藏鸡蛋卵白蛋白酶解制备抗氧化肽及其体外抗氧化活性

采用碱性蛋白酶水解藏鸡蛋卵白蛋白,制备抗氧化活性肽,以水解度和超氧阴离子自由基(O_2~-·)清除率为指标,通过单因素试验和正交试验确定最佳酶解参数,并对酶解多肽的体外抗氧化活性进行测定。结果表明:碱性蛋白酶酶解的最适条件为底物质量分数2%、酶解时间5 h、酶添加量7 000 U/g;在最适条件下,碱性蛋白酶酶解所得抗氧化肽的O_2~-·、DPPH自由基、羟基自由基(·OH)清除率分别为71.75%、56.47%、84.46%;还原力、抗脂质过氧化能力分别为0.87、82.83%。     

沙蚕不同酶解产物抗氧化效果研究

海洋生物蛋白资源是海洋生物资源的重要组成部分，对其进行高值化加工利用是海洋生物技术研究的重要内容，酶解是提高海洋蛋白功能性的有效方式，但酶种类不同,其作用位点不同，可能对酶解产物的活性有一定影响。为了探究了沙蚕不同酶解产物的抗氧化性，采用6种蛋白酶（碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、风味蛋白酶、胰蛋白酶）酶解沙蚕，测定了不同酶解时间下的水解度、分子量分布、3种自由基（DPPH、O-2·、·OH）的清除率等反映抗氧化水平的指标。结果表明：胰蛋白酶小分子肽得率最高，为70.47%；胃蛋白酶次之，为68.12%。酶解液浓度为5 mg·mL-1时，胃蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解4 h时，DPPH清除率效果较好，分别为90.87%和90.52%。胃蛋白酶酶解3 h时，O-2·清除率效果最佳，为89.78%；木瓜蛋白酶酶解3 h时，O-2·清除率效果次之，为57.99%。碱性蛋白酶酶解4 h和胃蛋白酶酶解2 h时，·OH清除率效果较好，分别为85.07%和83.37%。胰蛋白酶和胃蛋白酶对提高酶解液水解度和小肽生成作用明显，胃蛋白酶的酶解产物对3种自由基清除率较好，更适用于制备沙蚕抗氧化肽。     

米糠蛋白抗氧化肽的制备及初步分离

试验以米糠蛋白为原料,制备米糠蛋白抗氧化肽。以DPPH自由基清除率为指标,采用正交试验,优化碱性蛋白酶酶解米糠蛋白制备抗氧化肽的工艺条件;采用超滤、SephadesG-25柱层析分离纯化米糠蛋白抗氧化肽。试验结果表明,制备米糠蛋白抗氧化肽的最优工艺条件为：酶解温度45℃,pH9．0,时间60rain,米糠蛋白底物浓度3％,碱性蛋白酶加酶量3000U·g-1。在米糠蛋白酶解产物中,Mrs〈5KDa组分的抗氧化活性最强,其对DPPH自由基清除率为68．7％。通过SephadexG-25凝胶层析柱进一步分离得到4个混合组分,混合组分Ⅱ活性最强,其DPPH自由基清除率为75．83％。     

高短肽得率羊骨酶解物的制备及其体外抗氧化活性

以短肽得率为指标,响应面法优化羊骨碱性蛋白酶水解工艺,对酶解物的抗氧化活性进行研究,为羊骨的高值利用奠定基础。结果表明,以所得最优工艺即骨粉浓度8.24%,p H值9,加酶量4.35%,46℃水解5 h制备酶解物,短肽得率达71.19%;酶解物对3种自由基的清除率随浓度的增加而增加,对3种活性氧的清除能力为DPPH·O_2~-··OH;0.3 mg/m L酶解物对DPPH·,O_2~-·,·OH的清除率分别为46.21%,29.82%和24.16%。由此可见,以最优工艺制备的、富含短肽的羊骨碱性蛋白酶解物具有体外抗氧化活性,有望应用于饲料、食品、医药等领域。     

双酶水解麦胚制备抗氧化肽的工艺优化

以麦胚为原料,制备具有抗氧化活性的麦胚肽。对碱性蛋白酶Alcalase 2.4 L与胰蛋白酶双酶组合酶解麦胚的工艺进行优化。以水解度和1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH)自由基清除率为考察指标,探讨酶与底物浓度的比值([E]/[S])、酶降温度和酶解时间对制备麦胚抗氧化肽工艺的影响,采用Box-Behnken中心组合设计和响应面法(RSM)优化了麦胚双酶水解的工艺条件。结果表明:双酶水解麦胚制备抗氧化肽的工艺条件为底物浓度10.0%、碱性蛋白酶与胰蛋白酶酶活比1∶1、[E]/[S]为0.041 3、酶解温度50.3℃、酶解时间2.03 h、pH8.0。验证试验表明,在此条件下,麦胚水解度和抗氧化肽对DPPH自由基清除率分别为16.65%和50.16%;其抗氧化活性小于10 mg/ml VC。     

碱性蛋白酶酶解核桃粕蛋白产物抗氧化特性研究

采用碱性蛋白酶对核桃粕蛋白进行酶解,测定了不同酶解时间下的酶解液抗氧化性;用葡聚糖凝胶分离活性肽段并测定其抗氧化性。结果表明,酶解条件为酶用量3 000 U/g底物、底物质量浓度为40mg/mL、pH为8.5、温度为50℃下酶解210 min,酶解液的抗氧化活性较高,OH.清除率为72.3%,氧自由基清除率为83.1%,DPPH.清除率为102.6%,总抗氧化能力为162.986 U/mL;通过葡聚糖凝胶分离并与已知标准品对照表明碱性蛋白酶酶解核桃粕蛋白产物抗氧化活性多肽的分子量主要集中在1 321~607 u,该多肽片段对OH.清除率为70.23%,氧自由基清除率为62.57%,DPPH.清除率为99.56%,总抗氧化能力为118.987 U/mL。     

响应面法优化酶解海洋低值鱼肉制备抗氧化肽工艺

[目的]优化碱性蛋白酶制备海洋低值鱼抗氧化肽的工艺。[方法]以DPPH自由基清除率为指标,在酶解温度、pH、加酶量、底物浓度等条件下进行单因素试验,在此基础上运用响应面法优化碱性蛋白酶酶解低值鱼肉制备抗氧化肽的工艺条件。[结果]在温度54℃、pH 8.8、底物浓度200 g/L、加酶量2 500 U/g的条件下酶解3 h,得到抗氧化肽的DPPH自由基清除率理论值为62.66%,实际值为61.87%,相对误差为1.26%。[结论]该研究为低值鱼抗氧化肽的开发利用提供理论依据。     

鲍内脏抗氧化活性肽制备工艺研究

为建立鲍内脏抗氧化活性肽制备工艺,在单因素试验基础上,利用响应面法优化酶解工艺条件,建立了酶解时间、酶添加量、酶解温度与DPPH自由基清除率之间的数学模型;经超滤分离获得了不同分子质量的酶解产物,采用DPPH自由基和超氧阴离子自由基(O_2~-·)的清除能力评价其抗氧化性,经MALDI-TOF/TOF分析其分子质量分布。结果表明:酶法提取鲍内脏抗氧化肽的最佳工艺为料液比1∶1、酶解时间4.8h、酶添加量3 000U·g~(-1)、酶解温度54℃;获得的分子质量为2~6ku的组分具有较强的自由基清除能力,DPPH自由基和O-2·清除能力分别为94.76%和60.24%。     

草鱼鱼鳞抗氧化肽的酶法制备及其抗氧化稳定性研究

【目的】采用碱性蛋白酶水解草鱼鱼鳞制备抗氧化肽,并探讨其稳定性。【方法】运用单因素及正交试验对酶解条件进行优化,并进行体外抗氧化活性的测定,对酶解得到的抗氧化肽进行体外模拟胃肠消化实验。【结果】在优化工艺条件下,鱼鳞酶解液中羟自由基清除率为88.71%;其体外抗氧化能力随肽质量浓度增大而增大,在浓度为0.5 mg/m L时,鱼鳞抗氧化肽清除DPPH自由基能力达到Vc的81.1%;对超氧阴离子自由基清除率为98.97%。在胃肠消化前4 h内抗氧化活性较稳定,之后随时间延长抗氧化稳定性显著下降。【结论】在酶解草鱼鱼鳞的较佳工艺条件:温度60℃、料液比1∶15、加酶量800 U/g、时间3 h下,碱性蛋白酶水解草鱼鱼鳞制备的抗氧化肽具有良好的抗氧化活性及稳定性。     

响应面法优化酶解鹿角冒渣制备抗氧化活性肽工艺

以游离氨基酸含量和抗氧化活性为试验指标,分别采用5种蛋白酶酶解制备鹿角冒抗氧化多肽,对鹿角冒渣为原料制备鹿角冒抗氧化活性肽的工艺进行了研究。结果表明,碱性蛋白酶产物的游离氨基酸含量和抗氧化活性均较高,因此水解用酶选择碱性蛋白酶。通过单因素和响应面回归试验对酶解工艺参数进行优化,得出最佳酶解条件:加酶量6%、底物浓度15%、pH8.5、温度53℃、反应时间4 h,制备的鹿角冒渣抗氧化肽对DPPH·的清除率预测值为74%,验证试验所得实测平均值为(74.65±1.24)%,实测结果与预测值符合良好。     

豇豆籽肽的制备及抗氧化活性研究

[目的]采用酶法制备豇豆籽蛋白肽,并探讨其抗氧化活性。[方法]先用碱提酸沉法制备豇豆籽蛋白,然后分别用碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶水解制备豇豆籽肽,后者脱盐后进行DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子清除活性分析。[结果]碱性蛋白酶水解能力强于木瓜蛋白酶,2种酶水解后的豇豆籽肽对3种自由基均具有较好的清除活性。在相应浓度范围内,对DPPH自由基最大清除率分别为63.92%(碱性蛋白酶)和63.06%(木瓜蛋白酶),半数抑制浓度IC50分别为3.20和3.28 mg/ml;对羟基自由基最大清除率分别为87.66%(碱性蛋白酶)和85.88%(木瓜蛋白酶),相应IC50分别为4.21和4.89 mg/ml;对超氧阴离子自由基的最大清除率64.06%(碱性蛋白酶)和47.92%(木瓜蛋白酶)。[结论]研究可为豇豆籽蛋白肽的深度开发和综合利用提供一定的理论基础。     

水解进程对酶法制备的鱼鳞胶原蛋白肽性能的影响

以草鱼(Ctenopharyngodon idellus)鳞为原料,研究在3种常用工业蛋白酶作用下,水解进程对酶法制备的鱼鳞胶原蛋白肽性能的影响。结果发现:对于碱性蛋白酶,在试验条件下水解4h后,水解度为9.5%,此时胶原蛋白肽的综合性能最为理想,对DPPH·的清除率为82.14%,乳化活性指数为70.12m2/g。对于复合蛋白酶,在试验条件下水解4h后,水解度为8.7%,胶原蛋白肽对DPPH·的清除率为86.32%,乳化活性指数为32.93m2/g。对于中性蛋白酶,在试验条件下水解4h后,水解度为7.2%,胶原蛋白肽对DPPH·的清除率为70.15%,乳化活性指数为36.88m2/g。以上结果表明,不同水解程度的胶原蛋白肽性能存在差异,使用不同蛋白酶进行水解,在水解程度相同时,所得胶原蛋白肽的性能也不相同。     

超声波辅助酶解鲭鱼制备抗氧化肽的研究

针对鲭鱼鱼肉蛋白质含量相对较高的特点,利用超声波辅助酶解制备抗氧化肽。以双缩脲法测得多肽含量,以对DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)自由基的清除率为指标,探究制备鲭鱼抗氧化肽的最佳工艺条件。结果表明,最佳的酶解制备条件为:中性蛋白酶加酶量3%、酶解温度50℃、底物浓度4%、超声波辅助酶解时间2.5 h,在此条件下,得到的多肽抗氧化能力较强,对DPPH自由基的清除率达到89.33%,采用中性蛋白酶在超声波辅助下酶解鲭鱼蛋白制备抗氧化肽是可行的。     

酶解鳙鱼蛋白制备活性肽的研究

以鳙鱼(Aristichthysnobilis)鱼肉蛋白为原料,采用木瓜蛋白酶对鳙鱼蛋白进行酶解,制备具有抗氧化活性的可溶性肽。研究酶浓度、底物浓度、温度、时间、pH对水解度和DPPH·自由基清除率的影响。通过正交试验设计对酶解工艺进行优化。结果表明,酶解的最佳条件是酶浓度1 400 U/g,底物浓度3.0%,温度60℃,酶解2 h,pH 7.0,在此条件下,所得可溶性肽的活性最高,对DPPH·自由基的清除率为69.09%,对羟自由基的清除率为75.22%,对O_2~-·自由基的清除率为61.92%。     

蝇蛆抗氧化肽的制备及其纯化

以DPPH自由基清除率为评价指标,通过单因素试验和正交试验优化碱性蛋白酶水解蝇蛆蛋白制备抗氧化肽的工艺条件。采用超滤、Sephadex G25凝胶过滤层析对蝇蛆蛋白水解物进行分离纯化,筛选高抗氧化活性组分。结果表明,酶法制备蝇蛆蛋白抗氧化肽的最佳工艺条件为:加酶量7000 U/g,底物质量浓度1%,酶解时间15 min,酶解温度50℃,p H值7.5。水解物经超滤得到相对分子量大于10 k D、5~10 k D以及小于5 k D的组分,以小于5 k D组分清除DPPH自由基活性最强。该组分通过凝胶过滤层析进一步分离得到2个组分,其中组分Ⅱ的清除DPPH活性明显高于组分Ⅰ,达到81.83±0.80%。酶解产物经2步纯化后,其DPPH清除活性得到了显著提高,提高约57.88%。     

榛子粕抗氧化肽制备条件的优化及体外模拟消化的研究

为选出最佳的水解蛋白酶,选用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶3种蛋白酶水解榛子粕蛋白,研究单一蛋白酶和复合蛋白酶水解产物的水解度、DPPH自由基清除能力和氨基酸含量,对榛子粕抗氧化肽制备工艺进行优化,分析体外模拟消化前后榛子粕抗氧化肽DPPH自由基清除能力和氨基酸含量的变化。结果表明:木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶和中性蛋白酶水解产物水解度分别为2.89%,6.26%,9.50%。1N复合蛋白酶水解产物、1A复合蛋白酶水解产物、2NA复合蛋白酶水解产物和2AN复合蛋白酶水解产物水解度分别为6.31%,7.20%,6.25%,4.99%。木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶和中性蛋白酶水解产物清除DPPH自由基的IC50分别为12.0,4.60和2.53mg·mL~(-1)。1N复合蛋白酶水解产物、1A复合蛋白酶水解产物、2NA复合蛋白酶水解产物和2AN复合蛋白酶水解产物清除DPPH自由基的IC50分别为3.05,3.50,3.25和2.81mg·mL~(-1)。木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶和中性蛋白酶水解产物氨基酸总量分别为22.08,34.13和41.36g·100g-1。1N复合蛋白酶水解产物、1A复合蛋白酶水解产物、2NA复合蛋白酶水解产物和2AN复合蛋白酶水解产物的氨基酸总量分别为18.18,18.47,26.70和24.49g·100g-1。因此,选用中性蛋白酶为水解榛子粕蛋白的最佳酶源;通过响应面分析,确定制备榛子粕抗氧化肽的最佳工艺条件为:温度43.7℃、时间1.7h、加酶量17000U·g-1,中性蛋白酶水解产物水解度为11.57%、DPPH清除率80.38%、氨基酸含量46.07g·100g-1;体外模拟胃肠消化后,榛子粕抗氧化肽的清除DPPH自由基的IC50升高3.27mg·mL~(-1)、氨基酸总量降低l0.05g·100g-1。     

北太平洋鱿鱼缠卵腺抗氧化酶解寡肽的制备

为探讨北太平洋鱿鱼(Todarodes pacificus)缠卵腺酶解寡肽的制备和抗氧化活性,以北太平洋鱿鱼缠卵腺为原料,选择碱性蛋白酶进行酶解,以水解度和DPPH自由基清除率为指标,经单因素和正交试验方法获得最佳酶解条件,超滤得到不同分子段多肽,通过测定还原能力、DPPH清除率、Fe~(2+)螯合能力、OH自由基清除率、超氧阴离子清除率评价不同分子量酶解多肽的抗氧化性,得出最佳分子段;采用琼脂糖凝胶G-25对最佳分子段进行分离,检测各峰对DPPH清除能力,得出最佳峰段后经HPLC进一步分离获得单一组分,由氨基酸测序仪进行N端降解测序得出目标肽序列。结果表明,碱性蛋白酶的酶解条件为温度50℃、酶解时间7 h、加酶量3 500 U/g、pH 9.0、料液比1∶6。经超滤得到的3～5 ku分子段抗氧化活性最强,经琼脂糖凝胶G-25分离得到3个峰,其中峰Ⅰ组分对DPPH清除率最好,当浓度为0.5 mg/m L时其DPPH的清除率为61.87%。经HPLC纯化得到单一峰,氨基酸序列测定为Ala-Tyr-Ala-Ser-Ser,相对分子质量为497.50。北太平洋鱿鱼缠卵腺酶解寡肽有较好的抗氧化活性。     

藜麦抗氧化肽制备工艺研究

采用酸性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和中性蛋白酶对藜麦蛋白提取液进行酶解制得抗氧化肽,通过单因素试验筛选出最佳蛋白酶。以DPPH自由基清除率为指标,通过响应面试验对酶解条件进行优化,并采用HPLC法对酶解液进行氨基酸种类及含量的测定。结果表明,藜麦抗氧化肽的最佳制备工艺为木瓜蛋白酶、酶解pH值6.63、加酶量2.36%、酶解温度58.44℃、酶解时间1.0 h。藜麦抗氧化肽中共含有18种氨基酸,其中丝氨酸的含量最高,为65.46%。     

藜麦抗氧化肽制备工艺的研究

采用酸性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和中性蛋白酶对藜麦蛋白提取液进行酶解制得抗氧化肽,通过单因素试验筛选出最佳蛋白酶。以DPPH自由基清除率为指标,通过响应面试验对酶解条件进行优化,并采用HPLC法对酶解液进行氨基酸种类及含量的测定。结果表明：藜麦抗氧化肽的最佳制备工艺为木瓜蛋白酶、酶解pH 6.63、加酶量2.36%、酶解温度58.44℃、酶解时间2.0 h。藜麦抗氧化肽中共含有18种氨基酸,其中丝氨酸的含量最高为65.46%。     

胰蛋白酶制备乌贼缠卵腺抗氧化活性多肽的研究

[目的]探讨胰蛋白酶制备乌贼缠卵腺抗氧化活性多肽的工艺及体外抗氧化活性.[方法]以乌贼缠卵腺为原料,用胰蛋白酶进行酶解,采用单因素和正交试验优化乌贼缠卵腺抗氧化活性肽的提取工艺;将酶解液超滤分成4个分子段,通过体外检测DPPH清除率、·OH清除率和还原力评价其抗氧化活性.[结果]胰蛋白酶酶解乌贼缠卵腺在加酶量2000 U/g、pH为8.5、料液比1:3、酶解时间8 h条件下得到的酶解物对DPPH的清除率最大.酶解液经超滤得到的<3 kD分子段的多肽具有良好的DPPH清除能力、·OH清除能力和还原能力.[结论]胰蛋白酶酶解制备的乌贼缠卵腺多肽具有较好的体外抗氧化活性,可作为抗氧化肽的理想来源.