重组猪α干扰素理化性状及其体外抗病毒活性研究

[目的]研究重组猪α干扰素（rPoIFN-α）半成品理化性状并对其体外抗病毒活性进行测试与鉴定。[方法]用HEp-2/VSV体系对3批rPoIFN-α蛋白进行抗病毒活性检测,以重组人IFN-α为参比品,测定干扰素效价;用0.25%胰蛋白酶HCl以及鼠抗猪α干扰素单克隆抗体作用已知效价的rPoIFN-α半成品,并检测各批次抗病毒活性,对rPoIFN-α理化性状进行评价;在猪肾细胞株（PK-15）上检测rPoIFN-α对猪细小病毒（PPV）和猪伪狂犬病毒（PRV）的致细胞病变抑制效应,观察rPoIFN-α的体外抗病毒活性。[结果]HEp-2/VSV体系滴定rPoIFN-α半成品效价可达1.5×105IU/ml,比活性达1.1×106IU/mg;rPoIFN-α经0.25%胰蛋白酶37℃作用1h,效价残留率低于1%,经HCl（pH=2.0）处理72h效价残留率高达95%以上,经56℃处理30min效价残留率高于47%,经鼠抗猪α干扰素单克隆抗体37℃作用1h后效价残留率约为1%;体外抗病毒试验表明,用50和500IU/mlrPoIFN-α可分别抑制PRV和PPV对PK-15细胞株致细胞病变效应。[结论]rPoIFN-α具有IFN-α的基本理化性状,其在体外可分别抑制PRV、PPV对PK-15细胞株致细胞病变效应,但剂量有差别。     

两种细胞株检测重组犬α-干扰素效价的比较

本研究采用人羊膜细胞WISH株和人喉癌上皮细胞Hep-2株,以微量细胞病变抑制法(CPE抑制法)对同批次的8组重组犬α干扰素样品进行了效价检测,以中国药品生物制品检定所使用的标化重组人α干扰素为标准,将在两株细胞上所测结果进行比较.其检测的结果具有很好的相关性(r=0.9976.P>0.05),并且重复性较好.用结晶紫染色法评价干扰素效价能够准确地反应细胞的状态,所得结果准确、客观.表明Hep-2与WISH细胞测定结果没有差异,该方法可用于重组犬干扰素制品的效价测定.此外本研究还测定了最适试验条件如细胞浓度、接种用病毒滴度、加样方法等.     

重组猪α干扰素理化性状及其体外抗病毒活性研究(摘要)(英文)

[目的]研究重组猪α干扰素(rPoIFN-α)半成品理化性状并对其体外抗病毒活性进行测试与鉴定。[方法]用HEp-2/VSV体系对3批rPoIFN-α蛋白进行抗病毒活性检测,以重组人IFN-α为参比品,测定干扰素效价;用0.25%胰蛋白酶HCl以及鼠抗猪α干扰素单克隆抗体作用已知效价的rPOIFN-α半成品,并检测各批次抗病毒活性,对rPoIFN-α理化性状进行评价;在猪肾细胞株(PK-15)上检测rPoIFN-α对猪细小病毒(PPV)和猪伪狂犬病毒(PRV)的致细胞病变抑制效应,观察rPoIFN-α的体外抗病毒活性。[结果]HEp-2/VSV体系滴定rPoIFN-α半成品效价可达1.5×105IU/ml,比活性达1.1×106IU/mg;rPoIFN-α经0.25%胰蛋白酶37℃作用1h,效价残留率低于1%,经HCl(pH=2.0)处理72h效价残留率高达95%以上,经56℃处理30min效价残留率高于47%,经鼠抗猪α干扰素单克隆抗体37℃作用1h后效价残留率约为1%;体外抗病毒试验表明,用50和500IU/mlr PoIFN-α可分别抑制PRV和PPV对PK-15细胞株致细胞病变效应。[结论]rPoIFN-α具有IFN-α的基本理化性状,其在体外可分别抑制PRV、PPV对PK-15细胞株致细胞病变效应,但剂量有差别。     

两种细胞株滴定重组猪α干扰素效价的比较研究

采用水泡性口炎病毒（VSV）作为攻击病毒,以微量细胞病变抑制法对同批次不同浓度的8组重组猪α干扰素（rPoIFN-α）样品进行了效价检测,以中国药品生物制品检定所指定使用的标化重组人α干扰素为效价滴定的参比标准,对在牛肾细胞（MDBK）株和人喉癌上皮细胞（HEp-2）株所得结果进行比较,并对细胞与待测样品按＂一步法＂和先加细胞,待细胞长满单层再加待测样品的＂两步法＂所得的rPoIFN-α抗病毒效价进行比较。结果表明：MDBK细胞株与HEp-2细胞株对于rPoIFN-α抗病毒活性检测结果无显著性差异,均可用于rPoIFN-α抗病毒活性的检测,重组人α干扰素滴定系统可用于rPoIFN-α效价检测。两种加样方法所得结果基本相同,推荐使用＂一步法＂。     

重组猪α干扰素急性毒性研究

［目的］研究小白鼠体内重组猪α干扰素急性毒性反应，为临床安全用药提供依据。［方法］依据急性毒性实验原则，将小白鼠分为2大组：腹腔注射组和肌肉注射组，每组又分高、中、低3个剂量组，同时设正常对照组。给药后14 d内连续观察小鼠行为活动等指标和毒性反应程度，取血作血液学检查和生化检查，以获得重组猪α干扰素初步毒性资料，并在实验结束时处死小白鼠进行剖检。［结果］各组小鼠外部表现及行为特征均正常，体温和体重的变化也在正常范围之内，内脏病理解剖无器官病变情况，血液、生化指标与正常对照组无明显差异。［结论］该实验设定的猪α干扰素最高剂量（5.0×10^5 IU/只）及其以下剂量，均对小白鼠无明显毒性作用，在临床上应用重组猪α干扰素是安全的。     

重组犬α干扰素急性毒性试验研究

为观察小鼠体内重组犬α干扰素急性毒性反应,进行重组犬α干扰素临床安全用药试验。结果表明:在连续观察14 d内,各组小鼠外部表现及行为特征均正常,体温和体重的变化也在正常范围之内,内脏病理解剖无器官病变情况,血液生化指标检查;注射1.0×106IU/只雌性小鼠ALT为(85.2±5.2)U/L,较正常对照组高,其他各组生化指标与对照组相比无显著性差异(P>0.05)。可见,该试验设定的最高剂量1.0×106IU/只及其以下剂量对小白鼠均无明显毒性作用,在临床上应用该重组犬α干扰素是安全的。