抗猪SIgA单克隆抗体的研制

采用饱和硫酸铵盐析、SephadexG-200柱层析和离子交换柱层析技术，从猪初乳中提纯分泌型IgA(SIgA)。经SDS-PAGE电泳鉴定，纯化的SIgA达到电泳纯。以此纯化的SIgA，采用长程免疫法免疫BALB／c小鼠，取4次免疫后的脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞用PEG-1500进行细胞融合，第1次融合率为79．7％，第2次融合率为60．3％。建立间接ELISA，用于检测杂交瘤细胞上清中的单克隆抗体．初检阳性率分别为4．1％、16．8％。经2次亚克隆反复筛选获得了2株能稳定分泌抗猪SIgA单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为CA6、5D4。ELISA和Western-blotting证实，所获得的单抗能特异性针对SIgA。CA6、5D4经反复冻存、复苏及多次传代，仍能分泌高效价抗体．CA6分泌抗体属IgM、κ型，而5D4分泌抗体属IgG1、κ型。     

抗鸭疫里氏杆菌OMP单克隆抗体间接ELISA筛选方法的建立

鸭传染性浆膜炎病原为鸭疫里氏杆菌(riemerella anatipestifer,RA).目前世界上报道的RA血清型共有21型,且血清型有变化和增多的趋势,RA各血清型间无交叉免疫保护作用[1-3].许多研究表明:RA的抗原类型为荚膜抗原和菌体抗原,血清型不同,荚膜及菌体表面免疫原蛋白也不相同.苏敬良等通过超速离心法提取了RA其外膜蛋白并研究了其免疫原性,认为44 kD的外膜蛋白是其主     

PCV2 WH株人工感染断奶仔猪复制多系统衰竭综合征

[目的]建立猪圆环病毒2型（PCV2）WH株人工感染断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）的动物模型,为探讨PCV2的致病机理及疫苗免疫效果评价奠定基础.[方法]将PCV2 WH株通过颈部肌注和滴鼻感染PCV2抗体阴性的7周龄仔猪,攻毒后第4、7d用钥孔血蓝蛋白（KLH）进行刺激,第7、11 d再腹腔注射巯基乙酸,同时设阴性对照组（单独KLH刺激）.攻毒后第35 d扑杀所有试验猪,观察其组织病变,并取肺脏、淋巴结组织提取病毒DNA,用PCR检测PCV2;取试验猪的肺脏、肝脏、脾脏、肾脏、淋巴结、心脏、膀胱等组织制作石蜡切片,进行HE染色和免疫组化分析.[结果]攻毒组仔猪的临床症状主要表现为发热、消瘦、被毛粗乱、皮肤苍白;攻毒后第35 d扑杀所有试验猪,剖检发现阴性对照组未出现病理变化,而攻毒组仔猪有明显病理变化,从其病变的肺脏、淋巴结、肾脏、脾脏、肝脏、心脏组织中均能检测到PCV2.HE染色结果显示,组织病理学变化主要为间质性肺炎、淋巴细胞缺失、间质性肾炎、肝脏肝窦单核巨噬细胞增生.免疫组化分析结果显示,肺脏支气管上皮细胞呈明显阳性,部分肺泡巨噬细胞可见阳性信号,主要位于胞浆内;肠系膜淋巴结均出现较强阳性信号,主要位于淋巴细胞的胞浆内;肾间质细胞呈明显阳性.[结论]用PCV2WH株攻毒联合KLH和巯基乙酸反复刺激断奶仔猪能成功复制出PMWS,为后续PCV2疫苗的免疫效果评价及PMWS发病机理研究提供了理想的动物模型.     

抗鸡IgG单克隆抗体及其酶标记抗体的研制

鸡源疾病种类繁多,一般鸡场均接种过菌(疫)苗,鸡血清中IgG水平的测定,已是疫苗免疫效果评定和体液免疫研究的常用指标.抗鸡IgG的单克隆抗体与常规免疫血清相比,具有特异性高、成分均一等优点.     

抗新城疫病毒血凝素单克隆抗体的研制

新城疫是由新城疫病毒(NDV ) 引起的一种主要侵害鸡和火鸡的急性、高度接触性传染病, 危害极其严重.根据流行特点、临床表现和病理变化可对典型性新城疫作出诊断,但对非典型性新城疫的诊断及该病的确诊需借助于病毒的分离鉴定、血清学方法、直接病毒抗原检测等实验室手段.研制抗NDV单抗将为NDV的检测发挥重要作用,曹殿军等[1]已制备出抗新城疫病毒糖蛋白单克隆抗体,但抗NDV血凝素单抗国内少有报道,鉴此,本实验室用PEG融合技术,研制出分泌抗NDV血凝素蛋白杂交瘤细胞株.     

抗猪IgG单克隆抗体的研制

采用饱和硫酸铵盐析、离子交换柱层析技术从猪血清中提纯IgG.经SDS-PAGE电泳鉴定,纯化的IgG达到电泳纯.以此纯化的IgG,采用长程免疫法免疫BALB/c小鼠,取4次免疫后的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞用PEG-1500进行细胞融合,融合率为90.3%.建立间接ELISA,用于检测杂交瘤细胞上清中的单克隆抗体.初检阳性率为13.9%.经2次亚克隆反复筛选获得了2株能稳定分泌抗猪IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为6B4、4B8.ELISA证实所获得的单抗是特异性针对IgG,6B4、4B8经反复冻存,复苏及多次传代,仍能分泌高效价抗体,分泌抗体均属IgG1、κ型.本研究所获得的单克隆抗体将对检测猪抗体水平及IgG提纯发挥重要作用.     

鸭疫里默氏杆菌培养特性的研究

鸭疫里默氏杆菌标准1型和2型与野毒株进行各种培养基培养特性的对比,并利用标准1型和2型菌株免疫的实验鸭鲜血制备成鸭疫里默氏杆菌鲜血平板,建立鸭疫里默氏杆菌鲜血平板实验室初步鉴别诊断法。结果表明:不同来源的鸭疫里默氏杆菌在显微形态、生化试验略有不同;不同培养基上鸭疫里默氏杆菌表现出不同的生长速度,不同来源的鸭疫里默氏杆菌在固体培养基上的菌落形态大小、显微形态略有不同;鸭疫里默氏杆菌鲜血平板能对标准1型、2型、鸭疫里默氏野毒株、大肠杆菌、巴氏杆菌及疑似里氏杆菌进行实验室的初步鉴别诊断。     

猪圆环病毒2型CAP蛋白B细胞表位预测与分析

基于PCV2 CAP蛋白的氨基酸序列,采用Kyte-Doolittle的亲水性方案、Emini方案、Karplus方案Jameson-wolf抗原指数方案,辅以对PCV2 CAP蛋白的二级结构柔性区域分析,并结合吴玉章氨基酸抗原指数计算方法预测CAP蛋白的B细胞表位。结果表明,最有可能的B细胞优势表位位于CAP蛋白N端第4~18,23~28,32~41,57~64,96~103,175~182区段和第224~233区段。本研究用多参数预测PCV2 CAP蛋白的B细胞表位,为多肽疫苗的设计提供理论依据。     

抗猪IgG单克隆抗体的研制

采用饱和硫酸铵盐析、离子交换柱层析技术从猪血清中提纯IgG. 经SDS-PAGE电泳鉴定, 纯化的IgG达到电泳纯. 以此纯化的IgG, 采用长程免疫法免疫BALB/c小鼠, 取4次免疫后的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞用PEG-1500进行细胞融合, 融合率为90.3%. 建立间接ELISA, 用于检测杂交瘤细胞上清中的单克隆抗体. 初检阳性率为13.9%. 经2次亚克隆反复筛选获得了2株能稳定分泌抗猪IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞株, 命名为6B4、 4B8. ELISA证实所获得的单抗是特异性针对IgG, 6B4、 4B8经反复冻存, 复苏及多次传代, 仍能分泌高效价抗体, 分泌抗体均属IgG1、κ型. 本研究所获得的单克隆抗体将对检测猪抗体水平及IgG提纯发挥重要作用.