猪2型圆环病毒福建株的分离与鉴定

根据猪圆环病毒GenBank中登录的猪圆环病毒2型(PCV2)特征,设计引物对福建省某地疑似PCV2感染病例进行检测。对阳性病料进行猪圆环病毒分离鉴定,得到一株PCV2,命名为FJ11株。     

猪圆环病毒病的血清学及病原学检测

为贵州猪圆环病毒病的防治提供参考依据,对贵州省花溪区、息烽县和织金县3个地方3个猪场疑似猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)感染发病猪进行临床初步诊断,并分别采集6份血清及组织病料,采用ELISA和PCR技术对18份样品进行PCV2的血清学和病原学检测。结果表明:花溪、息烽、织金3个区(县)的PCV2阳性率分别为33.3%、83.3%和66.7%,3个猪场均出现了PCV2病毒感染,猪圆环病毒贵州流行毒株与Shanghai-06株的亲缘关系最近。     

猪圆环病毒2型陕西杨凌株的分离鉴定及全基因组分析

[目的]分离得到猪圆环病毒2型(PCV-2)陕西杨凌株,测定病毒滴度(TCID50),并进行全基因组序列比对,为研制针对性更强的PCV-2疫苗提供理论依据.[方法]从经PCR检测为猪圆环病毒2型阳性的病料中、分离病毒并接种PK-15细胞,通过PCR检测、间接免疫荧光试验及电镜观察,对分离病毒进行鉴定;用免疫过氧化物酶细...     

桂枝复方水煎液和大黄复方水煎液体外对猪圆环病毒2型抗病毒效果初探

[目的]通过对某猪场采集的组织样本进行猪圆环病毒2型分离鉴定及培养,探讨桂枝复方水煎液和大黄复方水煎液体外对猪圆环病毒2型抗病毒效果.[方法]将从某猪场采集的疑似猪圆环病毒2型阳性病料经无菌处理后接种于猪肾细胞进行病毒的分离培养,PCR方法鉴定,细胞体外培养分离株病毒并分析其生长特性,然后通过桂枝复方水煎液和大黄复方水煎液处理病毒侵染的细胞,荧光定量PCR方法测定细胞内病毒载量.[结果]分离培养出猪圆环病毒2型分离株BY-F6代与GenBank中已收录的猪圆环病毒2型ORF2序列同源性可达到99.47％～99.60％;该病毒可在猪肾细胞中进行体外培养,48 h为病毒的复制高峰期,TCID50为10-4,3/0.1mL.6.25 mg/mL的桂枝复方水煎液体外对猪圆环病毒2型具有显著的预防作用(P＜0.05)及极显著的治疗作用(P＜0.01),3.13 mg/mL的桂枝复方水煎液可显著降低细胞内猪圆环病毒2型的复制(P＜0.05),桂枝复方水煎液不具有体外直接杀灭猪圆环病毒2型的能力.5.00 mg/mL的大黄复方水煎液体外对猪圆环病毒2型具有显著的预防作用(P＜0.05)及极显著的杀灭作用(P＜0.01),2.50 mg/mL的大黄复方水煎液可直接参与杀灭猪圆环病毒2型,显著降低细胞内该病毒的载量(P＜0.05),大黄复方水煎液体外对猪圆环病毒2型感染后的治疗作用不佳.[结论]桂枝复方水煎液和大黄复方水煎液体外对从某猪场分离及鉴定的猪圆环病毒2型具有一定的抑制作用.     

Ⅱ型圆环病毒山东泰安株的分离鉴定及系统进化分析

采用双抗体夹心ELISA方法和PCR技术对来自山东泰安的病猪组织病料进行猪Ⅱ型圆环病毒(PCV2)检测。将检测为阳性的病料悬液接种无PCV1污染的PK-15细胞进行病毒分离,获得一株PCV2,命名为猪Ⅱ型圆环病毒山东泰安株(PCV2 sdt)。间接免疫荧光试验(IFA)检测可见接种病毒细胞中散在特异性荧光。提取全基因组为模板,进行病毒基因组1号开放阅读框(ORF1)、2号开放阅读框(ORF2)和全基因组序列扩增,得到长度分别约为999bp、749bp和1767bp左右的产物条带。将产物克隆到pMD18-T载体上,构建重组质粒pMD18-T-ORF1、pMD18-T-ORF2和pMD18-T-PCV2。测序结果显示,所分离病毒的ORF1、ORF2和全基因组序列长度分别为945bp、702bp和1767bp。DNAStar生物学软件分析发现,PCV2分离毒株与参考株的全基因组同源性介于95.4%~98.8%之间,ORF1的同源性介于97.0%~98.8%,ORF2的同源性略低,介于91.9%~98.4%之间。     

河南省副猪嗜血杆菌分离鉴定与药敏试验

为发病猪场合理用药控制和治疗副猪嗜血杆菌病,从河南省7家猪场12份疑似副猪嗜血杆菌病病料中分离到2株革兰氏阴性细小杆菌,进行了细菌培养特性试验和培养菌PCR鉴定.结果表明:分离的菌株为副猪嗜血杆菌,2株分离菌对土霉素、氟本尼考、苯唑西林钠、头孢噻呋、诺氟沙星、阿米卡星和硫酸链霉素等敏感,对氨苄青霉素、磺胺嘧啶、硫酸卡那霉素具有耐药性.     

PRRSV、PCV-2临床感染猪外周血中ACTH含量的变化

采集61头有呼吸道疾病症状猪的病料,采用分子生物学方法进行猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、PRRSV变异株、猪圆环病毒2型(PCV-2)的检测,并采集血液分离血清,用放射性免疫法检测其外周血中促肾上腺皮质激素(ACTH)的含量.结果表明:PCV-2核酸阳性率为72.13%,PRRSV为39.34%,PRRSV变异株为22.95%;临床存在混合感染,特别是PRRSV与PCV-2的混合感染,感染率达16.39%;PRRSV、PRRSV变异株和PCV-2的感染均比对照组极显著地提高ACTH的含量,其中以PRRSV变异株与PRRSV的混合感染对ACTH的影响最大,ACTH含量达32.20 pg.mL-1.可见,PRRSV、PCV-2的感染促进了ACTH的分泌,增加猪的应激反应,从而降低病猪的免疫功能.     

猪圆环病毒2型陕西杨凌株的分离鉴定及全基因组分析

【目的】 分离得到猪圆环病毒2型（PCV-2）陕西杨凌株,测定病毒滴度(TCID₅₀),并进行全基因组序列比对,为研制针对性更强的PCV-2疫苗提供理论依据。【方法】 从经PCR检测为猪圆环病毒2型阳性的病料中,分离病毒并接种PK-15细胞,通过PCR检测、间接免疫荧光试验及电镜观察,对分离病毒进行鉴定;用免疫过氧化物酶细胞单层试验（IPMA）,测定分离毒株的TCID₅₀,并对其全基因组序列进行测定与分析。【结果】 分离得到1株猪圆环病毒2型毒株,分离株在PK15细胞上的TCID₅₀为10^-4.75。全基因组序列同源性比对发现,分离株与一加拿大分离株（DQ200735）同源性最高（99.4%）。【结论】 从陕西杨凌分离得到了1个猪圆环病毒2型分离株。     

广西某市猪病毒病的检测与调查

对广西某市以发热、咳嗽、呼吸困难、皮肤及耳朵发绀和高发病率及高病死率等为主要临床特征的39个发病猪场所采集的53份病料进行了主要病毒病的检测。检测结果显示,猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)阳性30份,阳性率56.60%(30/53);猪2型圆环病毒(PCV2)阳性25份,阳性率47.17%(25/53);猪流感病毒(SIV)阳性21份,阳性率39.62%(21/53);猪瘟病毒(CSFV)未检出阳性;其中可检出两种以上病原的有29份病料,占54.72%(26/53)。检测结果与调查分析表明,猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)、猪2型圆环病毒(PCV-2)和猪流感(SI)是导致该市猪场疾病发生流行的主要病种,而且PRRS、PCV2和SIV常呈多重感染,这为该市发病猪场针对性地做好疫病的防控提供了科学依据。     

猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)分离培养与鉴定

猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)病毒在国内外广泛流行,该病毒能降低猪体免疫力,引起其他病原微生物的继发或并发感染。猪圆环病毒病给世界养猪业造成巨大的经济损失,严重影响养猪业发展。为提高猪圆环病的防治率,本实验采用从病料中分离猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2),并接种于PK-15细胞,经过3次传代培养,至进一步纯化病毒株,为后续研究奠定基础。     

猪场蚊子中乙型脑炎病毒的RT-PCR检测

收集湖北省与安徽省部分猪场的蚊子样本,用RT-PCR检测蚊子样本是否携带有乙型脑炎病毒,并对猪群乙型脑炎病毒抗体进行了检测.结果表明,53份蚊子样品中乙型脑炎病毒阳性样品为44份,表明这些猪场的蚊子广泛携带有乙型脑炎病毒.从阳性PCR产物中随机选出8个,并将其克隆到pEASY-T1载体中,得到5个阳性重组质粒,进行序列测定和进化树分析,结果表明阳性蚊子样本携带的都是基因Ⅲ型乙型脑炎病毒.猪场的1 401份血清样品的乙型脑炎病毒抗体阳性率为57.7％,说明这些猪场猪群的乙型脑炎病毒感染率较高.     

大中型猪场沼气工程的环境影响评价——以湖北省武穴市吴文村猪场为例

以湖北省武穴市吴文村猪场为例,对大中型猪场沼气工程进行了案例分析和环境影响评价,表明这一工程是治理污染、生产可再生能源的有效途径,具有良好的经济效益和环境效益。     

应用K88-K99 PCR试剂盒检测大肠杆菌研究

用研制的K88一K99 PCR诊断试剂盒对湖北省和江苏省的5个猪场238个病猪粪便进行了检测。扩增结果是K88检出率92．0％(219／238)；K99检出率89．1％(212／238)；阳性对照检出率100％，阴性对照未扩增到目的DNA片段。结果表明，运用PCR试剂盒检测具有快速、特异的优点，可同时处理大量样品，且可直接对粪便样品进行检测，值得进一步推广。     

鄂西北地区猪蓝耳病毒抗体水平监测

[目的]了解鄂西北地区猪群高致病性蓝耳病毒免疫水平情况。[方法]于2007年4~12月对鄂西北地区(襄樊、荆门、随州和十堰地区)76家标准化猪场接种过高致病蓝耳疫苗的猪群随机采集572份血样,应用ELISA方法对该地区的猪群致病性蓝耳血清抗体水平进行监测调查。[结果]调查结果表明,在受检的572份血清中,阳性数217份,总体阳性率37.94%,其中,抗体弱阳性样本143份,占25.00%,抗体强阳性样本有74份,占12.94%。统计分析表明,在受检的76家猪场中,群体免疫合格率在75%以上的有20家,占26.32%。[结论]该调查结果表明,鄂西北地区蓝耳抗体免疫状况不容乐观,应加强对蓝耳病的积极预防,以有效地控制猪蓝耳病疫情。     

12种猪病血清学调查及病原学检测结果辨析

在湖北省、湖南省、江西省及广西壮族自治区的30个猪场,采集了750份血样、150份病死猪的组织样品,进行了CSF等12种猪病的血清学调查和病原学检测.结果显示,12种疫病中,虽然某些疾病的免疫抗体阳性率较高,但存在不同程度的野毒和致病菌的感染,由于采取了免疫和药物预防措施,某些疾病得到了有效控制.对调查与检测结果进行了分析,并就如何加强这些疫病的防控提出了建议.     

规模化猪场蓝耳病防制措施的制定及应用效果

有选择性地在湖北省12个猪场进行了猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的调查,结果显示,PRRSV血清阳性率为40%～60%,感染母猪因出现流产、死胎的损失率为18.8%～34.7%,仔猪出生至断乳后保育阶段的死亡率平均为21.3%.针对于此,通过建立合理的PRRS免疫程序、更新饲养管理方法、加强卫生防疫制度、提高鉴别诊断水平、防止其他疾病混合感染、强化对病猪的护理等防治措施后,母猪的产活仔数从窝平6.84头提高到9.20头,窝平提高了2.36头,死胎、流产造成的损失率由26.4%降到4.75%,仔猪从哺乳阶段到保育阶段结束的死亡率由21.3%降到8.72%.     

河南省部分中小型猪场种公猪猪瘟野毒感染的分子流行病学调查

[目的]了解河南省部分中小型猪场公猪精液中猪瘟野毒的感染状况。[方法]应用RT-PCR方法对河南省10个中小型猪场的58份种公猪精液进行了猪瘟野毒感染情况的调查。[结果]7个猪场的猪瘟野毒检测结果呈阳性,占总检测场数的70%;10份精液的猪瘟野毒检测结果呈阳性,样品阳性率为17.24%。[结论]河南省大部分中小型猪场存在种公猪猪瘟野毒感染的现象,且感染状况较为严重。     

湖北部分肉种鸡群J亚群禽白血病血清学调查及PCR检测

采用间接ELISA和ALV-J特异性PCR方法,对湖北省荆州市的两个肉种鸡场共94只淘汰肉种鸡进行J亚群禽白血病血清学调查和ALV-J前病毒核酸检测.两个鸡场共检测出13份ALV-J抗体阳性血清和11份核酸阳性样品,抗体阳性率分别为13.2%和14.6%,核酸阳性率分别为11.3%和12.2%.血清学调查和PCR检测结果表明,湖北鸡群已存在J亚群禽白血病.     

非典型性猪瘟的诊断和防制

猪瘟病毒是猪最重要的病原之一 ,中等毒力的猪瘟病毒可导致猪瘟慢性感染 ,其间不断向外界排毒 ,直到死亡。仔猪猪瘟往往是先天感染低毒株猪瘟病毒 ,出生后又受到持续感染 ,免疫反应弱 ,引发非典型性猪瘟 ,给猪场造成较大经济损失 ,值得高度重视     

规模化猪场大肠杆菌多价灭活苗的免疫试验

[目的]为减少大肠杆菌给规模化猪场造成的经济损失提供理论依据。[方法]用湖北省3个规模化猪场分离的致病性大肠杆菌O抗原优势血清型菌株,制备成3种自制多价灭活苗,分别于产前30、15d对30头妊娠母猪进行免疫保护试验。[结果]自制大肠杆菌多价灭活苗的甲醛含量为0.15%,符合质量标准。使用该苗进行免疫后,仔猪的平均发病率为5.8%,比对照组降低了40.8%。该疫苗免疫保护效果理想,平均保护率为87.5%。该疫苗较好地预防了仔猪黄痢、白痢的发生,极大地提高了仔猪成活率。[结论]在实际生产中,应定期从发病猪群中分离大肠杆菌菌株,根据分离结果不断调整灭活苗中的优势菌株。