杜仲愈伤组织诱导和植株再生体系的建立

【目的】研究在BA、NAA、IBA、2,4-D等激素作用下,杜仲愈伤组织诱导、愈伤组织诱导丛生芽及丛生芽诱导生根各阶段的最佳培养基配方,建立杜仲植株再生体系,为杜仲转基因研究提供基础材料。【方法】以杜仲成熟胚、幼嫩胚、叶片和茎段为外植体,使用BA、NAA、IBA、2,4-D等激素,配制成不同质量浓度的培养基,进行杜仲愈伤组织诱导,同时分析愈伤组织诱导丛生芽和丛生芽诱导生根培养基的最佳配方,建立杜仲植株的再生体系。【结果】杜仲愈伤组织诱导的培养基分别为:成熟胚MS+BA 2.0mg/L+NAA 2.5mg/L,诱导率77.8%;幼嫩胚MS+BA 0.5mg/L+2,4-D 2.0mg/L,诱导率88.9%;叶片MS+BA 0.5mg/L+NAA 0.5mg/L,诱导率100%;茎段MS+BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L,诱导率为100%。愈伤组织诱导不定芽形成的适宜培养基为MS+BA 1.0mg/L+NAA 0.05mg/L,不定芽诱导率为88.9%,增殖系数为3±1;杜仲在1/4MS的基本培养基中生根最好,生根率达80%,激素的存在反而会抑制生根。【结论】杜仲成熟胚、幼嫩胚、叶片和茎段均可通过愈伤组织途径诱导不定芽的形成,并诱导生根,建立杜仲愈伤组织再生体系,但不定芽的增殖系数较低。     

苦豆子愈伤组织诱导及细胞悬浮培养体系的建立

以苦豆子子叶和胚轴为材料,对苦豆子愈伤组织诱导和继代增殖的最佳培养条件进行研究,旨在建立苦豆子悬浮细胞体系。结果发现,子叶和胚轴为愈伤组织生成的最佳外植体,愈伤组织最佳诱导培养基是MS+0.5 mg/L2,4-D+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA;最佳继代增殖培养基是MS+1.0 mg/L NAA+4.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L2,4-D。以胚轴诱导的愈伤组织是细胞悬浮培养的理想材料,初始接种量10%~20%,添加3%蔗糖,有利于悬浮细胞体系的生成。     

苜蓿愈伤组织的诱导和再生体系的建立

以改良SH为基本培养基,研究了不同激素配比和不同外植体对苜蓿愈伤组织诱导的影响,筛选出诱导愈伤组织的最佳外植体是下胚轴、最佳培养基为SH+2,4-D 2mg/L+KT 0.2mg/L;继代增殖后对愈伤组织进行分化再生培养,研究了附加不同浓度外源激素的MS和改良SH培养基对愈伤组织分化的影响,确定最佳分化培养基为改良SH+NAA0.1mg/L+KT 0.5mg/L。     

苜蓿胚性愈伤组织诱导及植株再生研究

以苜蓿5～7 d苗龄无菌苗的子叶和下胚轴为外植体,研究培养基中不同激素和浓度配比对苜蓿愈伤组织诱导和分化的影响。结果表明,MS+2,4-D 2.0 mg/L+6-BA 1.0 mg/L愈伤组织诱导率达100%,且愈伤组织状态良好,增殖速度快。MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.05 mg/L为苜蓿胚性愈伤组织诱导的适宜培养基,诱导率为37.8%。胚性愈伤组织分化成苗培养基为MS+6-BA0.2 mg/L+NAA 0.01 mg/L,生根培养基为1/2MS+NAA 0.02 mg/L+蔗糖10.0 g/L。     

不同激素对大叶黄杨幼茎愈伤组织的诱导试验

以大叶黄杨的幼茎段为外植体,在添加NAA、IAA和2,4-D不同激素浓度的MS培养基上,对其愈伤组织进行诱导试验.结果表明:生长素对愈伤组织诱导的效应为2,4-D＞NAA＞IAA.在添加不同激素组合的培养基上均可诱导出愈伤组织,其中,MS+BA 1.0～1.5mg/L+2,4-D 0.5～1.0mg/L、MS+BA 1.5～2.0mg/L+NAA 1.0～1.5mg/L诱导效果为最好,其诱导率分别为86.8%和76.3%.通过科学配制不同激素浓度配比的MS培养基,就可能有效地诱导出大叶黄杨幼茎的愈伤组织.     

杜仲愈伤组织诱导与继代培养研究

[目的]对杜仲进行愈伤组织诱导及继代培养,建立愈伤组织的培养系统。[方法]以杜仲子叶、幼叶、下胚轴为外植体,接种于不同培养基中诱导和继代。[结果]不同外植体愈伤组织的诱导率高低顺序为：下胚轴〉子叶〉幼叶。子叶和幼叶在MS＋NAA 1.00 mg/L、MS＋2,4-D 1.00 mg/L培养基中诱导出的愈伤组织在MS＋6-BA 1.00 mg/L＋NAA 2.00 mg/L、MS＋2,4-D 1.00 mg/L培养基中继代培养为佳;胚轴在MS＋NAA 3.00 mg/L、MS＋6-BA 1.00 mg/L＋NAA 1.00 mg/L和MS＋2,4-D 1.00 mg/L培养基中诱导出的愈伤组织在MS＋6-BA1.00 mg/L＋NAA 2.00 mg/L、MS＋6-BA 1.00 mg/L＋NAA 1.00 mg/L和MS＋2,4-D 1.00 mg/L培养基中继代培养为佳。[结论]杜仲的子叶、幼叶和胚轴可采用多条途径实现愈伤组织的诱导和继代增殖培养,为进一步筛选高产细胞系打下基础。     

植物激素对大豆愈伤组织诱导和继代培养的影响

以3个基因型大豆无菌实生苗的真叶和胚轴为外植体,在MS培养基上附加不同浓度的TDZ、NAA、6-BA以及2,4-D,研究不同激素浓度对大豆愈伤组织诱导及继代培养的影响,结果表明:在愈伤组织诱导阶段,以真叶为外植体时,吉农28+1.5 mg/L TDZ+0.2 mg/L NAA+200 mg/L活性炭为最佳组合;以胚轴为外植体,吉农17+1.0 mg/L TDZ+0.1 mg/L NAA+200 mg/L活性炭为最佳组合。在继代组织培养阶段,对真叶诱导形成的愈伤组织而言,吉农17+0.5 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA+3.0 mg/L2,4-D为最佳组合;对胚轴诱导的愈伤组织而言,吉农17+1.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+2.0 mg/L2,4-D为最佳组合。     

苜蓿高频再生组织培养体系的优化

以3个品种紫花苜蓿7日龄无菌苗的下胚轴为外植体,以MS培养基为基础培养基,研究不同浓度激素配比对紫花苜蓿离体再生体系中愈伤组织的形成、不定芽诱导以及生根的影响。结果表明:金皇后、甘农1号、阿尔冈金愈伤组织诱导的最佳培养基分别为MS+2,4-D 2.5 mg/L+6-BA 0.5mg/L、MS+2,4-D 2.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L、MS+2,4-D 3.0 mg/L+KT 1.0 mg/L;不定芽诱导的最佳培养基分别为MS+6-BA 2.0 mg/L+CH 0.5 g/L、MS+NAA 0.3 mg/L+KT 0.5 mg/L、MS+KT 1.2 mg/L;最佳生根培养基为1/2MS+IBA 1.0 mg/L。     

除虫菊愈伤组织诱导研究

以除虫菊种子获得的无菌苗的不同器官为外植体,研究几种基本培养基及NAA、2,4-D或其与BA、KT的组合对愈伤组织的诱导效果,结果表明：不同类型基本培养基中MS有利于子叶、真叶和下胚轴,White有利于根愈伤组织的诱导和生长。不论除虫菊的哪一部分作为外植体,培养基pH值均为5.8较为合适。不同器官外植体诱导愈伤组织的最适植物生长调节剂组合不同,子叶为1.0 mg/L 2,4-D＋0.5 mg/L KT,真叶为1.0-2.0 mg/L 2,4-D＋0.5 mg/LKT,根为0.5 mg/L 2,4-D＋0.5 mg/L BA或KT,而下胚轴在1.0-2.0mg/L 2,4-D＋0.5 mg/L BA,0.5-1.0 mg/L 2,4-D＋0.5 mg/L KT,1.0 mg/L NAA＋0.5 mg/L BA,0.5mg/L NAA＋0.5 mg/L KT,0.5 mg/L 2,4-D＋0.5 mg/L BA或KT均可100%诱导愈伤组织。     

外源激素对桃儿七愈伤组织诱导的影响

为了探讨外源激素对桃儿七愈伤组织诱导的影响,以桃儿七的胚及无菌苗的子叶和胚轴为材料,以MS为基本培养基,研究了3种不同激素配比对不同外植体愈伤组织诱导的影响。结果表明,以胚为外植体,在3.0 mg/L 2,4-D、0.5 mg/L KT和0.5 mg/L IAA组合处理的培养基中,诱导率达到39.5%;诱导子叶和胚轴形成愈伤组织的最佳激素配比为4.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L KT+0.2 mg/L IAA;成熟胚比子叶和胚轴更易诱导愈伤组织的形成,诱导率分别提高了43.64%和315.79%,诱导效果最显著(P0.001);在接种前,用5mg/L 2,4-D溶液浸蘸子叶和胚轴可有效提高其出愈率。     

激素对杜仲幼茎愈伤组织诱导及生长的影响

以MS为基本培养基,添加不同浓度的2,4-D,NAA,IBA,BA,KT或其组合,研究杜仲嫩茎愈伤组织的诱导及生长情况。结果表明,3种生长素均可100%诱导出愈伤组织,以0.5mg/L2,4-D,0.5～1.0mg/LNAA,1.0mg/LIBA效果较好;2,4-D和BA及KT的组合均不利于愈伤组织诱导,低浓度的BA与NAA和IBA组合能促进愈伤组织的诱导和生长,其中1.0mg/LNAA+0.3～0.5mg/LBA,1.0mg/LIBA+0.5mg/LBA诱导出的愈伤组织生长旺盛,富有光泽,适合进一步继代培养,而高浓度则起抑制作用;KT的加入对愈伤组织的诱导及生长均起抑制作用。     

百里香愈伤组织的诱导及细胞悬浮培养体系的建立

以普通百里香无菌苗的茎段和叶片为材料,对百里香愈伤组织诱导和继代增殖的最佳培养条件进行研究,并对悬浮细胞的生长特性进行监测,初步建立细胞悬浮培养体系.结果表明,茎段是诱导愈伤组织和进行悬浮培养的理想外植体,愈伤组织最佳诱导培养基为MS+NAA 1.0 mg/L+6-BA 0.5 mg/L+2,4-D0.5 mg/L,最...     

高原野生濒危药材独一味的组培快繁技术研究

[目的]探究独一味组培快繁技术体系,保护并合理利用独一味资源.[方法]选取独一味无菌苗的子叶、嫩芽和幼根为外植体,采用不同类型的培养基和不同种类的植物生长调节剂进行组培快繁研究.[结果]独一味幼叶、嫩芽和幼根均可诱导出愈伤组织,其中幼根的愈伤组织诱导率最高,达93.5％,出愈时间为7d,最适诱导培养基为MS ＋1.0mg/L2,4-D＋ 0.5 mg/L 6-BA＋ 0.5 mg/L NAA;丛生芽诱导的适宜培养基为MS＋ 1.0 mg/L 6-BA＋ 0.5 mg/L NAA,诱导率达88.8％;生根的适宜培养基为1/2 MS＋ 0.5 mg/L NAA,诱导率高达97.9％.[结论]利用组织培养技术能够实现独一味的快速繁殖,为独一味资源的可持续利用提供参考.     

“高地”截形瓦苇的组织培养与快速繁殖技术研究

利用“高地”截形瓦苇的花葶作材料,对其离体组织培养与快速繁殖技术进行研究,结果表明:花葶愈伤组织诱导的最佳培养基是MS+6-BA0.5mg/L+KT1.0mg/L+NAA0.1mg/L,启动速度快,而且愈伤组织质量好;诱导培养基中加入KT和低浓度的NAA比单一采用6-BA效果更好;最适的增殖培养基为MS+6-BA0.2mg/L+KT0.5mg/L+NAA0.1mg/L,增殖系数达5.5以上,而且质量高,芽分化多;MS+NAA0.1mg/L是较适合的复壮与生根培养基,植株移栽成活率一般在50%左右。利用花葶作外植体,可以在不损伤原母本植株的基础上实现组织培养和快速繁殖的目的,从而实现商品化、规模化生产。     

一品红叶片愈伤组织诱导及腋芽的增殖

以一品红叶片和腋芽为外植体进行了愈伤组织诱导和腋芽增殖的研究,结果表明,叶片愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+KT 1.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L+2,4-D 0.5 mg/L;腋芽增殖的较佳培养基为MS+TDZ 0.5 mg/L+KT 0 mg/L+NAA 0 mg/L;试管苗生根的最佳培养基为MS+NAA 1.0 mg/L+IBA 0.5 mg/L。     

防风愈伤组织诱导及植株再生体系研究

以防风为材料,研究不同外植体、激素组合、培养基对愈伤组织诱导及植株再生的影响。结果表明,茎段是防风组织培养较为理想的外植体材料。诱导愈伤组织的最佳培养基为MS+1.5 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L KT+1.0 mg/L 6-BA,最高出愈率为96.7%;诱导不定芽的最佳培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA,最高诱导率为75%;诱导根的最佳培养基为1/2MS+0.5 mg/L NAA+0.1 mg/L 6-BA,生根率达65%;组培苗的移栽成活率达80%。     

萝卜诱导愈伤组织的影响因素

以萝卜种子为试材,研究了不同外植体、不同激素、不同激素浓度及继代培养对萝卜外植体形成愈伤组织的影响。结果表明:(1)诱导萝卜愈伤组织最好的外植体为子叶。(2)不同的生长素诱导效果不同,诱导效果为NAA>2,4-D>IBA;(3)萝卜子叶和下胚轴诱导愈伤组织的最佳初代培养基均为MS 3 mg/L 6-BA 0.5 mg/L NAA 3%蔗糖 0.8%琼脂。(4)继代培养能促进愈伤组织的形成,子叶和下胚轴的最佳继代培养基分别为:MS 6 mg/L6-BA 0.5 mg/L NAA 3%蔗糖 0.8%琼脂和MS 4 mg/L 6-BA 0.5 mg/L NAA 3%蔗糖 0.8%琼脂。     

蓬莪术的离体快繁研究

[目的]探索蓬莪术的离体快繁技术。[方法]以蓬莪术嫩叶、块茎和根为外植体,接种在以MS为基本培养基,外加不同浓度激素组合的培养基上进行愈伤组织诱导、增殖和分化培养;以幼芽为外植体,进行幼芽的增殖、生根培养和移栽等。[结果]诱导蓬莪术叶、块茎和根的愈伤组织形成的最适培养基为MS＋2,4-D1.0 mg/L＋6-BA0.5～1.0 mg/L＋NAA0.3 mg/L,其中蓬莪术叶诱导率最高,达96%;愈伤组织增殖和分化培养还有待进一步研究。幼芽最适增殖培养基为MS＋6-BA3.0 mg/L＋NAA0.1 mg/L＋KT1.0 mg/L,其增殖倍数达3.5以上;而生根培养基以1/2 MS＋NAA1.0 mg/L＋6-BA0.5 mg/L为最佳,生根率达100%,其移栽成活率达85%以上。[结论]该研究结果为蓬莪术的快速繁殖及工厂化生产奠定了基础。     

猫尾射的组织培养

以猫尾射无菌播种苗（去除根部）为外殖体,对其愈伤组织诱导和分化及其不定芽增殖进行研究。结果表明,外殖体在MS＋6-BA 1.0 mg/L＋NAA 0.1 mg/L培养基上,愈伤组织诱导和分化的效果较好,愈伤诱导率为82.0%,分化率为74.5%;经不定芽增殖培养基MS＋6-BA 0.5 mg/L＋NAA 0.05 mg/L培养,不定芽增殖倍数为8.2,平均株高为4.7cm。组培苗在MS＋IBA0.5mg/L培养基上生根率达90%。生根苗移栽成活率达84%。