硒蛋氨酸对猪细小病毒体外增殖的抑制作用

以PK15细胞为模型,研究不同浓度的硒蛋氨酸对猪细小病毒(PPV)体外复制的抑制作用。结果表明,在2～8μmol·L-1范围内,硒蛋氨酸对细胞生长没有影响,但对猪PPV的体外复制呈现显著的抑制作用(P<0.05),且随着浓度的增加其抑制作用增强。还原型谷胱甘肽和甘露醇均有增强硒蛋氨酸的抑制病毒复制作用,两者同时添加时,其作用更明显。     

黄芪和板蓝根对猪细小病毒的体外抑制作用

【目的】探讨黄芪和板蓝根对猪细小病毒(PPV)的体外抑制作用。【方法】选用中草药黄芪、板蓝根作为抗病毒药物,利用细胞病变(CPE)抑制试验,测定黄芪与板蓝根单独使用及等体积合用,在PK-15单层细胞上对猪细小病毒的抑制作用。【结果】板蓝根单独使用时,体外试验对PPV有明显的抑制作用,对PPV的最小直接杀灭质量浓度为0.63 mg/mL,最小阻断质量浓度为0.31 mg/mL;黄芪单独使用时对PPV无明显的抑制作用;板蓝根与黄芪等体积合用时,对PPV的抑制作用显著增强,最小直接杀灭质量浓度提高为0.31 mg/mL,最小阻断质量浓度提高为0.038 mg/mL。【结论】黄芪与板蓝根联合使用抗病毒能力增强,且毒性较弱。     

生物表面活性素体外抗猪细小病毒活性研究

研究了生物表面活性素(surfactin)体外抗猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)效果.观察生物表面活性素的细胞毒性,对PPV直接灭活作用,抗PPV吸附作用及对PPV生物合成抑制作用.结果表明,生物表面活性素对猪肾(porcine kidney,PK-15)细胞的TD50和TD0分别为31.25,4.03 μg/mL;具有直接灭活PPV效果,不具有抗PPV吸附作用,对PPV生物合成无显著影响.     

板蓝根多糖的提取及其对猪细小病毒的体外作用

用水煮醇沉法提取板蓝根多糖,通过观察PK-15细胞病变效应（CPE）来评价板蓝根多糖的不同加药方式体外对猪细小病毒（PPV）的阻断和抑制作用。结果表明板蓝根多糖在对细胞的安全浓度范围内,对猪细小病毒有明显的阻断作用和抑制的作用,最小的阻断浓度为2.09μg/ml,最小的抑制浓度为4.19μg/ml。     

白藜芦醇抗柯萨奇病毒作用机理研究

在非洲绿猴肾细胞(Vero E6)上接种柯萨奇B2病毒,采用细胞病变抑制法(Cytopathic effect inhibition Assay)和四甲基偶氮唑蓝(MTT)法,在预防、治疗和直接作用3种试验模式下探讨白藜芦醇体外对柯萨奇病毒的抑制作用.白藜芦醇体外抗病毒药效显示:(1)预防模式对柯萨奇病毒无抑制作用;(2)治疗和直接作用模式对柯萨奇病毒均有一定程度的抑制作用,且治疗模式(抑制率为71.5％)效果优于直接作用(抑制率为41.5％).说明白藜芦醇对柯萨奇病毒具有体外抑制作用,其可能通过多个途径抑制病毒在宿主细胞内的复制.     

复方苦芩总生物碱保护 F81细胞免受犬细小病毒损伤作用的探究

为了探讨中药复方苦芩总生物碱(Total Alkaloids in Kuqin Compound,TAKC)保护F81细胞免受犬细小病毒(Canine Parvovirus,CPV)损伤的作用机理,用CPV感染F81细胞,选择不同浓度的TAKC进行体外抗CPV感染F81细胞试验,采用琥珀酸脱氢酶活力测定法检测TAKC对F81细胞的保护率,用RT-PCR法检测TAKC处理对感染CPV的F81细胞中caspase-3基因mRNA表达水平的影响.结果显示,TAKC对F81细胞有保护作用,其在整个病毒复制过程中(直接灭活作用、阻滞作用、吸附抑制作用、穿入抑制作用和复制抑制作用)均有明显的影响,其中阻滞作用、穿入抑制作用和复制抑制作用效果最明显,对细胞的保护率分别能达到31.19%,20.54%,32.28%.同时使感染CPV的F81细胞的caspase-3基因表达水平显著降低(p0.01),表达水平与模型组的比值为1∶1.818.因此,推测TAKC可通过阻滞抑制、穿入抑制和DNA复制抑制CPV感染F81细胞和降低F81细胞中caspase-3基因表达水平,起到保护F81细胞免受CPV损伤的作用.     

桂枝复方水煎液和大黄复方水煎液体外对猪圆环病毒2型抗病毒效果初探

[目的]通过对某猪场采集的组织样本进行猪圆环病毒2型分离鉴定及培养,探讨桂枝复方水煎液和大黄复方水煎液体外对猪圆环病毒2型抗病毒效果.[方法]将从某猪场采集的疑似猪圆环病毒2型阳性病料经无菌处理后接种于猪肾细胞进行病毒的分离培养,PCR方法鉴定,细胞体外培养分离株病毒并分析其生长特性,然后通过桂枝复方水煎液和大黄复方水煎液处理病毒侵染的细胞,荧光定量PCR方法测定细胞内病毒载量.[结果]分离培养出猪圆环病毒2型分离株BY-F6代与GenBank中已收录的猪圆环病毒2型ORF2序列同源性可达到99.47％～99.60％;该病毒可在猪肾细胞中进行体外培养,48 h为病毒的复制高峰期,TCID50为10-4,3/0.1mL.6.25 mg/mL的桂枝复方水煎液体外对猪圆环病毒2型具有显著的预防作用(P＜0.05)及极显著的治疗作用(P＜0.01),3.13 mg/mL的桂枝复方水煎液可显著降低细胞内猪圆环病毒2型的复制(P＜0.05),桂枝复方水煎液不具有体外直接杀灭猪圆环病毒2型的能力.5.00 mg/mL的大黄复方水煎液体外对猪圆环病毒2型具有显著的预防作用(P＜0.05)及极显著的杀灭作用(P＜0.01),2.50 mg/mL的大黄复方水煎液可直接参与杀灭猪圆环病毒2型,显著降低细胞内该病毒的载量(P＜0.05),大黄复方水煎液体外对猪圆环病毒2型感染后的治疗作用不佳.[结论]桂枝复方水煎液和大黄复方水煎液体外对从某猪场分离及鉴定的猪圆环病毒2型具有一定的抑制作用.     

蛋氨酸硒对豇豆种子萌发及幼苗生长的影响

研究豇豆种子在不同浓度(0、3.0、4.0、8.0、10.0、20.0、50.0、100.0 mg·L-1)的蛋氨酸硒溶液的影响下的萌发情况及其幼苗生长状况的变化。结果表明,低浓度(20.0 mg·L-1)的蛋氨酸硒溶液能在一定程度上促进豇豆种子的萌发,而过高浓度的蛋氨酸硒溶液则会使豇豆种子发芽率显著降低;豇豆种子发芽指数的变化趋势伴随蛋氨酸硒溶液浓度的逐步升高,与上述发芽率呈现相似的先升后降的现象;适量(50.0 mg·L-1)的蛋氨酸硒溶液有利于增强豇豆幼苗体内过氧化物酶(POD)的活性,但当蛋氨酸硒溶液浓度超过此范围时,豇豆植株内此酶的活性遭到一定程度的破坏;在存在一定低浓度(10.0 mg·L-1)蛋氨酸硒溶液的环境下,豇豆幼苗体内丙二醛(MDA)含量随着蛋氨酸硒溶液处理浓度的升高而逐步降低,即浓度较低时,硒的存在有利于豇豆对抗逆境利于其正常生长;但当蛋氨酸硒溶液浓度持续升高时,MDA含量也随之持续增加,即硒浓度过高时,硒的存在阻碍其正常生长。豇豆幼苗体内脯氨酸(Pro)含量随蛋氨酸硒溶液浓度的升高与其MDA含量出现相似的变化趋势,在蛋氨酸硒浓度为10.0 mg·L-1时,豇豆幼苗体内Pro的含量达到最小值。因而,适宜浓度的蛋氨酸硒有助于豇豆种子的正常萌发及其幼芽的健康生长发育,但高浓度的蛋氨酸硒则会对豇豆种子的正常萌发及其幼苗的正常生长发育产生抑制作用。     

猪细小病毒在ST细胞中增殖规律的动态分析

将猪细小病毒接种于ST细胞,于不同时间点收获病毒测定其病毒滴度与病毒拷贝数,以此分析该病毒在ST细胞上的增殖规律。细胞于感染后48 h开始出现细胞病变,84 h细胞出现脱落和崩解。TCID50结果显示,病毒感染后18 h即能检出病毒滴度,随后逐渐升高至72 h达到峰值(107.2/m L),其后逐渐下降。通过SYBR GreenⅠ实时定量PCR方法测定不同时间病毒体外感染细胞后的复制动态水平,病毒含量的增长于108 h达到峰值随后逐渐下降。通过对PPV在ST细胞中的体外复制动态分析结果表明感染后96~108 h为最佳收毒时间,这为利用细胞增殖病毒生产疫苗提供重要参考。     

实时定量PCR探讨猪细小病毒自然感染猪体内病毒的分布情况

【目的】探讨猪自然感染猪细小病毒(Porcine Parvovirus,PPV)后病毒在体内的分布情况,分析病毒对猪器官组织的嗜性,揭示猪细小病毒的致病机制。【方法】利用已建立的猪细小病毒SYBR GreenⅠ实时定量PCR检测方法,定量检测自然感染仔猪、妊娠母猪和同时混合感染有猪圆环病毒2型的仔猪器官组织中PPVDNA的相对含量,分析猪细小病毒的组织嗜性及其与圆环病毒混合感染时的相互作用机制。【结果】在多种器官组织中均可检测到PPV,在感染仔猪的肾脏、脾脏、髂下淋巴结中病毒含量较高,为1.39×105～1.81×106μL-1;在感染妊娠母猪的肾脏、脾脏、肺脏、子宫内膜中病毒含量为4.56×105～5.82×106μL-1;混合感染PPV和猪圆环病毒2型(PCV2)仔猪肺脏中的PPV DNA相对含量显著增加,从2.69×104μL-1增加到5.04×105μL-1。【结论】PPV对猪肾脏、脾脏、淋巴结、妊娠母猪子宫的嗜性最强,对肝脏的嗜性较弱;PCV2的混合感染可促进PPV在肺脏的复制增殖,增强了PPV对感染器官组织的亲嗜能力。     

沙冬青总黄酮体外抗BPIV-3的试验研究

【目的】研究沙冬青总黄酮体外抗牛副流感病毒Ⅲ型(BPIV-3)的作用,并对其抗病毒作用机制进行探讨.【方法】以细胞存活率和抑制率为指标,采用MTT比色法检测沙冬青总黄酮抗BPIV-3活性.分别以感染病毒同时给药、给药后接种病毒、先感染病毒后给药3种方式观察沙冬青总黄酮对BPIV-3病毒的抑制效果.【结果】沙冬青总黄酮的安全浓度为0.187mg/mL,病毒半数细胞感染量(TCID50)为10-7.733/0.1mL.在安全浓度范围内,沙冬青总黄酮具有良好的抗BPIV-3作用,且这种作用呈一定的量效关系.当浓度为0.187mg/mL时,BPIV-3抑制率达89.43%,细胞存活率高达96.66%;当浓度为0.187mg/mL时,阻断抑制率达68.36%,而细胞存活率达到86.98%;当浓度为0.187mg/mL时,对BPIV-3复制抑制效果最明显,达到50.55%,而细胞存活率达到78.81%.同时,在安全浓度范围内,沙冬青总黄酮直接杀灭BPIV-3病毒的效力较阻断作用和抑制作用更强.【结论】沙冬青总黄酮具有良好体外抗牛副流感病毒Ⅲ型(BPIV-3)的作用.     

留兰香提取物体外抗猪细小病毒的作用

通过观察病毒引起的细胞病变效应(Cytopathogenic effect,CPE)和四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测留兰香提取物抗猪细小病毒(PPV)活性,计算药物对病变的抑制率和半数抑制浓度(50％inhibitingconcentration,IC50),并从药物预防给药(抗病毒吸附)、直接杀灭及治疗给药(抑制病毒在细胞内的生物合成)3个方面分析留兰香提取物抗PPV活性的作用机制。结果显示：留兰香挥发油在这3种作用方式中对PPV均有抑制效果,其半数抑制浓度(IC50)分别为0.008 0 mg/ml、0.001 9 mg/ml、0.003 6 mg/ml,治疗指数(TI)分别为25.88、108.95、57.50;留兰香水提液和粗提物对PPV直接杀灭的半数有效浓度(IC50)分别为0.034 0 mg/ml、0.356 0mg/ml,治疗指数(TI)分别为79.18、8.37;留兰香水提液和粗提物抑制病毒在细胞内生物合成的半数有效浓度(IC50)分别为0.043 0 mg/ml、0.063 0 mg/ml,治疗指数(TI)分别为62.60、47.27,留兰香水提液和粗提物均无抗病毒吸附作用。表明留兰香挥发油在对PPV的3种作用方式中均有安全高效活性,留兰香水提液和粗提物对PPV侵入细胞无阻止作用,但在直接灭活和抑制其在细胞内的增殖方面均有较高的活性。     

重组猪α干扰素理化性状及其体外抗病毒活性研究(摘要)(英文)

[目的]研究重组猪α干扰素(rPoIFN-α)半成品理化性状并对其体外抗病毒活性进行测试与鉴定。[方法]用HEp-2/VSV体系对3批rPoIFN-α蛋白进行抗病毒活性检测,以重组人IFN-α为参比品,测定干扰素效价;用0.25%胰蛋白酶HCl以及鼠抗猪α干扰素单克隆抗体作用已知效价的rPOIFN-α半成品,并检测各批次抗病毒活性,对rPoIFN-α理化性状进行评价;在猪肾细胞株(PK-15)上检测rPoIFN-α对猪细小病毒(PPV)和猪伪狂犬病毒(PRV)的致细胞病变抑制效应,观察rPoIFN-α的体外抗病毒活性。[结果]HEp-2/VSV体系滴定rPoIFN-α半成品效价可达1.5×105IU/ml,比活性达1.1×106IU/mg;rPoIFN-α经0.25%胰蛋白酶37℃作用1h,效价残留率低于1%,经HCl(pH=2.0)处理72h效价残留率高达95%以上,经56℃处理30min效价残留率高于47%,经鼠抗猪α干扰素单克隆抗体37℃作用1h后效价残留率约为1%;体外抗病毒试验表明,用50和500IU/mlr PoIFN-α可分别抑制PRV和PPV对PK-15细胞株致细胞病变效应。[结论]rPoIFN-α具有IFN-α的基本理化性状,其在体外可分别抑制PRV、PPV对PK-15细胞株致细胞病变效应,但剂量有差别。     

泽漆水提取物对猪流行性腹泻病毒的体外抑制作用研究

为分析泽漆水提取物对猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV)的体外抑制作用，本研究使用CCK-8法检测泽漆水提取物对非洲绿猴肾细胞(Vero CCL-81)增殖活力的影响，通过间接免疫荧光、蛋白免疫印迹、实时荧光定量PCR方法检测泽漆水提取物对PEDV的抑制作用和时间依赖关系。以广谱抗病毒药利巴韦林(Ribavirin)为阳性对照药物，探究泽漆水提取物对PEDV生命周期各个阶段的影响。结果表明:1)泽漆水提取物浓度≤500 μg/mL时在12、24 和36 h细胞无毒性。2)泽漆水提取物以剂量依赖方式显著降低PEDV-N mRNA的表达量及PEDV 病毒滴度。3)泽漆水提取物可长时间有效抑制PEDV-N蛋白的表达，预防给药对PEDV-N蛋白表达无明显抑制效果。4)泽漆水提取物在病毒复制周期的吸附及复制增殖阶段对PEDV-N蛋白的表达具有显著抑制作用，在入侵阶段对PEDV-N蛋白的表达无明显抑制效果。综上，泽漆水提取物在体外对PEDV具有显著抑制作用，主要作用于PEDV生命周期的吸附和复制增殖阶段。本研究为深入挖掘泽漆抗病毒优势奠定了基础。     

4味中草药的体外抗TGEV试验

【目的】探讨黄芪、黄芩、大黄、金钱草体外对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的抑制作用。【方法】采用传统的水提法制备黄芪、黄芩、大黄、金钱草等中药的提取液,测定其对PK-15细胞的最大安全质量浓度。采用细胞病变观察法确定4味中草药对TGEV致PK-15细胞病变的抑制作用,并通过MTT法计算药物的最小抗病毒质量浓度和抑制指数。【结果】黄芪、黄芩、大黄、金钱草的最大安全质量浓度分别为50,12.50,6.25和6.25mg/mL。黄芩、黄芪能抑制TGEV对PK-15细胞的吸附,抑制指数分别为8和4;大黄、金钱草能直接灭活TGEV病毒,抑制指数均为8。【结论】黄芩、黄芪、大黄、金钱草体外对TGEV均有抑制作用。     

苹果多酚体内外抗甲型流感病毒作用

体外试验利用甲型流感病毒感染狗肾细胞(MDCK)致细胞病变(CPE)模型评价苹果多酚对流感病毒复制的抑制作用;体内试验利用小鼠感染流感病毒致鼠肺适应株模型,以死亡保护率和生命延长率等为指标,评价苹果多酚体内抗流感病毒作用。利用体外不同作用模式试验、不同作用时间点试验和血凝抑制试验(HI)研究苹果多酚抗流感病毒作用机制。研究结果表明,苹果多酚对甲型H9N2、H3N2和H1N1 3种亚型流感病毒引起的细胞病变表现出不同程度的抑制作用,50%抑制浓度(IC50)分别是0.012、0.0042、0.003 mg/mL。200 mg/(kg.d)剂量苹果多酚对H1N1亚型流感病毒感染小鼠有明显的保护作用和延长生命率的作用(P<0.05)。苹果多酚对3种亚型流感病毒的血凝抑制最小浓度(MIC)在0.25～0.5 mg/mL范围之间。对病毒复制周期的吸附和穿入的抑制作用是其主要作用机制。说明苹果多酚在体内外均具有显著的抗流感病毒作用。     

转基因马铃薯中纯化人白介素-12的生物学活性分析

分析了转基因马铃薯中纯化人白介素-12（hIL-12）的生物学活性。结果表明,hIL-12纯化品在体外能刺激植物凝集素（PHA）活化的外周血单个核细胞（PBMC）增殖;hIL-12纯化品对人肝癌细胞HepG2．2．15的生长具有抑制作用,且其抑制效果随hIL-12浓度的升高而增强;hIL-12纯化品在体外对乙肝病毒DNA的复制和表面抗原、e抗原的分泌产生抑制作用.     

多重PCR检测猪伪狂犬病毒、猪细小病毒和猪圆环病毒2型的研究

根据GenBank上已发表的猪伪狂犬病毒(PRV)的gH基因、猪细小病毒(PPV)的VP2基因序列和猪圆环病毒2型(PCV2)的ORF2基因序列,设计合成了3对特异引物,分别建立了PRV,PPV和PCV2的单项PCR诊断方法;通过对扩增条件的筛选,建立了PRV,PPV,PCV2的复合PCR诊断方法,利用1次PCR反应,即可同时扩增PRV的355 bp,PPV的195 bp和PCV2 487 bp的特异性片段,而猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、正常细胞(PK-15)扩增结果均为阴性,对PRV,PPV,PCV2的最低检出量分别为100 fg,1 pg和10 pg的DNA.该方法适合对PRV,PPV和PCV2的联合检测和鉴别诊断.     

中药制剂“病毒宁”抗Ⅰ型单纯疱疹病毒的活性

本试验研究了中药制剂“病毒宁”在体外对单纯疱疹病毒(HSV-1)增殖的抑制作用。结果显示:“病毒宁”在1.500~0.188 g/L稀释浓度下,对HSV-1有直接杀灭作用(P<0.05);“病毒宁”在1.500~0.375 g/L稀释浓度时,能显著阻断HSV-1对BKH-21细胞的感染(P<0.05),并显著抑制病毒在细胞内的增殖(P<0.05);中药制剂“病毒宁”在体外具有明显的抗HSV-1作用,其最大无毒浓度为1.500 g/L。     

猪细小病毒的症状及防御治疗方案

<正>一、猪细小病毒猪细小病毒是一种只能在来源于猪的生长分裂旺盛的细胞(如原代猪肾、猪睾丸细胞和传代细胞)上增殖,其体外复制是杀细胞性的,细胞病变表现为细胞隆起、变圆、核固缩和溶解,最后许多细胞碎片黏附在一起使受感染的细胞单层外形不整,呈"破布条状"。另外,不同毒株间存在培养温度依赖性差异,从而可以解释不同分离株在猪体内的复制能力和毒力差异的现象。各种不同年龄、性别的家猪和野猪均易感。传染源