冻干/新鲜青稞老面发酵青稞面团的细菌群落结构比较分析

为初步探讨青稞老面冻干粉作为发酵剂,发酵生产青稞馒头的可行性,本研究分别以冻干青稞老面(QKDG)与新鲜青稞老面(QKXX)发酵生产青稞面团,同时利用高通量测序技术对青稞面团细菌群落结构进行比较分析。结果表明:细菌门水平上,在QKDG和QKXX中硬壁菌门都是优势种群,分别占到各时期菌落种群的81.76%和92.47%;细菌科水平,在QKDG和QKXX中明串珠菌科都是优势种群,分别占到各时期菌落种群的70.29%和48.24%;细菌属水平,在QKDG和QKXX中魏斯氏菌属都是优势种群,分别占到各时期菌落种群的68.41%和44.39%。从细菌群落热图可以看出,QKDG和QKXX细菌分布有一定的差别,但样品之间微生物群落结构差距不大,有一定的相似性;系统进化树表明在QKDG和QKXX两个样本中的优势菌群为魏斯氏菌属、乳杆菌属、明串珠菌属和蓝细菌,其进化关系是魏斯氏菌属和明串珠菌属的进化关系最近,其次为乳杆菌属、蓝细菌与其他属之间的进化关系最远。通过比较初步确定冻干青稞老面可以作为青稞馒头生产的发酵剂。     

不同底物对液体发酵饲料细菌群落结构的影响

【目的】液体发酵饲料有益于动物肠道健康，具有良好的应用前景。分析不同底物对液体发酵豆粕的理化特性和细菌群落的影响，为发酵饲料的开发利用提供参考。【方法】采用正交试验分析红糖、鱼粉和豆粕及其组合，对液体发酵饲料品质的影响；采用16S rDNA测序，分析不同底物对细菌群落结构的影响。【结果】液体发酵饲料外观与原料浓度相关，即原料浓度越大，发酵饲料颜色越深。添加豆粕和鱼粉提高了发酵液体中的有机质和氮含量。PCA分析显示发酵前后样本中具有完全不同的细菌群落结构。经发酵，液体饲料中的细菌种类和数量都有所增加。发酵初期，变形菌门细菌占主导，其中的优势属为黄单胞菌（Xanthomonas）；发酵结束后，厚壁菌门占主导，其中乳杆菌（Lactobacillus）和魏斯氏菌（Weissella）等乳酸菌是优势属。发酵底物是影响液体发酵饲料质量的重要因素，红糖与假单胞菌属（Pseudomonas）、黄单胞菌属（Xanthomonas）、魏斯氏菌属（Weissella）、片球菌属（Pediococcus）和乳杆菌（Lactobacillales）含量呈正相关。鱼粉与乳杆菌属含量呈负相关，与嗜冷杆菌属（Psyc...     

不同发酵时期大麦青贮品质和微生物多样性变化

本试验旨在阐明不同发酵时期大麦青贮发酵品质及细菌多样性的动态变化。试验分别在青贮第2 d、青贮第14 d、青贮第60 d和有氧暴露第5 d采样,对青贮饲料的发酵品质、营养成分等进行测定,并采用Miseq高通量测序技术分析细菌的多样性和组成。结果表明,与青贮第2 d相比,大麦青贮第60 d的pH值显著下降(P0.05),乳酸含量显著升高(P0.05)。青贮第2 d的细菌优势菌群是魏斯氏菌属(Weissella)和乳杆菌属(Lactobacillus),相对丰度分别为45.960%、30.680%。青贮第14 d的细菌优势菌群为乳杆菌属(Lactobacillus),相对丰度为74.720%,其次是魏斯氏菌属(Weissella),相对丰度为13.170%。青贮第60 d的细菌优势菌群为乳杆菌属(Lactobacillus),相对丰度为96.740%。有氧暴露第5 d乳杆菌属(Lactobacillus)的相对丰度为0.710%,有氧暴露后滋生了不动杆菌属(Acinetobacter)、沙雷氏菌属(Serratia)等有害菌。综上所述,青贮第2～60 d大麦青贮的优势菌群是乳杆菌属,而有氧暴露后菌群结构发生了变化,不动杆菌属、沙雷氏菌属等有害菌的相对丰度增加。     

几种配方制备有机肥菌群分析及其育苗效果评价

【目的】明确几种不同配方对牛粪、羊粪、鸡粪有机肥发酵过程中菌群变化的影响及其育苗效果。【方法】以不同配方分别处理牛、羊、鸡粪,经30 d的保温、厌氧发酵制成有机肥,采用PCR-DGGE、Biolog生态板技术解析菌群变化情况及碳代谢活性;采用番茄穴盘育苗实验评价肥效。【结果】从DGGE分离菌肥微生物结果为乳酸杆菌属(Lactobacillus sp.)和魏斯氏菌属(Weissella sp.)所占比例较大,乳酸杆菌属(Lactobacillus sp.)为40.4%魏斯氏菌属(Weissella sp.)为23.8%;从平均颜色变化率(AWCD)可以看出Shannon-Wiener指数(H’)羊粪要高于鸡粪和牛粪的水平;主成分分析显示牛粪组在3个处理的菌群碳源利用水平均存在差异;羊粪组Y1和Y2菌群群落结构相对较一致,处理Y3和Y4存在差异;鸡粪组处理J2和J3群落结构相对较一致,处理J1和J4则存在差异。不同的处理方法对植株的4个指标影响各不相同,存在较大差异性。【结论】不同配方处理对牛、羊、鸡粪有机肥菌群结构造成显著影响,N3、Y3和J1处理的肥效最佳,番茄苗株高平均比对照高出25.5%、22.03%和26.16%。     

玉米青贮中细菌多样性分析

[目的]揭示玉米青贮过程中细菌的多样性,为玉米青贮菌剂的优化和有害菌的抑制提供理论参考.[方法]构建细菌16S rDNA克隆文库,ARDRA(核糖体DNA扩增片段限制性内切酶分析)等方法.[结果]采用ARDRA方法将289个阳性克隆子归类为35个OTU,克隆文库覆盖率达到98.62;,其中细菌有11个属,包括明串珠菌属(肠膜明串珠菌Leuconostoc mesenteroides ATCC 8293、假肠膜明串珠菌Leuconostoc pseudomesen-teroidesR-31687)、魏斯氏菌属(Weissella sp.MVP03)、片球菌属(Pediococcus pentosaceus MY-800)、乳杆菌属(Lactobacillus plantarum IMAU70023)、乳球菌属(Lactococcus lactis HDDMM12、Lactococcus lactis KLDS、Lactococcus lactis SL3、Lactococcus lactis subsp.lactis MR17)、拉恩氏菌属(RahneUa sp.N2-2)、埃希氏菌属(Escherichiacoli strain NBRI1707)、克雷伯氏菌属(Klebsiella pneumoniae strain K30)、葡萄球菌属(Staphylococcus kloosii strainIv8)、寡养单胞菌属(Stenotrophomonas mahophilia IdR)、芽孢杆菌属(Bacillus licheniformis).其中明串珠菌属所占比例最高26.6;,其次是乳球菌属23.5;,再者是克雷伯氏菌属22.5;,乳杆菌属8.6;,片球菌属4.2;,拉恩氏菌属2.4;,葡萄球菌属2.0;,芽孢杆菌属2;,魏斯氏菌属1.7;,寡养单胞菌属1.7;,埃希氏菌属0.3;,除此之外还有4.1;的不可培养细菌.[结论]建立的青贮玉米细菌文库中70;的转化子属于乳酸菌类,但在文库中同时也有一定比例的致病或有害菌,因此开展发酵助剂或者有害菌抑制剂的研究及应用研究尤为重要.     

基于16S rDNA-DGGE技术的真空包装鲢鱼片腐败菌群研究

【目的】对真空和非真空包装不同温度贮藏的鲢鱼片的腐败菌群进行研究,为真空包装冷藏鲢鱼片腐败菌群及货架期的确定提供参考。【方法】应用16SrDNA V3区变性梯度凝胶电泳(DGGE)分析方法,研究不同温度(4,10,20℃)条件下,真空和非真空包装鲢鱼片的腐败菌群。【结果】鲢鱼片贮藏终点的微生物具有多样性,真空包装鲢鱼片的主要腐败菌为少食嗜酵母菌(Zymophilus paucivorans)、假单胞菌属(Pseudomonas)细菌、梭状芽孢杆菌(Clostridium frigidicarnis)、乳杆菌(Lactobacillus oligofermentans);不同温度下假单胞菌属细菌、漫游球菌(Vagococcus sp.)和莓实假单胞菌(Pseudomonas fragi)为优势菌;Pseudomonas sp.为鲢鱼片特征腐败优势菌。在4℃条件下,真空包装对一部分细菌起到抑制作用,鲢鱼片腐败菌群由少食嗜酵母菌、假单胞菌、梭状芽孢杆菌、威尔氏菌属(Weissella sp.)和乳杆菌构成。【结论】16SrDNA-DGGE技术可以有效揭示真空包装冷藏鲢鱼片腐败菌群结构。4℃冷藏和真空包装相结合可改变鲢鱼片菌群结构,同时抑制部分腐败菌,达到延长货架期的目的。     

拉萨传统乳制品酥油的微生物多样性与开发前景研究

【目的】研究拉萨地区酥油中的主要微生物类群,为酥油的微生物质量安全提供重要数据基础。【方法】本文采用PCRDGGE分子生物学技术从拉萨市15份酥油样品中鉴别出62种细菌和18种真菌。【结果】酥油样品中的优势细菌种群主要为乳球菌属、假单胞菌属、链球菌属及乳杆菌属;优势真菌种群主要为酵母菌,其中44.4%为假丝酵母属、22.2%为亚罗酵母属、11.1%为毕赤酵母属。【结论】酥油中能够产生风味物质的微生物以乳酸菌和酵母菌为主,同时酥油微生物种群中还含有少量粪肠球菌等病原微生物。这些结果对酥油有益微生物资源的开发利用与质量安全防控提供了科学依据。     

添加辣椒对酸鱼发酵进程和理化指标的影响

为了研究辣椒对酸鱼发酵进程的影响,利用生化分析技术和高通量测序技术对酸鱼发酵过程中菌落总数、pH值、挥发性盐基氮(TVBN)以及微生物的种类和丰度进行了分析。结果表明:与未添加辣椒的酸鱼相比,添加辣椒会抑制发酵前期菌落总数的增加和pH值的降低,同时还可以大大减少酸鱼发酵过程中TVBN的含量;添加辣椒会显著增加发酵酸鱼的细菌多样性,且减缓酸鱼发酵前期细菌多样性的下降;在酸鱼发酵过程中葡萄球菌(Staphylococcus)、乳杆菌(Lactobacillus)和魏斯氏菌(Weissella)逐渐成为优势菌群,添加辣椒可大大增加酸鱼发酵中后期魏斯氏菌在酸鱼中所占的比例。     

添加辣椒对酸鱼发酵进程和理化指标的影响

为了研究辣椒对酸鱼发酵进程的影响,利用生化分析技术和高通量测序技术对酸鱼发酵过程中菌落总数、pH值、挥发性盐基氮(TVBN)以及微生物的种类和丰度进行了分析。结果表明:与未添加辣椒的酸鱼相比,添加辣椒会抑制发酵前期菌落总数的增加和pH值的降低,同时还可以大大减少酸鱼发酵过程中TVBN的含量;添加辣椒会显著增加发酵酸鱼的细菌多样性,且减缓酸鱼发酵前期细菌多样性的下降;在酸鱼发酵过程中葡萄球菌(Staphylococcus)、乳杆菌(Lactobacillus)和魏斯氏菌(Weissella)逐渐成为优势菌群,添加辣椒可大大增加酸鱼发酵中后期魏斯氏菌在酸鱼中所占的比例。     

基于高通量测序分析豆粕发酵过程中细菌群落结构及多样性

为分析豆粕发酵过程中各阶段的细菌群落结构及多样性,利用MiSeq高通量测序技术检测2批发酵豆粕中细菌的16SrRNA基因V3-V4高变区序列,比较发酵0、24、48h时细菌群落的差异。结果显示:在属水平上,发酵豆粕中的主要优势菌属(≥1.0%)为芽胞杆菌属(Bacillus)、乳酸杆菌属(Lactobacillus)、魏斯氏菌属(Weissella)、乳球菌属(Lactococcus)、乳酸片球菌属(Pediococcus);随发酵进行芽胞杆菌属相对丰度逐渐降低,乳杆菌属相对丰度先升高后趋于稳定;2批豆粕在整个发酵过程中细菌群落结构变化相似,发酵后期细菌群落结构均趋于稳定;结果表明豆粕发酵过程中微生物群落结构变化是相对稳定的。     

混料设计在藏灵菇奶纯培养发酵剂配方设计中的应用

 【目的】寻求藏灵菇奶纯培养发酵剂中各组分的最佳组合。【方法】采用混料设计研究了发酵剂中5种菌种的不同组合对发酵奶风味成分的影响,建立各菌种在混合发酵剂中配比与发酵的主要代谢产物之间的回归模型,考查配方中各组分的互作效应。【结果】分析得出乳酸的最大预测值为8.16 g•L-1;丁二酮的最大预测值为77.23 mg•L-1;乙醇的最大预测值为4 259 mg•L-1;二氧化碳的最大预测值为2.12 g•L-1。对满足所有期望的响应值的条件进行优化,获得藏灵菇奶纯培养发酵剂的最优组合为乳酸乳球菌（27%）、明串珠菌（37%）、开菲尔乳杆菌（11%）、干酪乳杆菌（10%）、克鲁维酵母（15%）。【结论】混料设计和调优软件可用于混合发酵剂中多组分和多目标参数优化,获得最优的发酵剂组合。     

真空包装盐水鹅加工过程中微生物污染状况与菌群多样性研究

利用传统平板培养结合聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)的技术方法,对真空包装盐水鹅加工过程中微生物污染状况和菌群多样性进行了分析。结果表明:环境及产品表面微生物的数量和种类随加工工序和时间的不同而变化;解冻和分割是影响产品卫生质量的关键环节;原辅料携带的污染菌是加工过程中微生物污染的主要来源;环境、设备和产品之间的交叉污染及分割时的二次污染是产品表面微生物污染的主要途径;加工过程中主要微生物种类有:Leu-conostoc lactis、Lactobacillus parabuchneri、Uncultured Psychrobacter sp.、Acinetobacter johnsonii、Shewanella baltica OS678、Pseudo-monas fluorescens、Psychrobacter sp.、Macrococcus caseolyticus、Staphylococcus aureus、Psychrobacter sanguinis、Pseudomonas fragi、Weissella hellenica和Carnobacterium divergens,其均可能成为产品在贮藏期间的优势腐败菌,影响产品货架期。     

响应面法优化腌制芥菜发酵工艺的研究

以叶用芥菜为原料,采用接种乳酸菌的方式腌制芥菜,优化食盐添加量、接种量、起始pH值和发酵时间,运用响应面分析方法,筛选出腌制芥菜发酵工艺最佳参数。结果表明,腌制芥菜的最佳发酵工艺条件为食盐添加量4.37%、接种量3.72%、起始pH值5.21、发酵时间7.46d,在此条件下腌制芥菜的亚硝酸盐含量仅为1.95mg/kg,总酸含量为0.51g/100g,感官评分为93.50分。     

不同乳酸菌发酵对桂圆肉中酚类物质及抗氧化活性的影响

【目的】比较不同乳酸菌种发酵对桂圆肉（干制的龙眼果肉）中游离态、结合态酚类物质含量和单体酚组成及其抗氧化活性的影响,为开发营养保健的乳酸菌发酵龙眼新产品提供参考。【方法】将桂圆肉打浆（料水比为1﹕1.5）后作为发酵基质,进行高温湿热灭菌,再分别接入7种不同乳酸菌（植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、戊糖片球菌、明串珠菌、保加利亚乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种和干酪乳杆菌,菌浓度：8.0-9.0 lg CFU/mL）,接种量为1%,在30℃下静置发酵48 h（pH 4.0-4.2）,然后对发酵前后桂圆肉中游离态和结合态总酚、总黄酮含量的变化进行分析,采用高效液相色谱法分析其单体酚类的组成及含量的变化,采用铁离子还原能力（ferric reducing abi1ity of plasma,FRAP）和氧自由基吸收能力（oxygen radical absorption capacity,ORAC）两种方法评价其体外抗氧化能力差异。【结果】7种乳酸菌发酵均能不同程度增加桂圆肉中游离态总酚和总黄酮含量,降低结合态总酚和总黄酮含量。与发酵前相比,发酵后桂圆肉游离态总酚含量增加0.4%-11.9%,结合态总酚含量下降14.4%-41.4%;游离态总黄酮含量增加2.8%-19.6%,结合态总黄酮含量下降19.6%-70.6%。但不同菌种对其影响存在差异,其中植物乳杆菌释放桂圆肉中结合态酚类物质的能力最强,使游离酚含量增加11.9%,结合态酚含量下降41.4%,游离态总黄酮增加19.6%,结合态总黄酮下降70.6%。不同乳酸菌发酵对桂圆肉中单体酚（没食子酸、丁香酸、表儿茶素、高儿茶酚、原儿茶酸、对香豆酸和异槲皮苷）含量影响亦存在显著差异（P＜0.05),其中发酵后的游离态的没食子酸和高儿茶酚含量分别增加8.6%-69.8%和0.4%-29.5%,结合态的没食子酸和高儿茶酚含量分别下降80.0%-88.3%和45.6%-73.9%。而乳酸菌发酵后,桂圆肉游离态FRAP和ORAC抗氧化能力与发酵前相比也有显著提高（P＜0.05),其中植物乳杆菌发酵后,游离态FRAP和ORAC抗氧化能力分别提高11.8%和59.1%。【结论】乳酸菌发酵能提高桂圆肉中游离态酚类物质含量,降低结合态酚类物质含量,同时提高其抗氧化能力。植物乳杆菌在发酵桂圆肉的过程中,其释放结合态酚类物质的能力明显优于其他乳酸菌,其发酵后桂圆肉的抗氧化能力也有明显提高。     

PCR-DGGE指纹技术与分离技术结合筛选藏灵菇奶发酵过程的优势菌

【目的】获得藏灵菇发酵奶发酵过程的优势菌，并开发出纯培养发酵剂替代藏灵菇进行这类新型发酵奶的工业化生产。【方法】将PCR-DGGE指纹技术和传统培养方法结合，对藏灵菇发酵奶中微生物种群结构进行研究。【结果】DGGE指纹图谱显示混合菌群中细菌有4条条带无对应的纯菌株，而纯菌株中有2株在混合菌群的图谱上没有相应的条带。通过对150株分离菌的PCR-DGGE指纹图谱分析，获得了8组乳酸菌和5组酵母菌，进一步的序列分析和相似性比较，确立了藏灵菇发酵奶中的优势菌为肠膜明串珠菌、乳酸乳球菌、开菲尔乳杆菌、干酪乳杆菌和克鲁维酵母，单孢酵母、啤酒酵母、假丝酵母发酵后期成为优势菌。【结论】本研究建立了一种基于分子生态的微生物高效筛选技术，为藏灵菇纯培养发酵剂的开发提供了理论依据及丰富的菌种资源。     

腌制大头菜亚硝酸盐含量及降低措施研究

通过对腌制大头菜用不同盐分、温度、糖分、酸度、Vc等处理,探讨其发酵过程中影响亚硝酸盐含量的因素及降低亚欧盐含量的方法.结果表明,适当降低食盐浓度,提高温度,增加酸度,添加糖分及Vc,能够有效降低腌制食品中亚硝酸盐含量.     

肠衣加工过程中拉伸特性和色差变化分析

【目的】研究肠衣在生产过程中品质特性变化,以期更好地开发利用肠衣资源。【方法】选取几个工艺点,用质构仪测定肠衣的拉伸性变化,色差计测定肠衣的色差变化。【结果】肠衣在加工过程中,随着加工时间推移,拉伸阻力先呈明显上升趋势,但肠衣腌制后拉伸阻力又出现明显的下降趋势;L*（亮度）值在腌制之前呈明显下降趋势,腌制后则呈明显上升趋势;b*（黄度）值在贮藏两年后才出现明显上升趋势。【结论】肠衣在腌制后和经长时间贮藏后拉伸特性和色差均会发生明显变化。     

正交试验优化腌制芥菜发酵工艺及调控亚硝酸盐含量的研究

[目的]优化芥菜腌制发酵工艺,控制腌制芥菜亚硝酸盐含量。[方法]以芥菜为原料,以亚硝酸盐含量、感官评分为指标,采用正交试验设计,优化芥菜腌制发酵工艺的生产方法;以亚硝酸盐含量、亚硝峰峰值的抑制率为指标,采用单因素试验法,确定异抗坏血酸钠、EDTA-2Na、藠头及柠檬酸对亚硝酸盐含量的调控作用。[结果]在乳酸菌接种量5%、食盐添加量5%~7%(取6%)、温度30℃、发酵9 d的工艺条件下,腌制芥菜中亚硝酸盐含量为0.74 mg/kg,远低于国家标准规定的20 mg/kg的标准,所得的腌制芥菜风味可口。异抗坏血酸钠和藠头能有效抑制亚硝峰的峰值及降低成品中亚硝酸盐含量,而柠檬酸和EDTA-2Na仅能有效抑制亚硝峰的峰值,不能有效降低成品中亚硝酸盐含量。[结论]研究可为腌制芥菜的开发利用提供技术支撑。     

脱盐黄塘头菜加工工艺研究

[目的]优化黄塘头菜脱盐、保脆和杀菌过程的最佳工艺条件。[方法]以正果黄塘头菜为原料,进行脱盐、保脆和真空包装处理后,通过不同杀菌方式研究对低盐头菜品质的影响,并测定低盐头莱在贮存过程中理化指标和微生物指标的变化,来判定产品的品质变化。[结果]试验表明,脱盐黄塘头菜最佳加工工艺条件为：黄塘头菜：0．3％乳酸钙水溶液为1：2或1：3浸泡20min进行脱盐保脆,添加0．5g/kg山梨酸钾后抽真空包装,进行85℃杀菌15min。所得脱盐头菜色泽正常,有轻微的透明感,具有头菜的鲜香味,无异味,口感脆嫩,商业无菌。[结论]研究可为黄塘头菜的加工提供一定的技术支持。     

降解咸鱼中亚硝酸盐的乳酸菌降解特性研究

从腌制咸鱼中分离得到植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、肠膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides)、戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)3株乳酸菌。研究了温度、pH、亚硝酸盐底物浓度、食盐含量对其降解亚硝酸盐的影响。结果表明,3株乳酸菌对亚硝酸盐降解的最适温度为35℃左右,降解最适pH为5.5,对食盐、亚硝酸盐具有良好的耐受性,在150 mg/L的亚硝酸盐和5%以下的食盐中对亚硝酸盐的降解作用明显,具有应用于腌制食品中的潜力。