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为了实现牛支原体P33蛋白在大肠杆菌中的高效表达,试验在不改变P33蛋白氨基酸序列的情况下,根据GenBank发表的P33基因序列(登录号为AIA33909.1)设计并合成特异性引物,利用PCR法扩增P33基因,进行双酶切并将基因片段克隆到pET28a(+)载体中,构建重组质粒pET28a(+)/P33,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导后进行原核表达,再利用His-tag镍柱纯化P33重组蛋白,并对纯化后的重组蛋白进行鉴定。结果表明:成功扩增得到牛支原体P33基因,其核苷酸序列长度为710 bp,重组菌株在温度为30℃、以0.5 mmol/L IPTG诱导12小时时,P33蛋白表达量最高;经His-tag镍柱纯化后P33蛋白在33 ku处有明显的蛋白印迹条带,与预期大小相符。说明成功实现了在大肠杆菌中表达牛支原体P33重组蛋白。 相似文献
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重庆市猪群H1亚型猪流感血清学调查 总被引:1,自引:0,他引:1
为了解我市猪流感流行状况,从重庆市59个区县58个规模场采集了1056份猪血清,205个散养户采集了768份猪血清,采用HA—H1方法进行H1亚型猪流感抗体检测,结果从21个规模猪场检出H1亚型猪流感,阳性率介于5.33%~81.82%,平均阳性率为7.82%;散养户猪血清H1亚型猪流感介于5.0%~35%,平均阳性率为5.26%。提示H1亚型猪流感在我市部分或局部地区猪流感感染相当高,且目前大部分处于隐性感染状态,应引起高度重视。 相似文献
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CpG-DNA的功能及应用前景 总被引:1,自引:1,他引:0
在细菌及病毒的 DNA中普遍存在的以及人工合成的非甲基化的 Cp G基序能通过 Toll样受体 9能直接活化 B细胞 ,诱导其增殖并抑制其凋亡 ;能促进免疫球蛋白和 IL -6、IL -1 0以及 IL -1 2等细胞因子分泌 ;增加 MHCII类分子和 B7共刺激分子的表达 ;激活单核巨噬细胞及树突状细胞分泌各种 Th1型细胞因子和趋化因子 ;促进淋巴细胞增殖 ,诱发体液和细胞介导的免疫反应。Cp G-DNA还可以间接活化细胞毒性T细胞 ,促进 Ig G2 a及 Ig M的优势表达 ,从而转换免疫反应的类型 (Th 到 Th ) ,因此 Cp G-DNA作为一类有希望的免疫增强剂在增强疫苗免疫效果和抗感染免疫中都有潜在的应用前景。 相似文献
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柔嫩艾美耳球虫感染雏鸡LPO含量和抗自由基酶活性的动力学 总被引:2,自引:0,他引:2
通过测定柔嫩艾美耳球虫 (Eimeria tenella)感染鸡的盲肠、肝脏、脾脏和法氏囊组织中脂质过氧化物 (L PO)含量和超氧化物歧化酶 (SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶 (GXH- Px)及过氧化氢酶 (CAT)活性 ,研究雏鸡感染球虫后机体内自由基生成和抗自由基反应。结果表明 ,雏鸡感染 E.tenella后 ,盲肠、肝脏和脾脏组织中的 L PO含量在感染后显著 (P<0 .0 5 )或极显著 (P<0 .0 1)升高 ,T- SOD、Mn- SOD、Cu、Zn- SOD、GSH- Px和 CAT活性水平不同程度下降。试验结果说明在 E.tenella感染后 ,鸡体内的氧自由基生成反应加剧 ,氧自由基参与了球虫的致病过程。 相似文献
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为了获得纯度高、活性好的金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA),取改良营养肉汤培养基上生长18h的金黄色葡萄球菌培养物,采用溶菌酶裂解细胞壁释放蛋白质,用磷酸盐缓冲溶液(PBS)溶解后转入透析袋透析,透析物用小鼠IgG-sephrose4FF亲和层析柱纯化,采用二喹啉甲酸(BCA)法测蛋白质浓度。结果表明:SPA浓度为0.933mg/mL;聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果在42ku处有明显的电泳条带,蛋白免疫印迹(Western-blot)进一步证实小鼠IgG与SPA在42ku处发生较强的反应;以SPA为抗原,提纯的小鼠IgG为样品进行酶联免疫吸附试验(ELISA)检测,结果小鼠IgG稀释到1∶25600时仍能与SPA结合,说明提取的SPA活性较高。 相似文献
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