病毒宁体外抗单纯疱疹病毒药效评价

采用细胞培养法评价中药制剂"病毒宁"对Ⅰ型单纯疱疹病病毒(HSV-Ⅰ)致细胞病变的影响。结果显示:"病毒宁"最大无毒浓度(TD_0)为1.5 g/L,无环鸟苷最大无毒浓度(TD_0)为62.5 mg/L,二者都能抑制单纯疱疹病毒的复制和增殖,且"病毒宁"优于无环鸟苷。二者对100半数感染剂量(TCID_(50))HSV-Ⅰ与10 TCID_(50) HSV-Ⅰ致细胞病变作用有显著差异(P<0.05),对1000 TCID_(50)HSV-Ⅰ抑制作用不明显(P>0.05)。"病毒宁"MIC为0.08 g/L,无环鸟苷MIC为9.2;无环鸟苷TI为8.0,"病毒宁"TI为36.9,是无环鸟苷的4.6倍,表明"病毒宁"是一种细胞毒性小、治疗指数高的有效抗HSV-Ⅰ药物。     

5种中药总黄酮成分体外抗病毒作用观察

为筛选抗病毒中药黄酮成分复方的主药,采用MTT法观察了淫羊藿、黄芩、忍冬藤、三七和菟丝子5种中药总黄酮成分对鸡胚成纤维细胞(CEF)生长的影响,并采用先加黄酮后接种病毒、先接种病毒后加黄酮、黄酮与病毒同时感作3种加药方式观察了各黄酮成分抗新城疫病毒(NDV)感染CEF作用。结果表明:5种中药总黄酮成分在一定质量浓度下均能促进CEF增殖或延长细胞存活时间;在安全浓度范围内的5个稀释浓度下,各总黄酮成分均有不同程度的抗病毒活性,尤其以淫羊藿黄酮在先加黄酮后接种病毒和先接种病毒后加黄酮且质量浓度为31.30μg·mL-1时,以及31.30μg·mL-1黄酮与病毒同时加入时的A570值显著大于病毒对照与细胞对照;黄芩黄酮在先接种病毒且浓度为7.80～3.90μg·mL-1时,其A570值显著大于病毒对照(P<0.05)和细胞对照(P<0.05)。最高病毒抑制率以淫羊藿黄酮最高,其次是黄芩黄酮,分别达189.70%和158.82%。结论:淫羊藿总黄酮和黄芩总黄酮具有较显著的体外抗病毒效果,可作为抗病毒中药总黄酮成分复方的主药成分。     

复方金连菊制剂对PRRSV、TGEV体外作用的研究

试验旨在研究复方金连菊中药制剂溶液对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的体外作用。以药液浓度为3.90625mg/ml～500mg/ml为样品,观察其能否进入细胞或吸附细胞表面以阻止病毒的吸附和进入。结果表明,复方金连菊中药制剂溶液对Marc-145细胞的安全浓度为62.5mg/ml,对PK15细胞的安全浓度为31.25mg/ml,在安全浓度以下不明显引起细胞损伤,对细胞无毒性作用。复方金连菊中药制剂溶液浓度为7.8125mg/ml～500mg/ml对PRRSV感染细胞的阻断作用极为显著(P0.01),药液浓度为3.90625mg/ml对PRRSV感染细胞的阻断作用不明显(P0.05);药液浓度为15.625mg/ml～500mg/ml对TGEV感染细胞的阻断作用极为显著(P0.01),药液浓度3.90625～7.8125mg/ml对TGEV感染细胞的阻断作用不明显(P0.05);说明药液浓度高于15.625mg/ml分别能对抑制PRRSV与Marc-145传代细胞和TGEV与PK-15传代细胞的吸附、融合,从而阻止病毒的吸附和进入。复方金连菊中药制剂溶液浓度在3.90625mg/ml～500mg/ml范围内对PRRSV具有极显著的直接杀灭作用(P0.01),药液浓度在62.5mg/ml～500mg/ml范围内对TGEV具有极显著的直接杀灭作用(P0.01)。说明复方金连菊中药制剂具有一定的阻止病毒的吸附和进入效果,但具体应用尚需进一步临床试验。     

三仁汤复方中药制剂对PRRSV体外抑制作用的研究

为了寻找有效预防和治疗猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）的中草药,以 Marc 145细胞为模型,采用细胞病变（CPE）抑制试验和MTT法测定细胞活力,评价三仁汤复方中药制剂的活性成分在体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的作用,并通过改变药物作用方式,初步探讨复方中药制剂的抗病毒机制。结果显示,三仁汤复方中药制剂对 Marc 145细胞的最大安全质量浓度为125 g／L,在体外对PRRSV直接灭活的最小质量浓度为15．625 g／L,抑制作用的最小质量浓度为31．25 g／L,吸附阻断作用的最小质量浓度为125 g／L,其对PRRSV的灭活作用明显优于抑制作用和吸附阻断作用,吸附阻断作用最弱。表明,在安全质量浓度范围内,三仁汤中药复方制剂在体外有显著的抗PRRSV作用,可以作为预防及治疗PRRS的药物。     

马尾藻多糖对猪脾细胞免疫活性及其抗病毒活性的影响

采用MTT法测定不同浓度马尾藻多糖(Sargassum polysaccharide,SP)对正常猪脾淋巴细胞体外增殖及其感染猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)后培养活性的影响,并用Griess和ELISA法分别检测细胞培养上清液中一氧化氮(NO)、白细胞介素2(IL-2)和γ干扰素(IFN-γ)的水平。试验结果表明:25～400μg.mL-1的SP能协同伴刀豆球蛋白(ConA)显著促进T淋巴细胞体外增殖,400μg.mL-1的SP显著促进脂多糖(LPS)刺激的B淋巴细胞体外增殖活性。SP提高正常猪脾细胞体外培养不同时间段的NO分泌量,与对照组比较,差异显著(P<0.05);不同浓度SP提高PRRSV感染的猪脾细胞体外培养分泌NO量,与病毒对照组比较,培养8 h时200μg.mL-1SP、12 h时100～400μg.mL-1SP、24 h时100μg.mL-1和400μg.mL-1SP均能显著地促进NO分泌(P<0.05)。400μg.mL-1SP极显著促进体外培养的猪脾细胞分泌IL-2(P<0.01),100μg.mL-1和400μg.mL-1SP显著促进PRRSV感染猪脾细胞IL-2和IFN-γ的分泌。结论:马尾藻多糖通过促进猪脾细胞增殖和分泌NO、IL-2和IFN-γ来调节免疫细胞活性和抗病毒能力。     

VE对犬卵母细胞体外成熟的影响

在基础培养液中分别添加浓度为0,50,100,200μmol/L的VE,研究不同浓度VE对成熟情况的影响。结果表明,体外培养48h后VE浓度为50μmol/L组GV期的比率显著高于100和200μmol/L组(P<0.05);100μmol/L组GVBD期的比率显著低于其它组(P<0.05);达到MI-MII期的比率各组之间差异不显著(P>0.05),但100μmol/L组MI-MII期的比率相对较高。体外培养72h后,VE浓度为200μmol/L组的GV期的比率显著高于对照组和100μmol/L组(P<0.05),与50μmol/L组之间差异不显著(P>0.05);达到GVBD和MI-MII期的比率各组之间均差异不显著(P>0.05)。因此,VE对犬卵母细胞的核成熟没有明显促进作用。     

甘氨胆酸对小鼠体外脾淋巴细胞凋亡的影响

本研究旨在探索不同浓度的甘氨胆酸(Glycocholic acid,GCA)对小鼠体外脾淋巴细胞凋亡的影响。在0.02μg/ml,0.035μg/ml,0.07μg/ml,0.21μg/ml,1.05μg/mL不同浓度的GCA作用下,应用倒置显微镜观察了体外脾淋巴细胞的核形态,采用琼脂糖凝胶电泳法检测了脾淋巴细胞的DNA片段,采用流式细胞仪测定了脾淋巴细胞凋亡早期磷脂酰丝氨酸外翻百分率;采用分光光度法测定了凋亡细胞氧化还原反应活性——GSH的含量;通过ELISA法检测了Caspase-3和Caspase-9的活性。结果:GCA能够使脾淋巴细胞细胞产生核固缩和凋亡小体;显著引起脾淋巴细胞DNA片段化(P<0.05),极显著的诱导脾淋巴细胞磷脂酰丝氨酸外翻(P<0.01);显著降低GSH的含量(P<0.05);显著提高Caspase-9和Caspase-3的活性(P<0.05)。结论:GCA具有显著的提高小鼠体外脾淋巴细胞凋亡的作用(P<0.05)。     

金线莲提取物体外抑菌及抑制鸡新城疫病毒在CEF上的增殖

采用滤纸片扩散法和二倍稀释法测定金线莲不同方法提取物对6种供试菌的体外抑菌效果,并利用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定金线莲水提取物对NDV在鸡胚成纤维细胞(CEF)上增殖的影响.结果表明:3种提取方法所获得的金线莲提取物均对链球菌有较强抑制作用,表现为高敏;对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门氏菌表现为中敏;对酵母菌和普通变形杆菌的抑制作用不明显,表现为低敏.最小抑菌浓度均不高于12.5 g.L-1.药物与病毒混合组对NDV的抑制率显著高于先病毒后药物组和先药物后病毒组(P<0.05).药物浓度与NDV抑制率存在明显的正相关(P<0.05).在先药物后病毒组和药物与病毒混合组中,15.62-31.25 g.L-1金线莲水提取物具有显著的抗NDV效果;1.95-3.90 g.L-1金线莲水提取物抗NDV效果不明显.     

维生素B 17对HepG2细胞体内外生长的影响

分别通过体外培养和体内接种试验,探讨维生素B-17对HepG2细胞体内外生长的影响。结果表明:体外试验中,当维生素B-17的添加量为1.3 g/L时,HepG2细胞生长抑制率仅为5.62%;当添加量为10.5 g/L时,抑制率增加到30.99%;当添加42 g/L时,抑制率达到56.30%。体内试验低质量浓度和中质量浓度组瘤块生长抑制均不明显,与对照组相比差异不显著(P>0.05);高质量浓度组对肿瘤生长抑制作用最好,与对照组相比差异显著(P<0.05)。说明高质量浓度的维生素B-17对HepG2细胞体内外生长均有抑制作用。     

培养基大量元素、蔗糖、琼脂对草莓试管苗生长的影响

采用正交设计方法研究了培养基中的大量元素浓度、蔗糖浓度和琼脂浓度对草莓试管苗生长的影响,结果表明:3个因素中大量元素浓度对草莓试管苗增殖作用最显著,其次为琼脂浓度,蔗糖浓度作用不明显;大量元素各浓度水平中,以MS为最好,琼脂浓度以10 g/L水平为最好.对丛芽生长高度的影响,3个因素都有显著的作用(P＜0.05);蔗糖、大量元素浓度对丛芽根生长的作用达极显著水平(P＜0.01);蔗糖浓度以60 g/L水平最有利于根的发生,大量元素浓度以1/2MS水平为好.     

五味子木脂素类成分中护肝主活性成分的体外筛选

目的:比较五味子木脂素成分对CCl4致L02肝细胞损伤的保护作用,筛选出护肝作用最大的主活性成分。方法:体外培养L02细胞,分别以不同浓度五味子甲素、乙素、丙素、醇甲、醇乙、酯甲对细胞加以保护,CCl4体外诱导细胞损伤;MTT法测定细胞存活率;通过试剂盒的方法分别检测各组细胞上清液中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活力。结果:CCl4最佳造模浓度为80mmoL·L-(1P0.01);5～20μmoL·L-1的五味子木脂素单体均能增加L02肝细胞存活率(P0.01);考察浓度为20μmol·L-1时,均可抑制CCl4引起ALT、AST活性的升高(P0.05或P0.01);结论:通过比较得出五味子乙素护肝作用最强。     

烷化剂EMS处理水稻愈伤组织诱导突变的方法初探

采用ＥＭＳ 处理水稻体细胞愈伤组织诱导变异,试验表明,采用浸渍法处理２ｈ ,ＥＭＳ 对水稻体细胞愈伤组织的半致死质量浓度为１ ～５ ｇ／Ｌ;采用滴加法处理,每管加０ ．１ ｍｌ 时,半致死浓度为５０ ｇ／Ｌ左右。根据出苗率和变异情况,用滴加法处理,每管滴加０ ．２ ｍｌ 时,处理浓度以１ ｇ／Ｌ为好。经ＥＭＳ 处理后,再生植株株系的变异频率比对照高５ ．０２ ％ 。     

微量元素钴对脆杆藻和斜生栅藻增殖的影响

微量元素钴是浮游藻类代谢、生长所需要的一种元素。藻类增长潜力(AGP)试验显示,在钴(Co2+)质量浓度为0.120 0～0.167 8μg/L的液体培养基中,脆杆藻(Fragilaria sp.)的生长增殖较快;Co2+质量浓度达到0.229 1μg/L时,脆杆藻的生长增殖受到明显抑制。Co2+质量浓度在0.120 0～0.229 1μg/L之间时,斜生栅藻(Scenedesmus obiquus)的生长增殖较快;Co2+质量浓度大于0.284 9μg/L后,斜生栅藻的生长增殖则受到不同程度的抑制。汾河水库水体的Co2+含量平均为0.167 8μg/L,在其他条件适宜时对硅藻和绿藻的细胞分裂与生长有促进作用。     

一种简单的橙皮甙测定方法

报道了一种新的橙皮甙测定方法。它是基于在硫酸介质中,橙皮甙与氢离子形成配离子,其特征吸收峰波长为500 nm,从而实现了橙皮甙的快速测定。方法的线性范围为0.040 0~0.400 0 g/L,检出下限为0.002 1 g/L。该法简便、快速、准确,适合橙皮甙的质量检测。     

泽漆体外抗单纯疱疹病毒活性研究

[目的]研究泽漆水煎剂的体外抗单纯疱疹病毒作用。[方法]MTT法研究泽漆水煎剂对HSV致细胞病变效应的抑制作用。[结果]泽漆水煎剂对Vero细胞的CC50为(1.633±0.014)g/ml,对HSV-1没有抑制作用,对HSV-2具有明显的抑制作用,IC50为(0.558±0.001 4)g/ml,TI为2.78±0.37。[结论]泽漆水煎剂具有体外抗HSV-2作用,值得进一步开发。     

不同浓度叶面肥施肥对丹尼斯凤梨生理指标的影响

通过对丹尼斯凤梨叶筒注入不同浓度的叶面肥,对其生理指标的影响进行研究,结果表明:凤梨最适宜的叶面肥浓度:小型苗期为0.4~1.0g/L;中型苗期为1.4~2.0g/L。在这两种浓度范围内对凤梨叶筒施肥,与对照组的普通施肥长势接近。     

富硒酵母培养条件的优化

对1株经过DES(硫酸二乙酯)、紫外线和氯化锂复合诱变后的产朊假丝酵母进行富硒发酵条件的研究,通过单因素及正交试验,确定葡萄糖为培养基的最佳碳源,添加4%～5%时可得到最高生物量与硒含量;蛋白胨和尿素的复合氮源为最佳氮源.分别添加蛋白胨0.5%,尿素0.9%,辅助氮源酵母膏0.4%,硒 25 μg /mL,摇瓶(250 mL)装液量30 mL,转速200 r/min,培养温度 28 ℃,pH 5～6,培养时间40 h,此条件下酵母生物量达到7.942 g/L,总硒含量达到16 486.48 μg /L.     

木本菊的组织培养及快繁技术研究

以木本菊茎段为外植体,研究了木本菊的组织培养及快繁技术。结果表明,最佳芽分化培养基是MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/LIAA+1.0%糖,约60~70 d可诱导出丛生芽;在MS+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+1.0%糖的培养基上增殖速度最快,每升10 g的蔗糖浓度也最有利于芽的增殖;最适的扎根培养基是1/2 MS+0.1~0.3 mg/L NAA+1.0%糖或1/2 MS+0.05 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+1.0%糖,6~10 d可扎根,35~40 d可移栽。     

枸杞核桃乳工艺条件与配方

为了研究枸杞核桃乳的最佳工艺条件,参考报道的工艺条件选择枸杞汁的最佳提取条件,采用不同浓度的NaOH溶液和温度组合试验选择最佳的核桃仁去皮条件,采用不同成分乳化稳定剂的稳定性试验选择最佳的乳化稳定剂;为了研究枸杞核桃乳的最佳配方,采用正交试验研究枸杞汁用量、核桃乳用量、pH、白砂糖用量的最佳组合.结果表明,枸杞汁提取的最佳工艺条件为枸杞与水的质量比1∶4,提取温度60℃,提取时间4h;核桃仁的最佳去皮条件为选用5 g/L NaOH溶液在70～80℃下浸泡,在此条件下只需10～15 min就可达到皮仁的分离,而且仁色白,所加工的核桃乳色泽好;乳化稳定剂成分最佳为单甘酯0.75 g/L,蔗糖酯0.75 g/L,改性大豆磷脂0.25 g/L,三聚甘油酯0.25 g/L,羧甲基纤维素(CMC)0.25g/L,海藻酸钠0.25 g/L,黄原胶0.75 g/L,果胶0.75 g/L.枸杞核桃乳的最佳配方为枸杞汁用量18％,核桃乳用量20％,pH 4.6,白砂糖用量120g/L.