反向遗传技术在牛轮状病毒研究中的应用

本文综述了牛轮状病毒的生物学特性、反向遗传学系统的建立及其研究进展,并对反向遗传技术应用于牛轮状病毒进行展望。     

转座子在动物转基因研究中的应用

转座子是生物界中存在的一类可移动的遗传因子,它们在转基因和基因组进化中扮演了一个极其重要的角色.转座子技术已成为制备转基因动物的重要手段.论文综述了转座子及其在动物转基因领域的相关应用,并对转座子技术进行了展望.     

转基因动物制作技术及其基因载体研究进展

论文概述了家畜转基因动物的制作方法,初步分析了用于转基因技术的基因载体种类,深入探讨了不同载体的优缺点,并展望了基因载体的发展趋势.     

金黄色葡萄球菌聚集因子A(Clfa A)功能区基因的克隆及真核表达质粒构建

粘附素蛋白是金黄色葡萄球菌感染早期最重要的致病因子,研究根据金黄色葡萄球菌聚集因子A(clfa A)基因, 设计合成特异性引物,以国内奶牛乳腺炎临床分离株金黄色葡萄球菌基因组为PCR模板,进行clfa A基因的克隆,并连接入pMD18-T载体进行测序和序列分析,然后经BamHⅠ和XbaⅠ双酶切后构建真核表达载体并进行鉴定.结果表明,以金黄色葡萄球菌标准株为对照,国内分离株多数在990 bp处扩增到特异性条带,经测序鉴定,与Genebank发表的金黄色葡萄球菌clfa A序列同源性为99%;构建的真核表达质粒通过PCR和双酶切鉴定证明构建成功,为研究核酸疫苗奠定基础.     

牛轮状病毒VP4基因与LTB基因的融合表达及免疫原性研究

PCR扩增轮状病毒VP4基因和大肠杆菌LTB基因编码区,将其克隆至pET32a载体上,构建pET32a-VP4-LTB质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),PCR、酶切鉴定后进一步测序,测序结果表明融合基因片段由2637 bp组成,为编码879个氨基酸残基的多肽。经IPTG诱导和SDS-PAGE检测发现表达产物分子量约为118.9 KD,以包涵体的形式存在。融合蛋白经镍离子螯合次氨基三乙酸(Ni-NTA)亲和层析纯化后免疫小鼠,结果所产生的抗体效价高于单独VP4蛋白的免疫结果但差异不显著(P0.5),但与对照组相比差异显著。表明所表达的融合蛋白具有较好的免疫原性,为研制牛轮状病毒亚单位疫苗奠定了基础。     

牛源金黄色葡萄球菌突变株的筛选、鉴定及其免疫原性的研究

 【目的】诱变牛源金黄色葡萄球菌山东分离株(zfb),筛选、鉴定弱毒性突变株,并研究其在鼠上的免疫交叉保护性。【方法】牛源金黄色葡萄球菌山东分离株zfb,经N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)化学诱变,经生长特性、回复突变、毒力检测、LD50、多种特征性酶检测、小鼠中免疫保护性等实验比较研究了突变株与亲本株的生物学特性,筛选得到遗传性状稳定β－溶血素缺失的弱毒性突变株。【结果】弱毒性突变株Hx与亲本株相比：其β－溶血性状完全缺失,生长缓慢,耐热核酸酶、血浆凝固酶等胞外蛋白的产量减少,在活体条件下可产生荚膜,半数致死量(LD50)10－1.83•mL-1远低下于亲本株的10－4.33•mL-1。亲本株保护检测,免疫接种过的鼠的半数致死量是未接种过的6—50倍。非亲本株保护检测,免疫接种过的鼠的半数致死率是未接种过的5—60倍。【结论】突变株Hx的β－溶血素缺失,毒性减弱,对金黄色葡萄球菌攻击具有较高免疫保护性。     

我国牛轮状病毒的分离鉴定和疫苗研究进展

约50%的犊牛腹泻是由牛轮状病毒(Bovine Rotavirus, BRV)引起的,它制约着我国养牛业的发展.论文综述了牛轮状病毒毒株的分离、鉴定方法及疫苗研制的现状,并对BRV新型疫苗的发展趋势进行了展望.     

金黄色葡萄球菌聚集因子A（C1fa A）功能区基因的克隆及真核表达质粒构建

粘附素蛋白是金黄色葡萄球菌感染早期最重要的致病因子，研究根据金黄色葡萄球菌聚集因子A（c1fa A）基因，设计合成特异性引物，以国内奶牛乳腺炎临床分离株金黄色葡萄球菌基因组为PCR模板，进行c1fa A基因的克隆，并连接入pMD18-T载体进行测序和序列分析，然后经BamH I和Xba I双酶切后构建真核表达载体并进行鉴定。结果表明，以金黄色葡萄球菌标准株为对照，国内分离株多数在990bp处扩增到特异性条带，经测序鉴定，与Genebank发表的金黄色葡萄球菌c1fa A序列同源性为99％；构建的真核表达质粒通过PCR和双酶切鉴定证明构建成功，为研究核酸疫苗奠定基础。     

小RNA病毒与细胞凋亡

在小RNA病毒科中,口蹄疫病毒等不同病毒的不同基因可诱导宿主细胞发生凋亡,其作用机制也不完全相同。论文对小RNA病毒诱导细胞凋亡的机制进行了综述,并对相关研究进行了展望。     

动物转基因研究进展

动物转基因技术是一项新的生物学技术,可应用于畜牧业及生物医学等领域。对转基因动物的制作方法及应用进行了综述,对其发展趋势进行展望,以促进动物转基因研究的开展。