PCV2感染通过胞内Ca2+超载诱导仔猪腹股沟淋巴结及脾脏淋巴细胞凋亡

为探讨猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)感染仔猪的淋巴结和脾脏淋巴细胞内钙信号变化在细胞凋亡中的作用,选取19头PCV2抗原和抗体均为阴性的5周龄健康断奶仔猪,随机分成对照组(4头)和试验组(15头),试验组仔猪通过滴鼻接种PCV2,并于接种后14、21和35 d分别扑杀5头,对照组仔猪滴鼻同量PBS后当天扑杀。所有仔猪扑杀时均取腹股沟淋巴结及脾脏,流式细胞术检测细胞凋亡率,荧光分光光度法检测细胞内Ca2+浓度,孔雀绿比色测定法检测Ca2+-ATP酶的活性,荧光定量RT-PCR检测钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)mRNA转录水平。结果表明:所有接种病毒仔猪腹股沟淋巴结及脾脏细胞凋亡率均极显著高于对照组(P<0.01),Ca2+浓度均极显著高于对照组(P<0.01);接种病毒仔猪腹股沟淋巴结Ca2+-ATP酶活性在21 d时显著下降(P<0.05),脾脏中Ca2+-ATP酶活性在21 d和35 d时显著下降(P<0.05);腹股沟淋巴结CaMKⅡmRNA转录在整个试验过程中无明显变化,但脾脏中CaMKⅡmRNA在PCV2接种后21 d和35 d比对照组显著上调(P<0.05)。结论:细胞内Ca2+超载是PCV2感染引起仔猪淋巴结及脾脏淋巴细胞凋亡的重要机制。     

PCV2 WH株人工感染断奶仔猪复制多系统衰竭综合征

[目的]建立猪圆环病毒2型（PCV2）WH株人工感染断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）的动物模型,为探讨PCV2的致病机理及疫苗免疫效果评价奠定基础.[方法]将PCV2 WH株通过颈部肌注和滴鼻感染PCV2抗体阴性的7周龄仔猪,攻毒后第4、7d用钥孔血蓝蛋白（KLH）进行刺激,第7、11 d再腹腔注射巯基乙酸,同时设阴性对照组（单独KLH刺激）.攻毒后第35 d扑杀所有试验猪,观察其组织病变,并取肺脏、淋巴结组织提取病毒DNA,用PCR检测PCV2;取试验猪的肺脏、肝脏、脾脏、肾脏、淋巴结、心脏、膀胱等组织制作石蜡切片,进行HE染色和免疫组化分析.[结果]攻毒组仔猪的临床症状主要表现为发热、消瘦、被毛粗乱、皮肤苍白;攻毒后第35 d扑杀所有试验猪,剖检发现阴性对照组未出现病理变化,而攻毒组仔猪有明显病理变化,从其病变的肺脏、淋巴结、肾脏、脾脏、肝脏、心脏组织中均能检测到PCV2.HE染色结果显示,组织病理学变化主要为间质性肺炎、淋巴细胞缺失、间质性肾炎、肝脏肝窦单核巨噬细胞增生.免疫组化分析结果显示,肺脏支气管上皮细胞呈明显阳性,部分肺泡巨噬细胞可见阳性信号,主要位于胞浆内;肠系膜淋巴结均出现较强阳性信号,主要位于淋巴细胞的胞浆内;肾间质细胞呈明显阳性.[结论]用PCV2WH株攻毒联合KLH和巯基乙酸反复刺激断奶仔猪能成功复制出PMWS,为后续PCV2疫苗的免疫效果评价及PMWS发病机理研究提供了理想的动物模型.     

断奶仔猪多系统衰竭综合征淋巴结和脾脏病理组织学研究

[目的]为了对断奶仔猪多系统衰竭综合征淋巴结和脾脏病理组织学进行研究。[方法]通过流行病学调查和实验室诊断技术收集临床自然病例,对其脾脏、淋巴结采用HE染色,显微镜观察。[结果]结果表明,淋巴结的淋巴小结和脾脏的脾小体结构不完整,其内的B淋巴细胞数量减少,而脾脏的中央动脉周围淋巴鞘内的T细胞增多和淋巴小结的副皮质区增宽,其内的T淋巴细胞数量增多。这说明PCV-2感染猪主要影响机体细胞免疫。[结论]该研究为临床诊断和研究该病的致病机理及防治提供了科学依据。     

猪圆环病毒2型感染不会诱发猪肺泡巨噬细胞凋亡

将猪圆环病毒2型(PCV2)BF株经口、鼻接种40日龄健康普通仔猪,在接种后不同时相宰杀,收集肺泡巨噬细胞,用流式细胞术和琼脂糖凝胶电泳检测其凋亡现象,分析PCV2感染对猪肺泡巨噬细胞凋亡的影响。结果显示,在整个试验期内,与对照组相比,两种方法均未检测到攻毒组肺泡巨噬细胞出现凋亡上升现象,表明PCV2感染不会诱发猪肺泡巨噬细胞凋亡。     

外源性γ-氨基丁酸抵抗仔猪氧化应激的效果及机制

【目的】 研究外源性γ-氨基丁酸（GABA）抵抗仔猪氧化应激的作用效果,及海马神经元GABA受体调节凋亡信号通路在其中可能的介导作用,为GABA作为动物应激调节剂的应用提供科学依据。【方法】 基于成功构建的仔猪活体和大鼠海马神经元氧化应激模型,考察外源性GABA对仔猪血清及海马组织中氧化/抗氧化相关指标、仔猪日增重、脑海马GABA受体以及大鼠海马神经元中GABA受体及凋亡信号通路相关基因表达水平的影响。【结果】 低、中、高浓度的GABA灌喂组（LD+OS; MD+OS;HD+OS）仔猪血清的MDA含量均极显著低于氧化应激（OS）组(P<0.01),而GSH水平均极显著高于OS组(P<0.01),同时HD+OS 组仔猪血清T-AOC水平极显著高于OS组和对照组(P<0.01);且高浓度(100 mg·kg^-1 BW)GABA降低仔猪血清MDA含量和增加GSH水平的幅度均高于低浓度(20 mg·kg^-1 BW)和中浓度(60 mg·kg^-1 BW)GABA。因此,后续研究仅考察100 mg·kg^-1 BW GABA的作用效果及其抗氧化应激的机制。OS组仔猪0-7、8-14和0-28日龄的日增重极显著低于对照组(P<0.01),而HD+OS组0-7、8-14和0-28日龄仔猪的日增重极显著高于OS组(P<0.01);OS组仔猪15-28日龄的日增重显著低于对照组(P<0.05),HD+OS组15-28日龄的日增重极显著高于OS组(P<0.01)。以上结果表明,100 mg·kg^-1 BW GABA的灌喂极显著地增加了仔猪的日增重。对照组、OS组和HD+OS组在前、中、后期的腹泻率均无显著差异(P>0.05)。氧化应激组海马组织的MDA含量极显著高于对照组和HD+OS组 (P<0.01),而T-AOC和GSH的水平均极显著低于另外两组(P<0.01),表明GABA能提高仔猪海马组织抗氧化能力。HD+OS组的海马组织GABA_A和GABA_B受体水平均极显著高于对照组和氧化应激组(P<0.01),表明GABA提高了海马组织GABA_A和GABA_B的水平。氧化应激组脑海马Bcl-2蛋白水平显著低于对照组(P<0.05),Bax和Caspase-3蛋白水平极显著高于对照组(P<0.01)。HD+OS组的Bcl-2蛋白水平极显著高于氧化应激组（P<0.01）,Bax蛋白水平极显著低于氧化应激组（P<0.01）,Caspase-3蛋白水平显著低于氧化应激组（P<0.05）。与此一致的是,氧化应激组、GABA+OS+Picrotoxin组和GABA+OS+CGP54626组大鼠海马神经元的Bax和Caspase-3蛋白水平均显著高于对照组和GABA+OS组（P<0.05）,表明GABA缓解了氧化应激状态下海马神经元的损伤,而GABA受体抑制剂的添加阻挡了GABA的抗应激损伤作用。【结论】 GABA降低了仔猪海马的氧化应激水平,而GABA抗应激的作用机制可能与其降低凋亡蛋白基因的表达相关,而GABA_A和GABA_B受体介导了该过程。     

猪圆环病毒2型广东株全基因的克隆与序列分析

根据GenBank中发表的已知猪圆环病毒2型(Porcine Circovims-2,PCV-2)全基因序列,自行设计2对特异性引物,从2株接种疑似断乳仔猪多系统衰竭综合征(post-weaning muhisystemic wasting syndrome,PMWS)仔猪病料的PK-15细胞中提取基因组DNA,以此为模板,用PCR方法分2段扩增2个PCV-2广东株(GZ株和ZS株)的全基因序列．应用序列分析软件DNAstar,对所测2组PCV-2序列与GenBank中的国内外PCV-2毒株进行同源性比较,并绘制系统进化发生树,进行了序列分析．结果表明,2个PCV-2广东株全基因组皆为1767bp,2个毒株间全基因序列核苷酸同源性为77．0％,第一开放阅读框(ORF1)间的核苷酸同源性仅为57．7％,而第二开放阅读框(ORF2)间的核苷酸同源性却高达99．1％．ZS株和GenBank中国内外其他的PCV-2参考毒株序列的核苷酸同源性在95．7％-99．5％之间;而GZ株和其他PCV-2参考毒株序列的核苷酸同源性仅在74．2％-77．1％之间．     

猪繁殖与呼吸综合征病毒GXA毒株人工感染仔猪的病理学研究

[目的]探讨PRRSV-GXA毒株对断奶仔猪的致病性。[方法]将12头PRRSV/PCV2抗体和抗原阴性的健康仔猪随机分为感染组（9头）和对照组（3头）,感染组通过口服和肌肉注射方式接种PRRSV-GXA株细胞毒（4ml/头）,对照组接种无病毒的细胞培养液（4ml/头）。感染后第11、14和21天分别剖杀感染组3头和对照组1头,根据临床症状、病理学变化、特异性抗体水平以及病毒核酸等判断其致病性。[结果]仔猪感染PRRSV后第6～10天体温稍微升高,随后逐渐恢复至正常。早期出现短暂的精神沉郁,轻度厌食但没有出现典型临床症状。剖检的病理变化仅见于感染后第21天,有2头感染仔猪肺膈叶前缘出现小的局灶性间质性肺炎,镜检肺泡壁间质增宽,有多量单核细胞和淋巴细胞浸润。在感染后第9天检测到PRRSV特异性抗体,并随着时间呈上升趋势,感染后第21天达到较高值。在4头感染仔猪的肺脏及肺门淋巴结检测到病毒核酸,其中1头仔猪扁桃体也检测到病毒核酸。[结论]PRRSV-GXA毒株对仔猪的毒力较弱,但能刺激机体产生较高水平特异性抗体。     

猪圆环病毒2型间接ELISA检测方法的建立

根据GenBank中猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF2基因序列设计特异性引物,进行PCR反应,回收PCR产物,将其克隆入pMD18-T载体,再定向克隆到表达载体pET-32a中并转化大肠杆菌Rosetta,进行原核表达.表达产物经His-Bind蛋白纯化试剂盒纯化,平均浓度为1.10 mg/ml.以1.8 μg/ml蛋白包被酶标板,建立ELISA检测方法.建立的ELISA方法与北京世纪元亨公司试剂盒比较,两者检测结果符合率达85%以上.用该方法对常州某猪场36份母猪和156份10～160日龄猪群血清样品进行了检测,检测结果显示母猪阳性率为81.4%,仔猪阳性率随着日龄的增加而逐渐降低,之后由于受PCV-2的感染,阳性率逐渐升高.本试验建立的ELISA方法,具有较好的特异性、重复性和敏感性,可用于猪群PCV-2抗体的大规模检测.     

Effect of Dietary Supplementation with Hydrolyzed Wheat Gluten on Growth Performance,Cell Immunity and Serum Biochemical Indices of Weaned Piglets （Sus scrofa）

To investigate the effects of dietary supplementation with hydrolyzed wheat gluten (HWG) on growth performance, cell immunity and serum biochemical indices of weaned piglets, 160 crossed (Large White×Landrace) and weaned piglets were randomly divided into 4 treatments with 4 replicates of 10 piglets each. The piglets in each treatment were fed an experimental diet containing either 0 g kg-1 HWG (control group), 30 g kg-1 HWG (3% HWG group), 50 g kg-1 HWG (5% HWG group), or 2.5 g kg-1 glycyl-L-glutamine (0.25% Gly-Gln group). The results showed that the diarrhea rates in 3% HWG and 5% HWG groups were significantly lower than in control group from d 1 to 14 (P＜0.05), while the average daily gain (ADG) in each of two groups was increased (P＞0.05). When compared with control group, dietary supplementation with 3% HWG increased the ratio of CD4+:CD8+ and the ratio of serum albumin and globulin concentrations (A:G) on d 14 and 28, as well as the proliferation of T- and B-lymphocytes (P＞0.05) on d 28. In addition, on d 14 and 28, the A:G ratio in 5% HWG group was significantly higher than in control group (P＜0.05), while the ratio of CD4+:CD8+ increased slightly (P＞0.05). Interestingly, 0.25% Gly-Gln group had higher proportion of CD3+ (P＞0.05) and CD4+ (P＜0.05) on d 14 than control group, but growth performances of 0.25% Gly-Gln group were negatively affected at all experiment stages. These results suggested that HWG might improve the growth performance of piglets by strengthening cell immunity and decreasing the occurrence of diarrhea during the prophase after weaning.     

IL-18诱导卵巢乳头状浆液性囊腺癌裸鼠移植瘤的细胞凋亡

目的了解白细胞介素-18(IL-18)诱导卵巢癌细胞凋亡的可能性。方法采用荷人卵巢癌HO-8910细胞系的裸鼠皮下移植瘤模型,选择不同剂量(2.5、5、10mg/L)的IL-18进行腹腔内注射(治疗①组IL-18 2.5mg/L,治疗②组IL-18 5mg/L,治疗③组IL-18 10mg/L),对照组为磷酸盐缓冲液(PBS溶液),应用光学显微镜和透射电子显微镜观察形态学变化,Tunel法观察凋亡细胞的变化。结果治疗①组和治疗②组可见凋亡细胞,治疗③组见肿瘤细胞呈片状、条带状坏死区域增多,部分坏死组织呈均质红染无结构区域。IL-18可诱导卵巢癌细胞发生凋亡,不同剂量组的细胞凋亡指数(AI)均明显高于对照组(P<0.01),治疗②组的AI又明显高于治疗①组(P<0.01),治疗①组和治疗③组间差异则无统计学意义(P>0.05)。结论IL-18有诱导卵巢上皮性癌细胞凋亡的作用,这可能是其抗癌机理之一。     

苦参碱对断奶仔猪腹泻胃肥大细胞的影响初报

通过在日粮中添加苦参碱,研究其对断奶仔猪腹泻及胃肥大细胞的影响,以揭示其防治断奶仔猪腹泻机理.结果表明:苦参组腹泻率(0)显著低于对照组(75％)(P＜0.05);苦参组胃贲门区( 108.7±10.1)个/cm2和胃幽门区黏膜肥大细胞数量(126.7±12.6)个/cm2极显著高于对照组(P＜0.01),苦参组胃底部...     

猪圆环病毒2型·猪繁殖与呼吸综合症病毒混合感染及继发猪链球菌2型感染的诊断与控制

[目的]为养猪生产中猪病的防治提供依据。[方法]通过临床检查、PCR和RT—PCR检测,对猪场外购生长猪、自繁母猪及哺乳仔猪先后发生猪圆环病毒2型和猪繁殖与呼吸综合症病毒混合感染的疑似病例进行分析。[结果]确诊为猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合症病毒混合感染,继发猪链球菌2型感染。通过采取隔离、淘汰、消毒、药物防治等综合措施,疫情得到有效控制。[结论]该研究可为类似猪病的控制提供借鉴。     

PCV2感染对猪肺泡巨噬细胞Fc受体数量和吞噬功能的影响

将猪圆环病毒2型(PCV2)BF株经口、鼻接种40日龄健康普通仔猪,在接种后不同时间宰杀,收集肺泡巨噬细胞(PAM),同时设立对照组。用EA花环试验测定Fc受体数目,用吞噬鸡红细胞试验测定吞噬功能,来分析PCV2感染对PAM某些生物学活性的影响。结果显示,PAM表面Fc受体数和吞噬鸡红细胞数的变化规律一致,与对照组相比,两者数量在接种后3 d时下降至最低,之后回升,14 d时基本恢复正常。本研究表明,PCV2感染可引起PAM吞噬和清除病原的能力出现短暂下降。     

IBDV强毒株感染SPF鸡后法氏囊淋巴细胞的凋亡及调控机制

为探究IBDV强毒BC6 / 85株感染SPF鸡后 1～ 9d内法氏囊淋巴细胞中Bcl 2和Bax蛋白的动态表达与淋巴细胞凋亡的关系 ,通过透射电镜观察及TUNEL法检测凋亡的淋巴细胞 ,用免疫组织化学方法检测Bcl 2和Bax蛋白。研究结果表明 :感染后 3～ 5d可见到大量凋亡的淋巴细胞 ,Bcl 2和Bax蛋白表达量显著高于同时点的对照组 (P <0 0 1) ;Bcl 2 /Bax(Bcl 2与Bax比率 )显著低于同时点的对照组 (P <0 0 1)。BC6 / 85株感染SPF雏鸡3～ 5d后法氏囊淋巴细胞会发生大量凋亡 ,Bcl 2 /Bax能准确反映淋巴细胞的凋亡程度。     

云南地区部分猪场猪呼吸道疾病综合症（PRDC）患病猪群中PRRSV，PCV-2，CSFV，PRV混合感染调查

 针对云南省不同地区不同季节猪呼吸道疾病综合征进行流行病学调查,根据其临床特征,在不同规模养殖场共采集1164份血清样品,利用ELISA和RT-PCR方法检测其猪瘟抗原CSFV,猪繁殖与呼吸综合征抗原PRRSV,猪伪狂犬病PRV gE抗体及猪圆环病毒2型PCV-2特异抗体。结果表明：各季节和不同生长阶段猪群存在一种及两种以上的病毒混合感染,四重感染相对较少。从全年看单独感染占39.10%,PCV-2感染率最高,其次是PRV,PRRSV和CSFV;二重感染占26.13%,以PCV-2+PRV最常见,其次是PCV-2+ PRRSV、PRV+PRRSV;三重感染占8.05%,PCV-2+ PRRSV+PRV最常见;有四重感染出现,仅占1.57%。从季节来看,春季和夏季混合感染最高,分别为76.53%和60.74%,冬季和秋季的混合感染率分别为59.50%和53.55%。从年龄和性别看,育肥猪的混合感染率高于仔猪,分别为68.66%和61.11%,种公猪的感染率高于母猪,分别为70.00%和55.51%。说明4种病毒有单独感染或混合感染,推测其中PCV-2在混合感染中可能充当免疫抑制的角色,混合感染使PRDC症状更明显,死亡率增高。     

猪繁殖与呼吸综合征和猪2型圆环病毒病二联核酸疫苗的构建及其免疫效力

试验以猪繁殖与呼吸综合征（PRRSV）的ORF5和猪圆环病毒2（PCV-2）的ORF2为目的基因,以pIRES-neo为表达载体,构建了PRRSV—PCV-2二联核酸疫苗,并对其免疫原性进行了初步的研究,为研制安全有效的疫苗防制猪繁殖与呼吸综合征和猪2型圆环病毒病提供基础。     

加酶益生素对哺乳及断奶仔猪生产性能和腹泻频率的影响

采用在子饲养试验的方法，探讨益生不对哺乳对仔猪进行早期接种，以及哺乳猪料和断奶仔猪料中添加加酶益生不后对生产性能和腹泻率的影响。试验结果表明：试验组哺乳仔猪日增重比对照组提高15．94％（P＜0．01），试验组断奶仔猪日增重比对照组提高8．75％（P＞0．05）；哺乳仔猪腹泻频率低于对照组（P＜0．05）断奶仔猪腹泻频率比对照组低46．56％（P＜0．01）。哺乳仔猪0－7d涂抹益生素接种，哺乳断奶全程使用加酶益生素可有效提高哺乳仔猪日增重，降低断奶仔猪腹泻频率。     

鸡传染性支气管炎疫苗对雏鸡的多重免疫研究

将 2 0 0只 1日龄健康雏鸡随机分为 6组 ,第 1～ 5组分别用 H1 2 0 、H52 和 IB二价油佐剂灭活苗进行单独或多重组合的免疫接种 ,于接种后每隔 7d测 1次 HI抗体 ,并于第 73天用肾型 IBV强毒攻击 ,观察各组的保护率 ,第 6组不免疫作为对照。结果显示 ,H1 2 0 弱毒苗单独免疫组、H1 2 0 +IB二价油佐剂灭活苗组、H1 2 0 +H52 弱毒苗组、IB二价油苗 1次免疫组和 IB二价油苗 2次免疫组的保护率分别为 5 7.1% ,85 .8% ,6 7% ,83.3%和 80 % ,非免疫对照组保护率为 5 0 %。试验结果表明 ,H1 2 0 与 H52 弱毒苗对肾型 IBV的保护力弱 ,H1 2 0 +IB二价油佐剂灭活疫苗与 IB二价油佐剂灭活苗 1次和 2次免疫均可获得对肾型 IBV较高的保护率 ,且 H1 2 0 与 IB二价油佐剂灭活苗同时免疫可获得长时间的保护性抗体     

甘露寡聚糖和粪链球菌对雏鸡和哺乳仔猪血液SOD和GSH-px活性的影响

试验一设 ４ 组,其中Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组分别在雏鸡每千克日粮中添加２ ｇ 甘露寡聚糖、０．０６ ｇ 粪链球菌剂和２ ｇ 甘露寡聚糖＋ ０．０６ ｇ 粪链球菌剂,对照组为基础日粮．试验期为６ 周．结果表明,试验Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组雏鸡血液中 Ｓ Ｏ Ｄ 和 Ｇ Ｓ Ｈ ｐｘ 活性均极显著高于对照组（ Ｐ＜ ０．０１）, Ｓ Ｏ Ｄ 含量分别提高１１．５％ 、１２．１％ 和１４．０％ , Ｇ Ｓ Ｈ ｐｘ 含量分别提高 ９．６％ 、８．１％ 和９．８％ ;而各试验组之间差异不显著（ Ｐ＞ ０．０５）．试验二在集约化猪场中挑选胎龄、产仔时间一致的初生仔猪６ 窝,每窝选择体重一致、健康仔猪６ 头,共３６ 头,分 ３ 组,每组１２ 头．从出生第２ 天开始,试验Ⅰ组每头仔猪每次灌服２５０ ｍ ｇ 甘露寡聚糖,试验Ⅱ组每头仔猪每次灌服１ ｇ 粪链球菌剂,对照组仔猪灌服生理盐水,隔天灌服１ 次,试验期为 ３０ ｄ．结果表明,口服甘露寡聚糖和粪链球菌均可极显著地提高哺乳仔猪血液中 Ｓ Ｏ Ｄ 和 Ｇ Ｓ Ｈ ｐｘ 活性（ Ｐ＜ ０．０１）, Ｓ Ｏ Ｄ 含量分别提高了１０．４％ 和６．４％ , Ｇ Ｓ Ｈ ｐｘ 含量分别提高了２４％ 和１４．５％ ;试验Ⅰ组和Ⅱ组之间差异不显著（ Ｐ＞ ０．０５）．２ 个试验结果说明     

圆环康防治猪圆环病毒2型感染的效果观察

根据PCV-2病毒的生物学特性和致病特点,研制了用于防治PCV-2感染的中草药方剂——圆环康。结果表明:圆环康处理对PCV-2病毒具有明显的抑制作用。临床用于治疗早中期病猪,或混合、继发感染症状不明显的病猪及预防用药,猪场的平均治愈率达90%以上,且治愈后不反弹。而西药粉剂组治愈率平均为78.1%,不治疗组的自愈率为24.2%。对于存在混合或继发感染病情严重猪群,在采用圆环康的同时,配合干扰素、白介素、免疫球蛋白或转移因子等进行治疗,疗效更好。