苦豆子愈伤组织诱导及细胞悬浮培养体系的建立

以苦豆子子叶和胚轴为材料,对苦豆子愈伤组织诱导和继代增殖的最佳培养条件进行研究,旨在建立苦豆子悬浮细胞体系。结果发现,子叶和胚轴为愈伤组织生成的最佳外植体,愈伤组织最佳诱导培养基是MS+0.5 mg/L2,4-D+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA;最佳继代增殖培养基是MS+1.0 mg/L NAA+4.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L2,4-D。以胚轴诱导的愈伤组织是细胞悬浮培养的理想材料,初始接种量10%~20%,添加3%蔗糖,有利于悬浮细胞体系的生成。     

药用植物草麻黄细胞的悬浮培养

[目的]对草麻黄的子叶诱导出的愈伤组织,进行悬浮培养。[方法]采用组织培养的方法进行了愈伤组织诱导、愈伤组织继代和悬浮培养研究。[结果]MS+2.0 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L 6-BA为诱导子叶形成愈伤组织的理想培养基;MS+1.5 mg/L 2,4-D+1.5 mg/L6-BA是愈伤组织的适宜继代培养基;2.0 mg/L 2,4-D+1.5 mg/L 6-BA+300 mg/L水解酪蛋白(CH)是愈伤组织悬浮培养的适宜培养基,愈伤组织干重增加量为0.80 g。[结论]初步选择出草麻黄愈伤组织细胞的悬浮培养条件,为麻黄细胞扩大培养及有效成分提取奠定基础。     

中药白芍愈伤组织的培养及其中芍药苷的测定

[目的]建立中药白芍愈伤组织培养的方法,并测定其中芍药苷的含量。[方法]以白芍叶、茎为外植体,接种于不同的愈伤诱导培养基和继代培养基上培养愈伤组织,并提取愈伤组织中的芍药苷,用TLC和HPLC法测定愈伤组织中芍药苷的含量。[结果]适合白芍茎的诱导愈伤培养基是1/2MS+0.2 mg/L 2,4-D+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA,叶的最适诱导培养基是1/2MS+1.0 mg/L 2,4-D+1.5 mg/L 6-BA,白芍愈伤继代培养适合培养基为1/2MS+0.1 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L ZT+0.5 mg/L NAA。经HPLC测定每克干白芍愈伤组织中的芍药苷含量为0.068 9 mg。[结论]中药白芍的叶和茎可诱导形成愈伤组织,且形成的愈伤组织中含有芍药苷。     

萝卜诱导愈伤组织的影响因素

以萝卜种子为试材,研究了不同外植体、不同激素、不同激素浓度及继代培养对萝卜外植体形成愈伤组织的影响.结果表明:(1)诱导萝卜愈伤组织最好的外植体为子叶.(2)不同的生长素诱导效果不同,诱导效果为NAA＞2,4-D＞IBA;(3)萝卜子叶和下胚轴诱导愈伤组织的最佳初代培养基均为MS+3 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+3%蔗糖+0.8%琼脂.(4)继代培养能促进愈伤组织的形成,子叶和下胚轴的最佳继代培养基分别为:MS+6 mg/L6-BA+0.5 mg/L NAA+3%蔗糖+0.8%琼脂和MS+4 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+3%蔗糖+0.8%琼脂.     

不同激素配比对大豆子叶愈伤组织诱导的影响

[目的]研究不同激素配比对大豆子叶形成愈伤组织的影响。[方法]以高蛋白大豆东农42号子叶为供试外植体,以6-BA2.0mg/L＋NAA0.2 mg/L和2,4-D2.0 mg/L＋KT1.0 mg/L的激素对其进行诱导,研究不同激素对大豆子叶愈伤组织的诱导效果。[结果]以添加6-BA2.0 mg/L＋NAA0.2 mg/L培养基培养的材料诱导率为71.4%;以添加2,4-D2.0 mg/L＋KT1.0 mg/L培养基培养的材料诱导率为78.6%,诱导产生的愈伤组织大部分呈绿色、质密;未添加激素组诱导率为85.7%,但无生长迹象。所加激素均能诱导大豆子叶形成愈伤组织,但不同激素种类诱导愈伤组织能力有差异,以添加2,4-D2.0 mg/L＋KT1.0 mg/L的效果最好。[结论]不同种类的外源激素对外植体的诱导作用不同,大豆子叶愈伤组织诱导的最佳培养基为MS＋2,4-D2.0 mg/L＋KT1.0 mg/L。     

喜树愈伤组织诱导与抑制褐化的研究

[目的]筛选喜树外植体的最佳诱导培养基,研究抑制外植体及继代愈伤组织褐化的方法。[方法]以喜树的幼叶和种胚作为外植体,通过测定过氧化物酶和多酚氧化酶的活性,从外植体选择、培养基种类、激素配比、添加物的处理等方面进行愈伤组织的诱导和抑制外植体及继代愈伤组织褐化的研究。[结果]幼叶外植体的最佳诱导培养基为:SH+NAA2.5mg/L+2,4-D0.5mg/L+6-BA0.25mg/L;种胚外植体的最佳诱导培养基为:MS+2,4-D1.0mg/L+6-BA0.5mg/L。抑制幼叶外植体褐化的方法为:增加外植体大小,吹干培养基表面水分。抑制愈伤组织继代培养褐化的方法为:最佳诱导培养基附加30mg/L抗坏血酸和5g/L活性碳;1次继代后,将质地致密的愈伤组织转移到MS培养基上培养。[结论]该研究为喜树的遗传转化和植株再生提供理论基础。     

红掌工厂化育苗关键技术研究

[目的]研究红掌工厂化育苗的关键技术。[方法]以红掌盆花和切花品种的叶片、叶柄、花苞片和花苞柱头为外植体,进行组培养快速繁殖技术研究,探讨外植体的选择和消毒条件以及不同培养基对红掌愈伤组织的诱导、增殖和生根影响。[结果]叶柄为最佳外植体,愈伤诱导率最高,达78.3%;外植体采用0.1%HgCl2消毒8 min的效果最好;粉冠军和MIDORI的最佳愈伤组织诱导培养基分别为1/2MS＋6-BA1.50 mg/L＋2,4-D0.50 mg/L＋NAA0.10 mg/L和1/2 MS＋6-BA1.50 mg/L＋KT1.00 mg/L＋2,4-D0.10 mg/L;最佳愈伤组织继代培养基分别为MS＋6-BA1.00 mg/L＋NAA0.50 mg/L＋2,4-D0.30 mg/L和MS＋6-BA0.50 mg/L＋KT0.50 mg/L＋NAA0.10 mg/L,添加10%的椰子汁或香蕉浆有利于增殖和丛芽生长,增殖率最高达2.83倍;最佳生根培养基为1/2 MS＋NAA0.10 mg/L＋IAA0.10 mg/L,生根率达100%。[结论]该结果为红掌工厂化育苗体系的建立奠定了基础,对确保红掌产业的发展具有重要意义。     

杜仲愈伤组织诱导及增殖培养技术研究

杜仲是我国名贵的中药材和最有开发前景的胶源植物。通过筛选外植体、优化培养基,建立杜仲愈伤组织诱导和增殖的培养体系,利用统计学方法进行分析。结果显示:以子叶、幼叶、下胚轴为外植体均能够诱导出愈伤组织,但较佳的外植体为下胚轴,诱导率达到79.33%;以下胚轴为外植体的愈伤组织诱导基本培养基是B5,较优的激素配比为NAA 1.0 mg/L+2,4-D 2.0 mg/L;愈伤组织增殖培养的较优激素配比为6-BA 0.5mg/L+NAA 0.5 mg/L+2,4-D 1.0 mg/L。建立了杜仲愈伤组织的培养方法,为通过杜仲细胞培养获得代谢产物提供了技术支持。     

东北刺人参愈伤组织诱导和继代的研究

[目的]研究东北刺人参愈伤组织的诱导和继代方法。[方法]以取自长白山的刺人参植株为材料,研究不同外植体、培养基、激素对刺人参愈伤组织诱导的影响。[结果]叶片为刺人参组织培养的最适宜外植体;5月为外植体的最佳取材时期;以MS为基本培养基,并添加1.0 mg/L 2,4-D和1.0 mg/L 6-BA的培养基中愈伤组织诱导率最高;最佳继代培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2mg/L。[结论]东北刺人参的最适愈伤诱导培养基和继代培养基分别是:MS+2,4-D 1.0 mg/L+6-BA 1.0 mg/L和MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L。     

萝卜诱导愈伤组织的影响因素

以萝卜种子为试材,研究了不同外植体、不同激素、不同激素浓度及继代培养对萝卜外植体形成愈伤组织的影响。结果表明:(1)诱导萝卜愈伤组织最好的外植体为子叶。(2)不同的生长素诱导效果不同,诱导效果为NAA>2,4-D>IBA;(3)萝卜子叶和下胚轴诱导愈伤组织的最佳初代培养基均为MS 3 mg/L 6-BA 0.5 mg/L NAA 3%蔗糖 0.8%琼脂。(4)继代培养能促进愈伤组织的形成,子叶和下胚轴的最佳继代培养基分别为:MS 6 mg/L6-BA 0.5 mg/L NAA 3%蔗糖 0.8%琼脂和MS 4 mg/L 6-BA 0.5 mg/L NAA 3%蔗糖 0.8%琼脂。     

不同激素配比对紫花苜蓿不同外植体愈伤组织诱导的影响

[目的]为紫花苜蓿外植体培养筛选最佳激素配比培养基。[方法]分别以盛世无菌苗的下胚轴、子叶、叶片、叶柄、根为外植体。在MS附加不同激素配比的培养基上诱导愈伤组织,研究不同处理对愈伤组织诱导率的影响。[结果]5种外植体均能诱导出愈伤组织,其中下胚轴的愈伤组织诱导率最高（达87．5％）,且愈伤组织长势良好,其次为子叶〉叶柄〉叶片〉根;不同外植体愈伤组织的形成时间为下胚轴〉子叶〉叶柄和根〉叶片;2,4-D诱导愈伤组织的效果优于NAA.[结论]2,4-D、NAA、6-BA和KT配合使用的培养基上形成的愈伤组织浅黄带绿,表面突起,松软,带簇状芽或单芽或形成胚状体.     

杜仲愈伤组织诱导的研究

采用杜仲优树的幼叶、嫩茎及种子无菌苗的下胚轴、子叶、真叶、根为外植体,以B5和MS为基本培养基,添加1.0mg/LNAA和0.3mg/LBA,进行了不同外植体种类、外植体大小、试验接种方式、外植体采样时间、光照条件、培养基pH值共6种因素对杜仲愈伤组织诱导的影响试验。结果表明,在杜仲愈伤组织诱导中,田间材料幼叶取样时间以3月中旬为好,幼茎的取材时间以4月中旬以前最佳;无菌苗以下胚轴、子叶、真叶诱导效果较好;诱导愈伤组织的培养基pH值以6.3较适宜;培养室的光照条件以12h光照、12h暗培养较有利于愈伤组织诱导;茎段的大小和接种方式以0.7cm长度横放方式诱导效果较好。     

发根农杆菌Ri质粒T-DNA对杜仲的遗传转化研究

杜仲是中国特有的经济树种,杜仲毛状根能够合成与杜仲含量相当的次生代谢产物。本实验用发根农杆菌ATCC15834分别感染杜仲Eucommia ulmoides Oliv的子叶、叶片、叶柄、下胚轴和根5个营养器官,结果表明杜仲植物的5个营养器官均能单独诱导出大量的毛状根。经PCR检测,发根农杆菌ATCC15834Ri质粒的rolB基因已转入杜仲毛状根基因组中。说明用发根农杆菌诱导杜仲产生大量的毛状根的方法有效,为大规模用发根农杆菌Ri质粒转化到杜仲植物中提供了理论基础。     

长寿沙田柚不同外植体愈伤组织诱导的研究

[目的]对长寿沙田柚不同外植体愈伤组织的诱导进行研究。[方法]以长寿沙田柚无菌苗为材料,分别采用其上胚轴、下胚轴和子叶节段为外植体,研究不同外源激素对愈伤组织诱导的影响。[结果]诱导长寿沙田柚愈伤组织的外植体以下胚轴为佳,激素组合以1.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L 2,4-D的效果最好。[结论]为以后长寿沙田柚高效离体再生体系的建立及其遗传转化研究奠定了基础。     

生长调节剂和外植体对油菜离体培养愈伤诱导的影响

以双低优质油菜品种中双 7号的无菌苗为材料 ,探索了以子叶、下胚轴和幼根为外植体 ,及不同生长调节剂组合对愈伤诱导的影响作用。结果表明 ,生长调节剂是愈伤诱导成功的关键因子 ,2 ,4-D是诱导愈伤所必需的 ,以MS培养基含 1mg·L- 1 2 ,4-D与 2mg·L- 1 6 -BA配比为佳 ;同时子叶优于下胚轴和幼根作为外植体进行愈伤诱导 ,可获得出愈率高、增殖快、质量好的愈伤组织     

大豆子叶的愈伤组织诱导

[目的]建立大豆子叶的愈伤组织诱导体系。[方法]以大豆子叶作为外植体,研究不同激素种类及其浓度对叶片再生的影响。[结果]在试验所用的4种培养基处理中,以MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L培养基的愈伤组织诱导效果最佳。[结论]为大豆的进一步工业化生产奠定了基础。     

甘草的试管苗快速繁殖

以甘草种子萌发的幼苗为材料,进行组织培养快速繁殖研究。结果表明,在幼茎、幼叶、子叶、下胚轴、胚根等5种外植体中,子叶及下胚轴均适合诱导愈伤组织发生;在6-BA、NAA或2,4-D不同激素组合中,以MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 1.5mg/L为最佳的愈伤组织诱导培养基,同时也是以茎尖、腋芽为外植体进行丛生芽诱导的最佳培养基;在IAA、IBA和NAA 3种激素中,以1/2MS+NAA 0.05mg/L为最佳的试管苗生根培养基,生根率可达80%。     

激素对杜仲幼茎愈伤组织诱导及生长的影响

以MS为基本培养基,添加不同浓度的2,4-D,NAA,IBA,BA,KT或其组合,研究杜仲嫩茎愈伤组织的诱导及生长情况。结果表明,3种生长素均可100%诱导出愈伤组织,以0.5mg/L2,4-D,0.5～1.0mg/LNAA,1.0mg/LIBA效果较好;2,4-D和BA及KT的组合均不利于愈伤组织诱导,低浓度的BA与NAA和IBA组合能促进愈伤组织的诱导和生长,其中1.0mg/LNAA+0.3～0.5mg/LBA,1.0mg/LIBA+0.5mg/LBA诱导出的愈伤组织生长旺盛,富有光泽,适合进一步继代培养,而高浓度则起抑制作用;KT的加入对愈伤组织的诱导及生长均起抑制作用。     

胡萝卜幼苗根、茎、叶组织培养再生植株

[目的]研究胡萝卜幼苗的组织培养再生技术。[方法]以培养约2个月的胡萝卜幼苗为材料,分别取幼苗的根、茎、叶为外植体,研究不同培养基、不同外植体对愈伤组织诱导的影响,以及培养基对愈伤组织分化的影响。[结果]根、茎、叶为外植体均能产生愈伤组织,但以茎为外植体诱导的愈伤组织质量最佳,其愈伤组织的诱导率和分化率均为最高。[结论]建立了胡萝卜试管培养幼苗的愈伤组织诱导和再生植株体系,为今后的试验打下了基础。