豇豆籽肽的制备及抗氧化活性研究

[目的]采用酶法制备豇豆籽蛋白肽,并探讨其抗氧化活性。[方法]先用碱提酸沉法制备豇豆籽蛋白,然后分别用碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶水解制备豇豆籽肽,后者脱盐后进行DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子清除活性分析。[结果]碱性蛋白酶水解能力强于木瓜蛋白酶,2种酶水解后的豇豆籽肽对3种自由基均具有较好的清除活性。在相应浓度范围内,对DPPH自由基最大清除率分别为63.92%(碱性蛋白酶)和63.06%(木瓜蛋白酶),半数抑制浓度IC50分别为3.20和3.28 mg/ml;对羟基自由基最大清除率分别为87.66%(碱性蛋白酶)和85.88%(木瓜蛋白酶),相应IC50分别为4.21和4.89 mg/ml;对超氧阴离子自由基的最大清除率64.06%(碱性蛋白酶)和47.92%(木瓜蛋白酶)。[结论]研究可为豇豆籽蛋白肽的深度开发和综合利用提供一定的理论基础。     

不同蛋白酶对灰树花蛋白的水解度及水解产物的抗氧化活性

为明确不同蛋白酶对灰树花蛋白的水解度及水解产物的抗氧化活性,采用胃蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶+胰蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶分别水解灰树花蛋白,并测定不同蛋白酶对灰树花蛋白水解产物的抗氧化活性。结果表明:5种蛋白酶对灰树花蛋白的水解度由高到低的顺序依次为碱性蛋白酶胃蛋白酶+胰蛋白酶胃蛋白酶胰蛋白酶木瓜蛋白酶,以碱性蛋白酶的水解度最高,水解度达35.48%;碱性蛋白酶、胃蛋白酶、胃蛋白酶+胰蛋白酶的水解产物抗氧化活性均随着浓度的增加而提高,相同浓度下3种蛋白酶中以碱性蛋白酶水解产物的抗氧化活性最强,当其浓度为0.5mg·mL-1和1.0mg·mL-1时,对DPPH自由基的清除率达90%以上,与对照Vc相当。     

响应面试验设计优化鲢鱼鳞胶原蛋白抗氧化活性肽的制备条件

采用酶解法制备抗氧化活性肽,研究了鲢鱼鳞胶原蛋白抗氧化活性肽制备的优化条件。以水解度(DH)、DPPH·、超氧阴离子(O-2·)和羟基(·OH)自由基清除率为指标,比较碱性蛋白酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶对鲢鱼鳞胶原蛋白的酶解效果及酶解产物的抗氧化活性。结果表明:碱性蛋白酶酶解产物的抗氧化活性最强,对DPPH·、O-2·和·OH自由基的清除率分别为76.9%、43.1%和58.2%;采用响应面试验设计优化碱性蛋白酶制备鲢鱼鳞胶原蛋白抗氧化活性肽的条件,得到最优的制备条件为底物浓度5.47%,酶解时间4.24 h,酶添加量4 200 U/g,在此条件下,所得抗氧化肽对DPPH·、O-2·和·OH的清除率分别为79.6%、46.3%和63.5%。     

大黄鱼鱼肉蛋白水解制备抗氧化肽的工艺

以大黄鱼为原料,采用不同蛋白酶(碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶和复合蛋白酶)分别水解鱼肉,制备抗氧化肽;研究不同酶的水解效果,筛选出最佳的水解用酶;采用单因素试验,以蛋白水解度及水解液的还原力和超氧阴离子自由基(O-·2)清除力为指标,研究不同水解p H、酶添加量、水解温度、底物浓度和水解时间对水解效果的影响;在此基础上,采用Box-Behnken响应面设计法,以水解液的还原力为评价指标,对水解工艺参数进行优化.结果表明,中性蛋白酶为水解大黄鱼的最适用酶,其最佳工艺条件为:底物浓度26.55%、水解温度46℃、水解时间7.2 h、p H 7.0、酶添加量2400 U·g-1,在此条件下,水解液的还原力达到最大(0.967),此时,O-·2清除力为87.46%,蛋白水解度为36.51%.     

钙果仁活性肽的制备及其体内抗氧化活性评价

利用碱性蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶对钙果仁蛋白进行三酶复合分步水解制备活性肽,通过给正常小鼠和模型鼠灌胃不同剂量的钙果仁活性肽来研究其对试验小鼠的抗氧化作用。结果表明,经三酶水解后的钙果仁活性肽有较好的清除DPPH·自由基能力,其IC50值为1.06 mg/mL。另外,活性肽高剂量组还能够显著提高正常小鼠以及模型鼠血清、肝脏和肾脏中SOD和GSH-PX的活力,同时可显著降低其血清和肝脏中MDA的含量,但对降低肾脏中MDA的含量作用不显著,说明钙果仁活性肽可清除自由基对机体的损害,在小鼠体内有一定的抗氧化作用。     

藜麦抗氧化肽制备工艺的研究

采用酸性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和中性蛋白酶对藜麦蛋白提取液进行酶解制得抗氧化肽,通过单因素试验筛选出最佳蛋白酶。以DPPH自由基清除率为指标,通过响应面试验对酶解条件进行优化,并采用HPLC法对酶解液进行氨基酸种类及含量的测定。结果表明：藜麦抗氧化肽的最佳制备工艺为木瓜蛋白酶、酶解pH 6.63、加酶量2.36%、酶解温度58.44℃、酶解时间2.0 h。藜麦抗氧化肽中共含有18种氨基酸,其中丝氨酸的含量最高为65.46%。     

双酶分步酶解蚕蛹蛋白及其产物抗氧化活性的研究

以蚕蛹蛋白作为原料,选择出一种中性蛋白酶,与酸性蛋白酶结合,组成复合蛋白酶对蚕蛹蛋白进行了联合分步酶解。从总抗氧化能力、清除DPPH·能力、抑制羟基自由基能力、抗超氧阴离子自由基能力等方面分析了酶解产物蚕蛹蛋白肽的抗氧化活性,表明混合蛋白酶分步水解蚕蛹蛋白所得产物具有良好的抗氧化活性。     

藜麦抗氧化肽制备工艺研究

采用酸性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和中性蛋白酶对藜麦蛋白提取液进行酶解制得抗氧化肽,通过单因素试验筛选出最佳蛋白酶。以DPPH自由基清除率为指标,通过响应面试验对酶解条件进行优化,并采用HPLC法对酶解液进行氨基酸种类及含量的测定。结果表明,藜麦抗氧化肽的最佳制备工艺为木瓜蛋白酶、酶解pH值6.63、加酶量2.36%、酶解温度58.44℃、酶解时间1.0 h。藜麦抗氧化肽中共含有18种氨基酸,其中丝氨酸的含量最高,为65.46%。     

不同蛋白酶水解鹿鞭制备活性肽的比较研究

[目的]研究制备鹿鞭活性肽的最佳蛋白酶。[方法]选用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、复合蛋白酶和胰蛋白酶分别在最适条件下水解鹿鞭,以水解物鹿鞭活性肽的水解度(DH)及其对还原能力、抑制硫代巴比妥酸(TBARS)的作用和清除DPPH自由基作用的影响为指标,优选出最佳水解蛋白酶。[结果]碱性蛋白酶水解鹿鞭产物鹿鞭活性肽的水解度、还原能力、对卵磷脂脂质氧化的抑制作用和DPPH自由基的清除率都为最高。[结论]碱性蛋白酶水解鹿鞭产物鹿鞭活性肽具有很好的抗氧化性。     

藏鸡蛋卵白蛋白酶解制备抗氧化肽及其体外抗氧化活性

采用碱性蛋白酶水解藏鸡蛋卵白蛋白,制备抗氧化活性肽,以水解度和超氧阴离子自由基(O_2~-·)清除率为指标,通过单因素试验和正交试验确定最佳酶解参数,并对酶解多肽的体外抗氧化活性进行测定。结果表明:碱性蛋白酶酶解的最适条件为底物质量分数2%、酶解时间5 h、酶添加量7 000 U/g;在最适条件下,碱性蛋白酶酶解所得抗氧化肽的O_2~-·、DPPH自由基、羟基自由基(·OH)清除率分别为71.75%、56.47%、84.46%;还原力、抗脂质过氧化能力分别为0.87、82.83%。     

重组米曲霉中性蛋白酶(rNpI)水解大豆蛋白苦味及其抗氧化性研究

为探讨重组中性蛋白酶rNpI对大豆蛋白的水解、水解产物的苦味及产物抗氧化性的影响,进行水解度测定、水解产物苦味值感官评定,以及水解产物清除DPPH自由基能力、还原能力、和氧自由基清除能力测定。结果表明,重组米曲霉rNpI对大豆蛋白有较高的水解度,当酶与底物比(E/S)为1000、4000、8000U/g时,水解度分别为7.8%、11.5%和16.0%。对其水解产物进行苦味评价,结果发现,r Np1大豆蛋白水解产物苦味值明显比Alcalase的水解产物低。不同的抗氧化方法测定水解产物的抗氧化活性表明,r Np1对大豆蛋白的水解产物具有较高的清除DPPH自由基能力、还原能力和氧自由基清除能力。通过超滤的方法对E/S为4000U/g的水解产物进行分离,得到分子量10ku、3~10ku和3ku的组分,分别测定其抗氧化性,发现抗氧化性能力与肽的分子量大小有关。重组米曲霉rNpI对植物蛋白有很高的水解效率,其水解产物苦味值低且具有较高的抗氧化性,在食品、饲料等行业有很好的应用前景。     

复合酶制备抗氧化活性核桃多肽工艺优化

以碱性蛋白酶与木瓜蛋白酶复合水解核桃蛋白制备抗氧化活性多肽的工艺条件优化为对象,通过研究酶解时间、酶解温度、酶与底物浓度比及复合酶比例对核桃蛋白酶解物清除DPPH·能力的影响,并利用正交试验优化工艺条件,以提高核桃蛋白多肽对DPPH·的清除率。结果表明,酶解时间、酶解温度、酶与底物浓度比及复合酶比例对核桃蛋白酶解物清除DPPH·能力有一定影响;当木瓜蛋白酶与碱性蛋白酶复合酶解温度为45℃、时间1.5h、酶与底物浓度1500U/g、pH值7.0、复合酶比例为2∶1时,酶解物清除DPPH·的能力最强,清除率达78.7%。     

鹿血水解物抗氧化能力研究

本文分别选用碱性蛋白酶、中性蛋白酶和复合蛋白酶在最适条件下水解鹿血,以鹿血水解物的水解度、DPPH自由基清除能力和总还原力为研究指标,测定和比较不同蛋白酶作用下鹿血水解物的抗氧化活性能力,优选出最佳的蛋白酶种类,并验证鹿血水解物具有一定的抗氧化能力,为鹿血的合理利用和开发提供理论依据。     

欧李仁抗氧化肽的免疫功能及其表征结构的研究

本文研究了经三酶(碱性蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶)复合水解制备的欧李仁抗氧化肽的免疫调节作用以及确定欧李仁抗氧化肽的表征结构。通过给正常小鼠灌胃不同剂量的欧李仁抗氧化肽来研究其对正常小鼠的免疫调节作用;并利用葡聚糖凝胶Sephadex G-25层析法对制备的欧李仁肽进行分离纯化并收集各纯化组分,将对DPPH·自由基的清除能力最强的组分进行表征结构的鉴定。试验表明欧李仁抗氧化肽能提高小鼠免疫器官指数,还可以增强小鼠淋巴细胞的增殖能力以及因绵羊红细胞致敏而出现的肿胀反应,还可促进小鼠血清溶血素和溶血空斑的形成以及小鼠的碳廓清能力。欧李仁多肽液经葡聚糖凝胶Sephadex G-25分离纯化后主要获得有4个组分,且在相同浓度下(2mg/ml)第4个组分对DPPH·自由基的清除能力最强,其清除率可达95. 6%,经质谱鉴定这个组分有2个肽片段分别为Leu-Ala-Thr-Ala-Pro-Ser-Arg和Leu-Asp-Gln-Val-Pro-Arg。研究表明欧李仁抗氧化肽对正常小鼠具有较好的免疫调节作用。     

鹰嘴豆蛋白Alcalase水解工艺及其体外抗氧化活性的研究

研究Alcalase蛋白酶水解鹰嘴豆蛋白的工艺、不同水解度鹰嘴豆蛋白水解产物的体外抗氧化能力以及分子量分布.在单因素基础上以水解度和还原能力为指标设计正交试验得到水解最佳条件为:温度50℃,[E]/[S]2%,pH值8.0,反应时间40 min.以此水解条件进行试验测得水解度为15.04%,还原能力为0.270;水解度(DH)为15%时鹰嘴豆蛋白水解产物的还原能力、清除DPPH自由基、清除羟基自由基(·OH)和抑制超氧阴离子能力最高.从分子排阻色谱图中可以看到,随着水解度的提高,肽的分子量分布总体表现为大分子量肽逐渐减少,小分子量肽的含量逐渐增加.而具有最佳体外抗氧化活性的鹰嘴豆蛋白水解产物的分子量主要集中在300～1500 Da之间.     

沙蚕不同酶解产物抗氧化效果研究

海洋生物蛋白资源是海洋生物资源的重要组成部分，对其进行高值化加工利用是海洋生物技术研究的重要内容，酶解是提高海洋蛋白功能性的有效方式，但酶种类不同,其作用位点不同，可能对酶解产物的活性有一定影响。为了探究了沙蚕不同酶解产物的抗氧化性，采用6种蛋白酶（碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、风味蛋白酶、胰蛋白酶）酶解沙蚕，测定了不同酶解时间下的水解度、分子量分布、3种自由基（DPPH、O-2·、·OH）的清除率等反映抗氧化水平的指标。结果表明：胰蛋白酶小分子肽得率最高，为70.47%；胃蛋白酶次之，为68.12%。酶解液浓度为5 mg·mL-1时，胃蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解4 h时，DPPH清除率效果较好，分别为90.87%和90.52%。胃蛋白酶酶解3 h时，O-2·清除率效果最佳，为89.78%；木瓜蛋白酶酶解3 h时，O-2·清除率效果次之，为57.99%。碱性蛋白酶酶解4 h和胃蛋白酶酶解2 h时，·OH清除率效果较好，分别为85.07%和83.37%。胰蛋白酶和胃蛋白酶对提高酶解液水解度和小肽生成作用明显，胃蛋白酶的酶解产物对3种自由基清除率较好，更适用于制备沙蚕抗氧化肽。     

高短肽得率羊骨酶解物的制备及其体外抗氧化活性

以短肽得率为指标,响应面法优化羊骨碱性蛋白酶水解工艺,对酶解物的抗氧化活性进行研究,为羊骨的高值利用奠定基础。结果表明,以所得最优工艺即骨粉浓度8.24%,p H值9,加酶量4.35%,46℃水解5 h制备酶解物,短肽得率达71.19%;酶解物对3种自由基的清除率随浓度的增加而增加,对3种活性氧的清除能力为DPPH·O_2~-··OH;0.3 mg/m L酶解物对DPPH·,O_2~-·,·OH的清除率分别为46.21%,29.82%和24.16%。由此可见,以最优工艺制备的、富含短肽的羊骨碱性蛋白酶解物具有体外抗氧化活性,有望应用于饲料、食品、医药等领域。     

南极磷虾肽制备工艺优化及体外抗氧化研究

本文研究了3种不同的蛋白酶(木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶)分别水解南极磷虾得到多肽的体外抗氧化活性,以清除超氧阴离子、羟自由基和DPPH的能力为指标。结果表明,木瓜蛋白酶水解制备的多肽抗氧化活性比较好,其次是碱性蛋白酶。用响应面法优化木瓜蛋白酶水解南极磷虾制备多肽的工艺参数,经凝胶电泳测定其分子量,显示该多肽有3个明显条带,其分子量大多位于3~7 ku。将上述多肽溶液脱氟后经超滤系统分离,按分子量(molecular weight,MW)大小分为MW≥10 ku,5~10 ku,MW≤5 ku的3种多肽,并比较其抗氧化活性的强度。在本实验体系浓度范围内,3种不同分子量的多肽对超氧阴离子、羟自由基、DPPH的清除能力有所差异,随着多肽浓度的增加,其对清除能力也增大,呈明显的剂量依赖关系。     

双酶水解麦胚制备抗氧化肽的工艺优化

以麦胚为原料,制备具有抗氧化活性的麦胚肽。对碱性蛋白酶Alcalase 2.4 L与胰蛋白酶双酶组合酶解麦胚的工艺进行优化。以水解度和1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH)自由基清除率为考察指标,探讨酶与底物浓度的比值([E]/[S])、酶降温度和酶解时间对制备麦胚抗氧化肽工艺的影响,采用Box-Behnken中心组合设计和响应面法(RSM)优化了麦胚双酶水解的工艺条件。结果表明:双酶水解麦胚制备抗氧化肽的工艺条件为底物浓度10.0%、碱性蛋白酶与胰蛋白酶酶活比1∶1、[E]/[S]为0.041 3、酶解温度50.3℃、酶解时间2.03 h、pH8.0。验证试验表明,在此条件下,麦胚水解度和抗氧化肽对DPPH自由基清除率分别为16.65%和50.16%;其抗氧化活性小于10 mg/ml VC。     

泥鳅蛋白抗氧化肽的Plastein反应修饰研究

采用中性蛋白酶水解泥鳅蛋白制备抗氧化肽,以DPPH自由基清除能力为指标,用木瓜白酶对泥鳅蛋白抗氧化肽进行Plastein反应修饰研究。通过单因素试验研究了外源氨基酸种类、pH值、时间、E/S、温度和外源氨基酸的添加量对泥鳅蛋白抗氧化肽Plastein反应修饰的影响,在此基础上采用响应面法对泥鳅蛋白抗氧化肽Plastein反应修饰工艺进行了优化。结果表明,泥鳅蛋白抗氧化肽Plastein反应修饰的最佳条件为:底物浓度40%、组氨酸添加量为0.5 mmol·g^-1、E/S为1 782.49 U·g^-1 、pH值9.0、温度35 ℃、时间3 h,此条件下制备的Plastein反应修饰产物的抗氧化活性是修饰前的1.99倍,其对DPPH自由基的清除率为(77.98±0.08)%。