黄芩悬浮细胞培养过程中黄芩苷与蛋白质含量相关性分析

以黄芩悬浮细胞为材料研究其生长过程中蛋白质含量变化规律及与黄芩苷次生合成之间的关系。结果表明,在黄芩悬浮细胞生长周期(21 d)内,蛋白质含量的高低与黄芩苷的积累呈正相关。在黄芩悬浮细胞生长周期的前6 d,悬浮细胞处于潜伏期,蛋白质含量低水平表达,黄芩苷合成缓慢;6~18 d,悬浮细胞处于生长期,蛋白质的含量高水平表达,合成速率较快,这期间黄芩苷也迅速合成;18~21 d,悬浮细胞进入稳定期,此时蛋白质含量处于稳定期,黄芩苷合成也几乎停止。同时采用L9(34)正交试验研究培养基中6-BA、碳源、氮源、p H的配比对蛋白质含量表达的影响,结果表明碳磷源(NH4+)对蛋白质的表达影响最大。     

不同植物生长调节剂、碳源对黄芩细胞生长及次生代谢产物的影响

本文着重研究了不同植物生长调节剂和碳源对黄芩愈伤组织生长及黄芩素、黄芩苷合成的影响。结果表明．适宜浓度的IAA、NAA、6-BA、2,4-D和蔗糖、葡糖糖、麦芽糖均促进了黄芩细胞的生长。4种植物生长调节剂中IAA、NAA较显著地促进了黄芩苷、黄芩素含量的提高。碳源中仅有40g·L^-1蔗糖的添加显著提高了愈伤组织中黄芩苷含量。3种碳源对促进黄芩素含量提高的影响顺序依次是：蔗糖〉葡糖糖〉麦芽糖。若仅以黄芩苷和黄芩素含量为单独评价指标,则分别选用0．5mg·L^-1·6-BA或1．0mg·L^-1 IAA、0．2mg·L^-1或3．0mg·L^-1NAA较合适;若综合考虑黄芩愈伤组织生长、黄芩苷和黄芩素含量,则3．0mg·L^-1 NAA最为合适．此时愈伤组织干重增殖倍数为4．98,黄芩苷产量为4．81g·L^-1,黄芩素产量为2．72g·L^-1。     

褐变抑制剂对黄芩愈伤组织褐变及次生代谢产物的影响

研究了不同褐变抑制剂对黄芩愈伤组织继代培养中褐变、生长以及黄芩愈伤组织次生代谢产物黄芩苷、黄芩素含量的影响。结果表明：在MS＋0．5mg／L2,4-D＋1．0mg／L6-BA继代培养基中分别添加1．0g/L植酸、10mg／L抗坏血酸、2．0g/L聚乙烯吡咯烷酮能有效抑制黄芩愈伤组织褐变,促进其生长。在综合考虑愈伤组织的褐变率、生长增殖倍数（干重）基础上,以黄芩苷产量为指标,添加10mg／L抗坏血酸＋1．0g/L植酸组合效果最好;以黄芩素产量为指标,添加1．0g/L植酸效果最好。     

怀牛膝悬浮培养细胞生理生化特性研究

为了研究怀牛膝悬浮培养细胞生理生化特性,对细胞生长曲线、多糖含量、可溶性蛋白含量、POD活性、SOD活性、培养液p H值、电导率进行了测定。结果表明:细胞生长曲线呈"S"型,可分为延迟期(0~6 d)、指数生长期(6~12 d)和缓慢生长期(12~21 d)3个阶段;多糖含量在6 d达到第1个高峰后即呈现下降趋势,在15 d达到第2个高峰(比第1个峰值低);可溶性蛋白含量在9 d达到峰值;POD活性在15 d达到高峰;SOD活性在12 d达到峰值,之后下降并维持在一定水平;悬浮培养液的p H值先下降后上升;培养液的电导率在12 d降至最低点,与细胞生长呈现一定的相关性。怀牛膝悬浮培养细胞生理生化特性的变化存在一定规律性。     

不同理化因子对黄芩悬浮细胞系的影响

采用植物组织培养手段建立了稳定的黄芩细胞悬浮系,通过正交试验筛选出最佳的MS液体培养基为:NH4+/NO3-30/40 mmol/L,Ca2+3 mmol/L,pH值5.4,蔗糖3%.研究了碳源、肌醇、激素、水解酪蛋白(CH)和水解乳蛋白(LH)对悬浮系中黄苓甙含量的影响.结果表明:复合碳源、较低浓度肌醇对悬浮细胞系中黄芩甙的积累和胞外释放具有促进作用,2.0 mg/L NAA+0.5 mg/L Kt最有利于悬浮系中黄芩甙的积累;水解酪蛋白和水解乳蛋白对黄芩甙的生成没有促进作用,反而起到了一定的抑制效应.     

黄芩面膜制备工艺研究

目的"以黄芩中黄芩苷为原料,研制具有抗氧化、保湿活性的面膜。方法:采用水煎煮法提取黄芩苷,以甘油、单甘酯、蓖麻油为影响因素,以保湿率为考察指标,按正交实验设计优化黄芩面膜配方。结果:黄芩面膜的最佳配方为:甘油6 g,单甘酯3 g,蓖麻油12 g,此条件下所得面膜保湿率为87.72%,对DPPH自由基的抑制率较高。结论:黄芩面膜的配方合理,制备工艺可行,保湿性良好,抗氧化作用较强,外观、p H值等符合行业标准。     

黄芩苷微生物转化菌的筛选鉴定及发酵条件优化

通过罗尔夫青霉(Penicillium rolfsii)发酵培养基和发酵条件优化,来提升黄芩苷转化率。采用单因素方法对氮源、发酵接种量、初始pH发酵时间、发酵温度等因素进行考查,在此基础上进行L_(16)(4~5)正交试验优化。得到的优化发酵条件是黄芩粉20 g/L,(NH_4)_2SO_4 0.6 g/L,KH_2PO_4 0.2 g/L,醋酸钠0.1 g/L,维生素C 0.1 g/L,MgSO_4 0.1 g/L,pH 5.0,料液比为1∶30,接种量10%,装液量80 mL/250 mL,发酵温度35℃,发酵时间6 d,转速180 r/min。在最优条件下,黄芩素含量达到1.83 mg/mL。     

继代周期对霍山石斛类原球茎悬浮培养动力学的影响

为解决霍山石斛类原球茎液体悬浮培养类原球茎生长缓慢和代谢水平低下的问题,取不同继代周期(20、30、40、50d)的类原球茎进行培养,在整个生长周期中测定了培养基中碳、氮、磷酸盐的消耗,胞内还原糖、氮及磷的积累情况,并分析了类原球茎增殖和多糖合成情况.继代周期在20～40d的类原球茎具有良好的生长状态和多糖合成能力,其中30d最佳.继代周期为30d的类原球茎生理活性较强,其吸收碳源、氮源、磷酸盐的速度最快,细胞的比生长速率最大,其值为0.043,培养36d时,生物量和多糖产量都最大.分别为470.0g/L和1.92 g/L.以继代周期为30 d的类原球茎进行培养时,最有利于细胞生长和多糖的合成.     

光质对黄芩毛状根生长及黄芩苷含量的影响

[目的]考察光质对黄芩毛状根生长和黄芩苷生物合成的影响。[方法]采用白光和蓝光(400～480 nm)照射(12 h/d)以及黑暗条件培养黄芩毛状根,并采用高效液相色谱法测定黄芩苷含量,考察光质对黄芩毛状根生长及黄芩苷含量的影响。[结果]光质对黄芩毛状根生长和黄芩苷含量均有影响;白光和蓝光培养的毛状根生物量无明显差别,且白光抑制黄芩苷的积累;黑暗条件下培养的毛状根生物量和黄芩苷含量均高于蓝光与白光条件培养的毛状根。[结论]黑暗更适合黄芩毛状根生长与黄芩苷合成。     

培养动力学的影响

 为解决霍山石斛类原球茎液体悬浮培养类原球茎生长缓慢和代谢水平低下的问题,取不同继代周期（20、30、40、50d）的类原球茎进行培养,在整个生长周期中测定了培养基中碳、氮、磷酸盐的消耗,胞内还原糖、氮及磷的积累情况,并分析了类原球茎增殖和多糖合成情况。继代周期在20~40d的类原球茎具有良好的生长状态和多糖合成能力,其中30d最佳。继代周期为30d的类原球茎生理活性较强,其吸收碳源、氮源、磷酸盐的速度最快,细胞的比生长速率最大,其值为0.043,培养36d时,生物量和多糖产量都最大,分别为470.0g/L和1.92 g/L。以继代周期为30 d的类原球茎进行培养时,最有利于细胞生长和多糖的合成。     

土人参愈伤组织诱导及细胞悬浮培养研究

[目的]建立土人参愈伤组织的诱导、增殖继代培养及其细胞悬浮培养的技术体系。[方法]研究不同植物激素组合对叶片、茎段愈伤组织诱导的影响;采用液体振荡培养法测定叶片愈伤组织细胞悬浮生长曲线。[结果]叶片最易诱导产生愈伤组织,最佳诱导、增殖培养基为MS＋2,4-D1.0 mg/L＋NAA0.5 mg/L＋6-BA0.5 mg/L（pH5.8）。由叶片愈伤组织建立的细胞系生长呈＂S＂型曲线,最适继代周期为15 d。[结论]以叶片为外植体经愈伤诱导、增殖培养可建立良好的细胞悬浮系。     

台湾金线莲细胞悬浮培养及其培养条件优化的研究

[目的]研究台湾金线莲细胞悬浮培养B5培养基的配方.[方法]以新鲜叶片为材料,经过初代培养、固体培养和继代培养,建立悬浮细胞培养体系,正交设计试验优化培养基配方.[结果]B5培养基中,影响悬浮培养因素的大小依次为大量元素浓度、6-BA、2,4-D、蔗糖、IAA.[结论]选用2％蔗糖、0.5 mg/L 6-BA、0.2 mg/L IAA、0.6 mg/L 2,4-D、1/2浓度大量元素的B5培养基培养悬浮细胞,15 d后吸光度达4.425.     

百蕊草愈伤组织培养影响因素研究

[目的]对影响百蕊草愈伤组织培养的因素进行研究。[方法]以百蕊草幼嫩枝条和叶片为外植体,研究不同浓度6-BA、NAA、2,4-D或其组合,碳源以及pH等因素对百蕊草愈伤组织生长的影响。[结果]3种植物生长调节剂和碳源对愈伤组织的生长都有促进作用,对愈伤组织诱导生长的培养基最佳组合为MS+6-BA 1 mg/L+NAA 0.15 mg/L+2,4-D 0.1 mg/L,碳源中蔗糖显著促进了百蕊草愈伤组织的增长,以30 g/L的蔗糖为最佳;pH 5.8~6.0有利于愈伤组织的诱导和生长。[结论]该研究为后续研究百蕊草细胞悬浮培养体系的建立提供材料。     

几种理化因子对青钱柳悬浮细胞生长的影响

为了利用细胞悬浮培养技术生产青钱柳细胞及其代谢物质以解决青钱柳资源稀缺问题,采用单因素和正交试验优化青钱柳细胞悬浮培养条件。结果表明,在供试的WPM、MS、1/2MS、B5、N6、DKW、White7种培养基中,WPM、MS、B5均有利于悬浮细胞的生长;有利于悬浮细胞生长的碳源是果糖和蔗糖;2,4-D是影响青钱柳悬浮细胞生长的关键因子,对细胞生长影响极显著,最佳激素组合为0.4mg/L 2,4-D+0.4mg/LNAA+0.4mg/L KT+0.4mg/L 6-BA;通过L9(34)正交试验得出几种物理因子对悬浮细胞生长的影响效应排序为接种量>装液量>转速>pH,最佳条件组合为接种量80g/L、装液量40%、摇床转速115r/min、pH 5.0。     

茄子愈伤组织诱导及悬浮细胞培养（英文）

[目的]建立茄子愈伤组织悬浮细胞培养体系。[方法]以三月茄为试验材料,利用正交设计筛选适合茄子愈伤组织诱导、继代保存以及悬浮培养的培养基并测定悬浮培养过程中细胞生长状况。[结果]适宜茄子愈伤组织诱导的培养基为MS＋6-BA（0.2 mg/L）＋NAA（0.2 mg/L）;适宜继代保存的培养基为MS＋6-BA（0.2 mg/L）＋NAA（0.2 mg/L）＋KT（0.1 mg/L）;适宜悬浮细胞培养的培养基为MS＋NAA（0.4mg/L）＋6-BA（0.2 mg/L）液体培养基。茄子悬浮培养细胞生长呈S形曲线,其中前3 d为起始期,3~7 d处于对数生长期,7~8 d为静止期;8~11 d为衰退期。悬浮细胞密度随着培养时间的延长增长,在培养第7天达到最高值,约3.8×105个/ml.随后细胞数量迅速减少。起始期细胞活力最高。茄子悬浮细胞在MS＋NAA（0.4 mg/L）＋6-BA（0.2 mg/L）液体培养基上生长良好,其分裂指数最大达4.1%。[结论]茄子悬浮细胞培养体系为茄子生物技术研究提供了一条途径,可应用该体系进行遗传转化等方面的研究。     

山药零余子组织培养及培养过程中过氧化物酶活性研究

对铁棍山药零余子进行离体培养,研究其在脱分化和再分化过程中过氧化物酶活性的变化。结果表明,铁棍山药零余子形成愈伤组织的条件以暗培养,MS+6-BA2.0mg/L+NAA2.0mg/L培养基的效果较好;愈伤组织再分化成苗的条件以光培养,MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L培养基的效果为佳。铁棍山药零余子分化过程中过氧化物酶活性的变化与外部形态变化相关性较强,可以作为分化过程中的标志酶。     

药用植物半枝莲的离体快繁

以茎尖为外植体进行了离体快繁研究。利用6-BA×IBA和6-BA×NAA两种激素组合诱导丛生芽,6-BA×IBA激素组合的最佳增殖培养基是MS+6-BA0.5 mg/L+IBA0.1 mg/L,增殖系数可达6.5;6-BA×NAA激素组合的最佳增殖培养基是MS+6-BA0.5 mg/L+NAA0mg/L,增殖系数可达6.1;两种组合无显著性差异。在MS基本培养基上即可生根且长势良好,生根率为100%;诱导丛生芽试验中6-BA浓度不能超过0.5 mg/L,否则会有愈伤组织出现。