H－Y抗血清的制备、检测与应用

要用纯系（ＢＡＬＢ／ｅ）雄性小鼠制备Ｈ－Ｙ抗原对雌性大鼠进行免疫，可获得特异性的Ｈ－Ｙ抗体。经初步检测，Ｈ－Ｙ抗血清的效价为１：３２。用ＥＬＩＳＡ检测结果为阳性反应，抗血清与鼠精子有特异性抑制的凝集作用，凝集反应的程度随抗血清的稀释而降低，对牛的Ｙ精子也有特异性抑制，经抗血情感作过的牛精子荧光反应消失。曾两次用Ｈ－Ｙ抗血清感作过的牛精液对母牛进行体外输精，试验结果雌性比率分别达到８１．８０％和８０％。     

抗牛H—Y抗原单克隆抗体的研制试验

Ｈ－Ｙ抗原是位于Ｙ染色体上的基因位点所编码的细胞膜抗原，能直接或间接地诱导原始性腺分化为睾丸，以牛睾丸组织匀浆作为抗原，免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，用杂交瘤细胞技术制备的单克隆缺本６Ｆ，７Ｈ与部分牛精子呈阳性反应。     

鸡传染性支气管炎（IB）诊断方法的研究

本试验用鸡胚大量繁殖鸡传染性支气管炎病毒,收集尿囊液,用１％胰蛋白酶处理制备ＩＵＢＶ血凝抗原,建立了血凝－血凝抑制检测ＩＢＶ抗体的方法,其特异性强,操作简便。另外,本试验建立Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ方法用于检测ＨＢＶ,病料经处理后,点样于硝酸纤维素膜,加兔抗ＩＢＶ抗体,经ＰＰＡ－ＤＡＢ－Ｈ２Ｏ２显色,其检测结果与双抗体夹心ＥＬＩＳＡ的检测结果一致。     

奶牛类乙型肝炎病毒感染的诊断

河南省某奶牛场，采成年母牛血清２００份，鲜牛分，用ＥＬＩＳＡ法检测乙型肝炎“两对半”，阳性结果如下：牛血清ＨＢｓＡｇ７份，抗－ＨＢｓＡｇｌ份，抗－ＨＢｅ２份，抗－ＨＢｃ零份。１００份鲜牛奶阳性数：ＨＢｓＡｇ２份，抗－ＨＢｓ１０份，ＨＢｅＡｇ１份，抗－ＨＢｅ２，抗－ＨＢｃ零份。电镜观察到ＨＢＶ核心抗原阳性血清中有球形病毒颗粒。     

哈尔滨地区大麦黄矮病毒株系鉴定

从黑龙江省哈尔滨地区田间采集典型小麦黄矫病株２５份，用无毒麦二叉蚜，禾谷缢管蚜传毒，经生物学分离并用ＢＹＤＶ－ＧＡＶ，ＰＡＶ，ＲＰＶ，ＳＧＶ四种抗血清静 进行酶联免疫吸附测定。结果表明：２５份标样中由麦长管蚜和麦二叉物有２２份，与ＧＡＶ抗血清有强反应，而与ＰＡＶ，ＲＰＶ，ＳＧＶ抗血清无反应。     

H－Y单克隆抗体的制备方法

用Ｂａｌｂ／ｃ雄小鼠的脾细胞和皮肤组织对同系雌小鼠脾脏作一次直接免疫和５次腹腔加强免疫，雌小鼠产生良好的免疫应答。其抗血清用未经免疫的雌小鼠脾细胞吸收后，经细胞毒性法检测，Ｈ－Ｙ抗血清的效价可达１：１０２４；选择免疫应答最好的２只雌小鼠，取其脾细胞与ＮＳ－１骨髓瘤细胞进行融合，融合率１００％，经３次有限稀释克隆后，取４只阳性最强的杂交瘤细胞制备腹水。取其中一株的腹水采用胚胎细胞毒法进行特异性鉴定，结果其对２０个正常胚胎中的７个有杀伤溶解现象。４株细胞系分泌的抗体（腹水）以精子细胞毒法测定其效价分别为１：５１２、１：５１２、１：２５６和１：１２８。     

H—Y单克隆抗体的制备方法

用Ｂａｌｂ／ｃ雄小鼠的脾细胞和皮肤组织对同系雌小鼠脾脏作一次直接免疫和５次腹腔加强免疫，雌小鼠产生良好的免疫应答。其抗血清用未经免疫的雌小鼠脾细胞吸收后，经细胞毒性法检测，Ｈ－Ｙ抗血清的效价可达１：１０２４；选择免疫应答最好的２只雌小鼠，取其脾细胞与ＮＳ－１骨髓瘤细胞进行融合，融合率１００％，经３次有限稀释克隆后，取４只阳性最强的杂交瘤细胞制备腹水。取其中一株的腹水采用胚胎细胞毒法进行特异性鉴定，结果其对２０个正常胚胎中的７个有杀伤溶解现象。４株细胞系分泌的抗体（腹水）以精子细胞毒法测定其效价分别为１：５１２、１：５１２、１：２５６和１：１２８。     

牛精子膜麦芽凝集素结合糖蛋白的分离与定位

牛精子膜用非离子去污剂ＮＰ－４０增溶，经固相凝集素亲和层析，初步分离了精子膜麦芽凝集素结合糖蛋白，经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染色显示出了四条蛋白质带，分子量分别为７８，６０，４２和３３ｋＤ。用分离到的糖蛋白制备抗血清，对牛精子进行免疫细胞化学标记，结果顶体区显示为强阳性，与麦芽凝集素亲和细胞化学的染色一致。用抗血清处理精子再进行亲和细胞化学染色时，顶体区的麦芽凝集素结合糖残基多数被封闭，揭示     

精子性别化对乳牛性别控制的试验

试验于1991年在华南农业大学实验乳牛场进行,初步成功地获得乳牛雌性控制率达到81.8％的国内外先进水平,计有十头乳牛产犊:二雄、九雌,其中一头产异性双椟,研究试验结果包括三个方面:一是研制成具有一定的纯度和工作效价的H-Y抗血清;二是这种H-Y抗血清IgG确实存在有抑制牛Y染色体精子的基因抗体;二是掌握H-Y抗血精IgG与牛精液发生“感作”和导致正常受胎的技术方法。试验应用免疫遗传学原理,进一步证明H-Y抗血清IgG有抑制牛Y染色体精于的受精能力而获得较高的雌性控制率,具有很大的生物科学与经济价值     

兔化高免褪黑激素抗血清的制备

运用Ｍａｎｎｉｃｈ反应,将褪黑激素与ＢＳＡ联结起来制备完全抗原,用ＵＶ－２６０紫外仪测定了ＭＬＴ与ＢＳＡ的联结比为１２：１,用此抗原免疫新西兰大耳兔５只,经过６次免疫后,发现抗体效价平均１：１００００（ＥＬＩＳＡ）,将抗血清经Ｎａ２ＳＯ４沉淀,Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ｇ－２００过柱层析、收集纯化抗体,用分光光度计７２１ 春蛋白浓度,经５－羟色胺等阻断试验发现抗体特异性较高。     

鸡传染性支气管炎病毒单克隆抗体的研制与鉴定

用经蔗糖密度梯度离心纯化的鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ，Ｍ４１）作为抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，通过常规淋巴细胞杂交瘤技术产生杂交瘤细胞，经ＥＬＩＳＡ筛选，获得了４株能分泌特异性抗ＩＢＶ单克隆抗体的细胞系，分别命名为４ＡＣ１、４ＡＦ１、６ＤＨ８及２ＤＨ１０。４株单抗的亚类都属于ＩｇＧ２ｂ，在Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ试验中，４ＡＦ１、６ＤＨ８２株单抗特异性地识别ＩＢＶ的核衣壳蛋白（Ｎ）；经ＥＬＩＳＡ测定，各株单抗４０ｈ培养上清效价达１０－２～１０－４，第７天腹水效价达１０－５～１０－６，４ＡＦ１、６ＤＨ８与所试７个ＩＢＶ标准株及２个ＩＢＶ分离株都发生反应     

间接ELISA法检测人血清抗HBcIgA及其应用

目的：改良抗ＨＢｃＩｇＡ的检测方法，并探讨抗ＨＢｃＩｇＡ与肝脏损伤程度的关系，方法：通过预测处理患者血清，以羊抗人ＩｇＡ－ＨＲＰ（ＳＡＨ－ＩｇＡ－ＨＲＰ）为指示系统，建立间接ＥＬＩＳＡ法，并对２８０例临床血清进行检测。结果：经与抗体捕获酶联夹心法相比较，两种方法所检测出的抗ＨＢｓＩｇＡ阳性率之间及Ｓ／Ｎ值之间的差异均我显著性，在２８０例临床血清标本中，重症乙型肝炎，慢性活动性肝炎（简称慢活肝）合并     

抗肠结肠炎0∶9型耶尔辛氏菌单克隆抗体及其特性的研究

用耶尔辛氏菌０：９血清型（Ｙ．ｅ．０：９）抗原免疫的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠脾细胞与ＦＯ骨髓瘤细胞进行融合，获得９株分泌特异性抗Ｙ．ｅ．０：９抗体的杂交瘤细胞，命名为Ｙ＿９Ａｂ－ｌ～Ｙ_９Ａｂ－９．其产生的单抗有高度特异性，不仅不与布氏杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌等反应，也不与其它型（０：４１．４２除外）的肠结肠炎耶尔辛氏菌反应。     

岭南牛的染色体研究

研究了１１头（６♂５♀）岭南牛的核型、Ｇ带、Ｃ带和Ａｇ－ＮＯＲ，结果发现，岭南牛群体内Ｙ染色体存在多态性，Ｙ染色体有中和近端着丝粒染色体，中着丝粒Ｙ染色体的Ｇ带和Ｃ带与普通牛（Ｂｏｓ ｔａｕｒｕｓ）相同，近端着丝粒Ｙ染色体Ｇ带和Ｃ带与瘤牛（Ｂｏｓ ｉｎｄｉｃｕｓ）相同。统计了２９２８个细胞的Ａｇ－ＮＯＲｓ数目，每细胞平均Ａｇ－ＮＯＲｓ数为５．３７７±０．２７９，变化范围３￣１０个。认为岭南牛是我国     

应用斑点免疫技术快速检测柑桔溃疡病菌

应用改进的斑点免疫技术在国产微孔滤膜上检测柑桔溃疡病菌（Ｘａｎ－ｔｈｏｍｏｎａｓａｘｏｎｏｐｏｄｉｓｐｖ．ｃｉｔｒｉ）。结果表明，靶细菌检测下限为１×１０４细胞／ｍｌ，柑桔无症材料浸出液稀释（１２８倍）仍可检出。经柑桔叶面腐生黄单胞及近缘细菌交叉吸收，提高了多克隆抗血清特异性，能有效地避免假阳性。３种ＨＲＰ－标结结合物的效果为ＨＲＰ－ＳｐＡ＞ＨＲＰ－ＩｇＧ（鼠抗兔）＞ＨＲＰ－ＩｇＧ（羊抗兔）。封闭液采用ＴＢＳ＋０．１％曲拉通或０．５％吐温２０，吐温８０均可获得白色滤膜背景。对全国８省３８县５１８个柑桔无症样品ＤＩＡ检验结果，平均带菌率３１．８２％，符合实际病情。     

H-Y单克隆抗体的特异性鉴定

Ｈ－Ｙ抗原是存在于细胞膜的一种糖蛋白，属于次要组织相容性抗原，在哺乳动物中是雄性特异的基因表达产物［１］。Ｈ－Ｙ抗原的发现，引起了关于Ｈ－Ｙ抗原对精子选择和胚胎性别鉴定的广泛研究。无论是应用免疫技术分离Ｘ精子与Ｙ精子，还是进行胚胎的性别鉴定，都必须依...     

岭南牛的染色体研究

研究了１１头（６♂５♀）岭南牛的核型、Ｇ型、Ｃ带和Ａｇ－ＮＯＲ＿ｓ。结果发现，岭南牛群体内Ｙ染色体存在多态性，Ｙ染色体有中和近端着丝粒染色体，中着丝粒Ｙ染色体的Ｇ带和Ｃ带与普通牛（Ｂｏｓｔａｕｒｕｓ）相同，近端着丝粒Ｙ染色体Ｇ带和Ｃ带与瘤牛（Ｂｏｓｉｎｄｉｃｕｓ）相同。统计了２９２８个细胞的Ａｇ－ＮＯＲ＿ｓ数目，每细胞平均Ａｇ－ＮＯＲ＿ｓ数为５．３７７±０．２７９，变化范围３～１０个。认为岭南牛是我国北方普通牛与南方肩峰牛两大牛群汇合交汇点的南部边缘之一。     

绵羊血清,肝,肌肉中HBsAg的初步调查

应用ＥＬＩＳＡ技术对３０份羊血清，肌肉肝脏标本进行了ＨＢＶ－ＨＢｓＡｇ水平检测，结果血清阳性率２０％，肝脏阳性率１０％。表明羊体内含有ＨＢＶ－ＨＢｓＡｇ相似的类属抗原及相关抗体，提示对羊体内检出ＨＢＶ－ＨＢｓＡｇ应起重视，建议对羊开展乙肝的在ＨＢＣ与人ＨＢＶ的异同及关系，寻找ＨＢＶ动物模型．     

某猪场乙型肝炎病毒感染的血清流行病学调查报告

于某大型养猪场随机抽样人血清１２０份，猪血清２０４份，分别进行乙肝病毒“两对半”检测。１２０份人血清阳性数：ＨＢｓＡｇ１９份，抗－ＨＢｓ３４人份；ＨＢｅＡｇ７人份，抗ＨＢｅ２６人份；抗－ＨＢｃ１７人份。其中ＨＢｓＡｇ，ＨＢｅＡｇ，抗－ＨＢｅ的三阳性为５人份。２０４份猪血清阳性数：ＨＢｓＡｇ２４份，抗－ＨＢｓ３２份；ＨＢｅＡｇ１４份，抗－ＨＢｅ１份；抗－ＨＢｃ零份。     

黄瓜花叶病毒（CMV）高效价抗血清的制备及其在FLISA中的应用

以提纯的ＣＭＶ作为抗原，经静脉注射、肌肉注射和足垫注射等对家兔进行免疫，获得高效价的抗血清（琼脂双扩散效价为１／２５６）；在间接ＥＬＩＳＡ试验过程中，用ＰＢＳ＋０．０５％ＴｒｉｔｏｎＸ－１００作为样本研磨液，用１：１６０００稀释度的ＣＭＶ抗血清或Ｚμｇ／ｍｌＣＭＶ抗血清的ＩｇＧ作为第一抗体，用１：１０００稀释度的冻干辣根过氧化物酶标记的羊抗兔的ＩｇＧ作为第二抗体，以待测样本光密度值与阴性对照光密度值之比大于或等于３作为判断待测样本为阳性反应的标准，结果表明：间接ＥＬＩＳＡ试验的灵敏度比生物检测的灵敏度要高３２～１６０倍。用间接ＥＬＩＳＡ检测矮牵牛的病毒样本３０份，ＣＭＶ占７０％。