大熊猫轮状病毒的快速检测。     

淮北地区黄犊牛腹泻症的研究

对采自安徽、河南两省淮北地区的黄犊牛腹泻粪样进行电镜观察,轮状病毒检出率48.33%;用RIHA检测粪样,阳性率37.1%;PAGE法检查,出现典型轮状病毒核酸电泳图谱,检出率62.5%;用RIHI检测母牛血清中轮状病毒抗体,阳性率86.7%。用牛轮状病毒细胞适应毒进行人工复制疾病试验,获得成功。据此,该病鉴定为轮状病毒病。用牛丙种球蛋白和牛血干扰素试验性治疗,治愈率分别为95.27%和91.89%,疗程均在2天以内。本文还比较了该病病原检测方法,认为RIHA法快速、灵敏、特异、简便。     

检测牛轮状病毒抗体间接ELISA方法的建立与应用

以田间分离的轮状病毒CHLY(G6型)作为抗原,建立了犊牛轮状病毒(BRV)抗体检测与监测的间接ELISA方法.田间监测牛轮状病毒感染率为32.91%(26/79),疫苗源性抗体高峰出现在二次免疫后第40天至第60天,抗体持续期为3个月.该方法可用于粪便、血清样品的检测,具有特异性强、快速简便等优点,适合于对轮状病毒特异性抗体的动态监测和批量检测.     

猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒混合感染的PCR检测

笔者实验分别建立了用于检测猪传染性胃肠炎病毒及猪轮状病毒的RT-PCR方法,通过该方法对52份疑似病料进行了检测,以调查猪群中猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒混合感染情况。实验结果表明,17份样品表现为猪传染性胃肠炎病毒与猪轮状病毒混合感染,占样品总数的28.8%。     

仔猪轮状病毒感染的流行病学调查

据丁再棣等1983年秋及1984年春,在江苏省沿江南北地区57个猪场,对205窝仔猪白痢病病原进行初步调查结果,认为轮状病毒是仔猪白痢的重要病原之一。为了进一步证实轮状病毒感染仔猪引起白痢的普遍性和正确性,1985年春,在浙江等四省市部分种猪场采集了仔猪白痢粪样及健康仔猪粪样,检测轮状病毒感染情况。同时在江苏选择轮状病毒感染严重的猪场,采集产前健康母猪粪便检测轮状病毒,以探索轮状病毒的传播状态及健康猪有无带毒等问题。     

仔猪轮状病毒感染与乳糖不耐受症的临床检测

[目的]探讨轮状病毒感染与乳糖不耐受症的临床相关性,为建立适用于规模化养猪场的仔猪轮状病毒感染检测方法提供理论依据.[方法]随机选择腹泻仔猪和健康仔猪各63头,采用醋酸铅—氢氧化铵法和pH试纸法分别检测仔猪粪便的乳糖和pH值,粪便乳糖大于或等于++且pH≤5.5为继发性乳糖不耐受症;然后运用猪轮状病毒诊断试剂检测乳糖不耐受病例的猪轮状病毒感染情况.[结果]与健康仔猪相比,腹泻仔猪粪便乳糖大于或等于++为36例,其中pH≤5.5有23例,即发生乳糖不耐受症的病例23例,占总腹泻仔猪数的36.51%.对23例乳糖不耐受病例进行轮状病毒感染检测,结果发现仔猪继发性乳糖不耐受症与猪感染轮状病毒所引起腹泻的吻合率高达100%.[结论]由猪轮状病毒所引起的仔猪腹泻,多会发生继发性乳糖不耐受症,采用醋酸铅—氢氧化铵法能及时鉴别诊断猪轮状病毒感染,且具有廉价、方便、快捷等优势,适合在基层猪场大规模使用.     

聚丙烯酰胺凝胶电泳法用于仔猪腹泻病粪便中轮状病毒的检测

用聚丙烯酰胺凝胶电泳法,检测了仔猪腹泻病粪样中的轮状病毒,结果证明轮状病毒是引起仔猪腹泻的一种主要病原。     

猪圆环病毒2型与猪轮状病毒混合感染的防控

云南省某养殖场饲养母猪260多头,所产仔猪近期有20%左右发病,发病时间已达2个多月,部分仔猪出生第2天发病,主要症状表现为腹泻,拉黄色粪便,同养殖场肥猪、保育猪均表现正常。为诊断仔猪患病情况,为综合防控提供支持,对该场送检的3头病仔猪进行病理剖检,采集组织用PCR技术进行病原检测。检测结果为1号猪猪圆环病毒2型抗原检测呈阳性,3头仔猪猪轮状病毒抗原检测呈阳性,说明该生猪养殖场发生了猪圆环病毒2型与猪轮状病毒的混合感染。通过对该养殖场母猪、仔猪进行免疫接种,发病仔猪隔离治疗、加强养殖场饲养管理等措施,最终控制了猪圆环病毒2型与猪轮状病毒混合感染的疫情。     

表达猪轮状病毒VP4基因重组乳酸球菌表达载体构建及免疫原性分析

 【目的】构建猪轮状病毒主要保护性抗原VP4基因的重组乳酸乳球菌口服疫苗,为猪轮状病毒的防治提供有效方法。【方法】将猪轮状病毒免疫保护性抗原基因VP4主要结构功能区定向插入乳酸菌表面表达载体pNZ8112,电转化乳酸乳球菌NZ9000,构建了pNZ8112/NZ9000乳酸乳球菌表面表达系统。通过SDS-PAGE、Western-blot和免疫荧光方法鉴定,以此活菌系统口服免疫6～8周龄Balb/c小鼠,测定了免疫动物的局部体液免疫和系统免疫应答。【结果】证明插入的外源基因在菌体表面得到了正确表达,表达猪轮状病毒免疫保护性抗原的重组乳酸乳球菌免疫动物后,分别在粪便、泪液和阴道洗液中检测到了特异性分泌型IgA抗体和在血液中检测到了IgG抗体的存在;体外细胞中和试验结果表明,血清抗体对猪轮状病毒的中和效价为1﹕40。【结论】表达猪轮状病毒免疫保护性抗原的重组乳酸乳球菌口服免疫动物能够产生良好的局部和系统体液免疫应答而且具有免疫中和效力。     

反向遗传技术在牛轮状病毒研究中的应用

本文综述了牛轮状病毒的生物学特性、反向遗传学系统的建立及其研究进展,并对反向遗传技术应用于牛轮状病毒进行展望。     

百合病毒检测技术研究进展

笔者对百合病毒的检测技术作了综合评述,主要有植株直接观测法、指示植物接种鉴定法、电镜技术、血清学检测和分子生物学检测技术等,综合应用各项技术使检测更加灵敏、可靠。目前,常用的检测以血清学技术的ELISA为主、分子生物学技术的RT PCR为主。基因芯片检测技术是近几年发展起来高效的检测手段并在植物病毒检测上有广泛的应用前景。     

埋地钢质管道外覆盖层组合检测技术

介绍了国内外各种埋地钢质管道外覆盖层组合检测技术,认为随着检测技术的不断发展和检测仪器的不断涌现,研究比对各种检测技术与仪器,探索工程实践中高效准确的组合检测技术变得十分重要.从实际检测工作所面临的技术难题出发,分析了目前国内外常用的埋地钢质管道外覆盖层检测方法的优缺点及适应性,通过比对试验研究,提出了埋地管道应将检测技术组合方法应用于检测实践,以促进管道防腐工作的开展.     

基于体细胞数的奶牛乳腺炎检测方法研究进展

奶牛乳腺炎的检测方法有很多,其中检测精度较高、实际应用较多的是直接或间接检测牛奶中体细胞含量的方法。介绍了检测奶牛乳腺炎的常用方法,并对基于体细胞数的检测方法和技术进行了综述,指出了这些方法存在的问题和不足,最后展望了基于体细胞数的检测方法和技术的发展趋势及应用前景。     

梨病毒病及无病毒化栽培概述

概述了中国梨的几种重要病毒病:梨环纹花叶病毒病(PRPMV)、梨脉黄病毒病(PVYV)、榅桲矮化病毒病(QSV)、苹果茎沟病毒病(ASGV)、梨石痘病毒病(PSPV)及其危害性,较全面地介绍了目前梨病毒病的几种检测方法。现在研究认为,以PCR技术和核酸分子杂交技术为基础的分子生物学方法结合较成熟的ELISA检测以及电镜观察能比较准确、快速地检测出中国梨的病毒病;热处理、茎尖培养、微体嫁接、化学制剂处理及其联合应用为梨病毒的脱毒提供了有效途径;并根据梨无毒苗的生长特点提出了梨无病毒化栽培的管理技术。     

Mycotoxin detection——Recent trends at global level

Mycotoxin contamination in agro-food systems has been a serious concern globally during the last few decades. Mycotoxins are toxic secondary metabolites produced by fungi when they grow in agro-food products and feedstuff. Several detection techniques have been developed in recent years to detect mycotoxins in the food and feed effectively. HPLC based techniques are very common in usage in the laboratories for the testing of mycotoxins. In recent years,immuno-based assays is widely used and have been reported at large due to its sensitivity and limited detection time. Immuno assay-based kits were developed effectively to be used in the fields and in storage systems to detect the mycotoxin levels. Microarray-based immunoassays developed in the recent years could simultaneously detect aflatoxin,ochratoxin,and zearalenone with the higher sensitivity. Aptamer-based assays could target the detection of ochratoxin and aflatoxins and fumonisins at high specificity in food products. In recent years,several assays reported for the simultaneous multiple detection of different mycotoxin was based on HPLC and LC-MS/MS. There is a need for the use of these advanced technologies in the commercial scale.     

菌根真菌定殖检测技术比较与分析

使用菌根真菌定殖植物这一研究方法,已被大量研究者成功运用在各类植物中,并且得到了使植物促生、抗逆性与抗病害性提高以及改善根际土壤环境等良性结果。因此监测菌根真菌在植物根部的定殖与否和定殖程度,即对其定殖检测技术的掌握具有重要意义。本文根据不同利用方法归类介绍了7种检测技术,同时对比了各自的优点以及详细检测过程,旨在为选择效果优良的检测技术,提高菌根真菌定殖的检测效率提供参考。     

食品中霉菌毒素检测技术研究新进展

介绍了生物芯片、生物传感器、胶体金技术、EILSA和免疫荧光法在霉菌毒素检测中的研究进展,提出要加强霉菌毒素的检测技术,需不断引入新技术和新方法。     

消毒技术在非洲猪瘟防控中的应用现状与问题

非洲猪瘟（ASF）是由非洲猪瘟病毒（ASFV）感染家猪和野猪引起的一种急性出血性烈性传染病。世界动物卫生组织（OIE）将其列为法定必须上报的动物疫病。由于目前还没有针对非洲猪瘟的有效疫苗，我国主要采取检疫、扑杀以及严格的生物安全措施进行防控。消毒是生物安全防控ASF的重要手段。目前针对ASFV的灭活方式多种多样，但其灭活效果还有待进一步检验。当前的ASF分子病原学诊断技术无法确定样品的感染性，因此不能用于准确评价消毒剂对病原的杀灭效果。对ASFV的消毒技术及其作用机理、杀灭效果、优缺点、注意事项等进行了总结，并对当前消毒技术存在的问题以及检测技术的局限性进行了分析，在此基础上对ASFV的消毒剂评价技术进行了探讨，旨在为我国ASF检测技术的创新与完善以及现地防控提供参考。