H－Y抗血清的制备、检测与应用

要用纯系（ＢＡＬＢ／ｅ）雄性小鼠制备Ｈ－Ｙ抗原对雌性大鼠进行免疫，可获得特异性的Ｈ－Ｙ抗体。经初步检测，Ｈ－Ｙ抗血清的效价为１：３２。用ＥＬＩＳＡ检测结果为阳性反应，抗血清与鼠精子有特异性抑制的凝集作用，凝集反应的程度随抗血清的稀释而降低，对牛的Ｙ精子也有特异性抑制，经抗血情感作过的牛精子荧光反应消失。曾两次用Ｈ－Ｙ抗血清感作过的牛精液对母牛进行体外输精，试验结果雌性比率分别达到８１．８０％和８０％。     

H—Y抗血清的制备,检测与应用

用纯系（ＢＡＬＢ／ｅ）雄性小鼠制备Ｈ－Ｙ抗原对雌性大鼠进行免疫，可获得特异性的Ｈ－Ｙ抗体。经初步检测，Ｈ－Ｙ抗血清的效价为１：３２。用ＥＬＩＳＡ检测结果为阳性反应，抗血清与鼠精子有特异性抑制的凝集作用，凝集反应的程度随抗血清的稀释而降低，对牛的Ｙ精子也有特性抑制，经抗血清感作过的年精子荧光反应消失。曾两次用Ｈ－Ｙ抗血清感作过的牛精液对母牛进行体外界输精。试验结果雌性比率分别达到８１．８０％和８０５     

应用PCR技术从牛肌肉组织中进行性别鉴定

应用牛肌肉组织X和Y染色体上的成釉蛋白基因第五内含因子的DNA序列，设计了一对特异性PCR引物，通过PCR扩增，分别从雌性和雄性牛肌肉组织中扩增出不同的条带，从而达到性别鉴定的目的。具有较高的应用价值。     

兔H-Y抗血清的制备和验证

本研究选取1.5~2.0 kg体重的新西兰兔2窝,提取同窝公兔睾丸H-Y抗原并测定蛋白浓度。采取2种不同的免疫方法,制备兔H-Y抗血清,经Western-blot技术检测兔睾丸H-Y抗原组分,应用ELISA法检测抗血清效价,其中5份抗血清中只有0830#产生较高的效价,达1:100以上。本试验结果为兔睾丸抗原组分的测定和兔H-Y抗血清的效价测定提供了一种新的方法。     

Y染色体多态性与中国黄牛起源和分类研究

通过常规法、G带和C带对7个黄牛品种染色体进行系统研究所获得的资料,同时汇集了近20年来中国境内22个黄牛品种和1个大额牛种共计30个黄牛品种（其中4个外来牛品种）染色体的研究资料,分析和探讨了中国黄牛的起源、进化与分类。结果表明,中国黄牛Y染色体具有多态性,有中、亚中和近端着丝点Y染色体。中国北方黄牛多为中部和亚中部着丝点Y染色体,南方黄牛多近端丝点Y染色体,中原黄牛在品种内个体间多具有中、亚中和近端着丝点Y染色体3种类型。说明中国黄牛起源的多元性,即源于普通牛和瘤牛。在进化过程中,中国北方黄牛受普通牛的影响大,南方黄牛受瘤牛的影响大,中原黄牛同时受普通牛和瘤牛的影响,是由普通牛和瘤牛长期交汇融合形成的。根据26个黄牛品种Y染色体形态类型,绘制了中国黄牛Y染色体在中国的分布地域图。     

用H-Y抗血清对大鼠胚胎进行性别鉴定的研究

利用高度近交系大鼠的新生仔睾丸作抗原对处女大鼠进行免疫,制得 H-Y 抗血清.将同系大鼠的桑椹胚置于含有抗血清的培养液中体外培养5～6小时.结果表明其中部分胚胎能继续发育至囊胚(46.7%);另一部分胚胎停滞发育(53.3%),但解除抗体后重新恢复发育能力(34%).经胚胎移植后证明,前者约有79%发育为雌鼠,而后者约86%发育为雄鼠.由此可见,H-Y 抗血清对雄性胚胎具有特异性的抑制作用.用同样方法免疫远交系大鼠,所得抗血清不能对雄性胚胎产生抑制作用.     

精子中H-Y抗原的蛋白和mRNA表达背离

目的:进一步验证成熟精子中是否存在H-Y抗原的mRNA,并探讨精子mRNA的保留机制。方法:采集健康男性志愿者的精液,通过上游法纯化精子,使用多克隆抗H-Y抗原的IgY抗体和FITC标记的兔抗鸡IgG对精子进行免疫组化和流式细胞仪检测,观察成熟Y精子膜表面是否带有H-Y抗原。提取成熟精子总RNA,用RT-PCR的方法观察精子mRNA中是否含有H-Y抗原的mRNA。结果:免疫组化实验显示可在许多精子的头部与尾部的交界处非常清晰地看到H-Y抗原的荧光;流式细胞仪检测显示49.86%精子为H-Y抗原阳性。RT-PCR结果显示,未扩增到H-Y抗原的mRNA特异性条带。结论:成熟精子表面存在有H-Y抗原,但未检测到H-Y抗原的mRNA。     

猪链球菌荚膜多糖抗血清的制备及在血清分型中的应用

为获得猪链球菌荚膜多糖及其抗血清,采用高压破碎法、乙醇分级沉淀法、酶解法以及Sevage法提取纯化了猪链球菌2、3、7、9型荚膜多糖,采用己二酸二酰肼(ADH)间桥法将荚膜多糖与牛血清蛋白(BSA)偶联,将其制备成油乳疫苗免疫BALB/c纯系雌性小鼠制备抗血清,同时制备了猪链球菌2、3、7、9型全菌灭活苗抗血清进行了间接ELISA试验及玻片试验检测。试验结果显示,制备了高纯度的荚膜多糖,对荚膜多糖-牛血清白蛋白偶联物分析,荚膜多糖偶联蛋白后的分子量变大,荚膜多糖与牛血清白蛋白偶联比为1∶1,免疫小鼠表现出较高的免疫原性。而将单独的4种荚膜多糖以及荚膜多糖与牛血清白蛋白(牛血清白蛋白)混合作为比较也免疫小鼠不能激活免疫系统产生IgG抗体,不具有免疫原性。荚膜多糖结合蛋白抗血清与全菌灭活苗抗血清同时进行交叉ELISA以及玻片凝集试验,结果表明这4型荚膜多糖结合蛋白抗血清不与其他型菌株发生反应,具有型特异性,而全菌灭活苗抗血清与其他型菌株会发生一定程度的交叉反应。此研究结果为猪链球菌亚单位疫苗的研制以及猪链球菌分型试剂的制备提供了试验依据。     

抗伤寒杆菌Fe-SOD血清对鼠伤寒杆菌攻击小鼠的免疫保护作用

目的:制备兔抗伤寒杆菌Fe-SOD血清,并研究其对鼠伤寒杆菌攻击小鼠的免疫保护作用,探讨SOD与沙门氏菌致病性的关系.方法:用纯化的伤寒杆菌Fe-SOD免疫家兔,制备兔抗SOD血清,并用ELISA法检测抗血清效价;免疫电泳、双向琼脂扩散试验和抗血清对酶活性抑制试验检测抗血清的特异性.将所制备的抗血清与鼠伤寒杆菌混合,放37℃30 min,经腹腔注入小鼠体内,并观察3 d和7 d小鼠的存活情况,以确定抗血清的免疫保护作用.结果:抗血清的ELISA效价为1:10240,免疫电泳结果显示抗血清与纯化的伤寒杆菌Fe-SOD及无细胞溶解物在相同位置各只形成一条沉淀线;双向琼脂扩散试验结果显示抗血清不与牛红细胞SOD形成沉淀线,但抗血清对酶活性抑制试验结果显示抗血清可抑制24.92%的红细胞SOD活性,说明伤寒杆菌Fe-SOD与牛红细胞SOD有低度交叉反应.抗血清可抑制42.58%～73.38%的沙门氏菌无细胞溶解物中SOD活性.经抗血清处理过的5LD50鼠伤寒杆菌攻击的小鼠3 d和7 d的存活率分别为90%和60%,均明显高于对照组(P＜0.01或P＜0.05).结论:抗伤寒杆菌Fe-SOD血清对受鼠伤寒杆菌攻击的小鼠具有交叉免疫保护作用,SOD可能是沙门氏菌共同的保护性抗原.提示SOD与沙门氏菌的致病性有关.     

中国黄牛Y染色体多态性及品种起源演变的探讨

 用G带、C带、RBA带、常规和C带或RBA带连续染色技术研究了中国9个地方黄牛品种的66头人工授精用公牛、41头小公牛和12头母牛的染色体，着重研究了它们Y染色体的多态性。北方的蒙古牛和延边牛是无肩峰牛，具有普通牛核型，其Y染色体分别为亚中和中着丝点。中原地区的秦川牛、晋南牛在每个品种中均发现了亚中、中和近端着丝点Y染色体，而郏县红牛中存在着中和近端着丝点两种形态Y染色体、这几个品种应是由肩峰牛和无肩峰牛长期融合形成的。西镇牛、鲁西牛、南阳牛、温岭高峰牛均具有瘤牛类型的Y染色体，是以瘤牛为基础形成的品种。经RBA带鉴别，西镇牛Y染色体无短臂，为端着丝点染色体，其余3个品种为近端着丝点Y染色体。结合国内有关黄牛染色体研究材料，讨论了中国黄牛的分类和起源。认为中国的无肩峰黄牛除来源于具亚中着丝点Y染色体的蒙古牛之外，还应来源于另一种分布范围很广的，具中着丝点Y染色体的无肩峰牛。鉴于现有的肩峰黄牛品种中Y染色体形态和带型差异，可能古代生存于中国的瘤牛已发生分化。中国黄牛诸品种应由不同类型的无峰牛和肩峰牛经长期选育和杂交而形成的。     

利用胚胎染色体分析法验证PCR鉴定小鼠胚胎性别技术的研究

 本实验用小鼠切割胚制备了73枚囊胚和扩展囊胚的染色体性别鉴定标本，将其中26枚胚胎的活组织样品（含5-10个细胞）进行聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction,简称PCR），以检测Y染色体性别决定区（Sex determining region of the Y,简称SRY）片段的存在，并鉴定胚胎的性别。26个样品中有24个的性别鉴定结果和染色体分析的结果相符，从而证明用PCR鉴定小鼠胚胎性别技术的准确率为92.3%(24/26)。     

性控冻精的DNA损伤及其检测方法

性控冻精的广泛应用给现代畜牧业带来了巨大的利益。性控冻精在制作生产过程会受到高倍稀释、离心、激光照射、染色及冷冻等诸多因素的影响,而使精子DNA的完整性发生变化,结果降低受胎率,同时会对性控后代的遗传稳定性产生影响。精子DNA损伤检测方法有彗星实验（COMET assay,single cell gel electrophoresis SCGE）,末端转移酶介导的d UTP末端标记法（Terminal tranferase d UTP Nick End Labelling TUNEL）,精子染色质结构分析（sperm chromatin structure assay SCSA）和精子染色体扩散实验（Sperm chromatin dispersion SCD）等。本文综述了近年来精子DNA损伤检测方法的使用概况,对比了不同方法对检测结果的优势,为更好的评价性控冻精的质量,确定分离参数,及为生产受精率高、安全性高的性控冻精提供依据。     

PCR法进行胚胎性别鉴定的研究进展

通过胚胎性别鉴定,可控制家畜后代性别比例,获得巨大经济效益。早期胚胎性别鉴定的方法有,核型分析法,H-Y抗原法,X-连接酶检测法和PCR扩增法等。PCR法因其简单、快速、准确等优点,成为目前比较理想的胚胎性别鉴定方法。笔者对性别决定基因、PCR法胚胎性别鉴定的几个关键环节进行了综述,并对其前景进行了展望。     

性控冻精在肉羊胚胎移植中应用效果的研究

为进一步研究肉羊性控精液在胚胎生产上的应用,以萨福克、无角陶赛特纯种肉用绵羊为供体,本地小尾寒羊杂交后代和湖羊为受体,利用子宫角深部输精及一般人工授精等辅助生殖技术使用性控冻精与普通鲜精对两品种肉羊进行人工授精,统计不同品种肉羊的受胎率和可用胚数,对获得的性控胚胎和普通胚胎进行移植,并对比其移植效果。结果表明:萨福克肉羊和无角陶赛特肉羊超排后黄体数差异不明显(P>0.05);普通精液输精所获得的胚胎数极显著高于性控冻精(P<0.01);在受胎率上也做了比较,但差异不显著,受胎率43.2%。由于精液在通过流式细胞仪时,对精子顶体造成一定损伤,因此,无论是子宫角输精或阴道子宫颈输精均影响受精率,但性控精液的推广应用确实可以加速家畜遗传育种速度,缩短育种周期。鉴于此,今后对性控精液的研究重点应该放在精液分离过程中对精子的保护,以减少对精子的损伤。     

奶牛乳房炎大肠杆菌分离株主要免疫原性蛋白纯化

应用奶牛乳房炎大肠杆菌分离株灭活菌苗免疫健康家兔,制备兔抗大肠杆菌高免血清。对该大肠杆菌菌体裂解产物进行SDS-PAGE并进行Westernblot分析,结果该菌株与稀释一定倍数的兔高免血清反应,产生3条特异性带,其中约33ku蛋白为主要免疫原性蛋白。对其进行电洗脱纯化,得到单一条带的目的蛋白。     

制糖副产品饲养奶牛的效应

用蔗髓、糖蜜和酒精废液等制糖副产品及尿素代替部分精料配制成混合精料,对奶牛进行饲养试验。结果表明:试验组和对照组产奶量分别为7666.60kg和7597.40 kg,差异不显著;试验组比对照组节省精料31%;每1kg 试验精料费0.4473元,比对照组0.5655元减少0.1182元,降低精料成本20.9%;试验组每产1kg 牛奶精料费为0.3697元,比对照组0.4705元减少0.1008元,降低成本21.4%;试验组牛奶乳脂率比对照组高0.19%(0.19个百分点),即提高6%。因此用制糖副产品配制的精料可代替常规精料。     

梭子蟹乳化病的间接ELISA诊断

以梭子蟹乳化病的病原菌-溶藻弧菌为抗原,制成免疫血清;利用辣根过氧化酶标记的羊抗兔血清(HRP-IgG)为酶标二抗、建立了检测溶藻弧菌的间接ELISA快速诊断法。结果表明,应用间接ELISA技术检测溶藻弧菌有较高的灵敏度,最低的检测量为104cfu/mL。同时交叉反应表明其具有较高的特异性。人工感染试验48 h后,就能在血淋巴和鳃中检测到溶藻弧菌。应用建立的间接ELISA法进行现场检测,表观有病蟹的阳性检出率为90%,表观健康蟹的阳性检出率为20%,养殖海水中没有阳性检出。     

梭子蟹乳化病的间接ELISA诊断

以梭子蟹乳化病的病原菌-溶藻弧菌为抗原,制成免疫血清;利用辣根过氧化酶标记的羊抗兔血清(HRP-IgG)为酶标二抗、建立了检测溶藻弧菌的间接ELISA快速诊断法。结果表明,应用间接ELISA技术检测溶藻弧菌有较高的灵敏度,最低的检测量为104cfu/mL。同时交叉反应表明其具有较高的特异性。人工感染试验48 h后,就能在血淋巴和鳃中检测到溶藻弧菌。应用建立的间接ELISA法进行现场检测,表观有病蟹的阳性检出率为90%,表观健康蟹的阳性检出率为20%,养殖海水中没有阳性检出。