小鼠H-Y单克隆抗体ELISA检测方法的建立

以纯系 BAL B/ c雄性小鼠脾细胞腹腔注射免疫同系雌性小鼠 9次 ,获得的抗血清经雌、雄鼠脾细胞吸收后用于精子细胞毒性试验 ,测得 H- Y抗血清效价为 1/ 16 0。选取免疫应答最好的雌鼠脾细胞与 SP2 / 0骨髓瘤细胞融合 ,用精子细胞毒性方法筛选效价较高的细胞株制备腹水 ,建立优化的 EL ISA反应条件。优化后的 EL ISA反应条件为 :抗原4℃过夜 ,加 H- Y抗血清 37℃反应 12 0 m in,加 HRP- Ig G 37℃反应 30 min,加 TMB 2 5℃ 30 min。优化后的 EL ISA与常规 EL ISA比较 ,可以明显降低阴性吸光值 ,检测灵敏度从 1/ 32 0上升为 1/ 12 80     

青年母猪排卵数的研究

<正> 太湖猪以性成熟早,产仔多、母性好等优点闻名于世,成为世界上罕见的优良猪种。近年来法国、英国、日本等不少国家对我国的太湖猪十分重视,竞相引种,进行杂交育种试验。法国的杂交试验已初步证明了,太湖猪性成熟早、产仔多的遗传特性。英国遗传学家认为,中国梅山猪是世界上最高产的猪种之     

猪精液抑制素主动免疫诱导黄牛超数排卵的研究

用从猪精液提取的抑制素制品作免疫原对产后２～５个月的２５头母黄牛进行主动免疫。抑制素用福氏完全佐剂乳化后间隔２０天对其进行两次免疫。在发情配种后第１０天对１１头受试牛经直肠触摸卵巢检查黄体数，同时颈静脉采血，采用ＥＬＩＳＡ法检测血清孕酮水平。用直肠触摸黄体数来估测有超排反应的母牛占１８％（２／１１），而通过孕酮水平与排卵数的线性回归关系推算有超排的牛占３６％（４／１１）。结果表明，用猪精液抑制素主动免疫黄牛，可以提高其排卵率。     

猪卵泡卵母细胞体外成熟与冷冻保存

研究了激素、猪卵泡液、不同类型血清对猪卵泡卵母细胞体外成熟的影响 ;比较了卵泡直径小于 2 mm、2～ 5 mm和大于 5 mm的卵母细胞体外成熟能力的差异 ,并对不同发育阶段猪卵母细胞的冷冻保存进行了研究。结果表明 :猪卵母细胞体外培养 4 8h时 ,培养的前 2 4 h培养液中加入激素 ,后 2 4 h去掉激素 ,卵母细胞的 A级成熟率 (5 1.73% )和总成熟率 (83.2 5 % )最高 ,极显著高于前 2 4 h不加激素 ,后 2 4 h添加激素培养的成熟率 (P<0 .0 1) ;也显著高于不含激素的培养液连续培养 4 8h的成熟率 (P<0 .0 5 ) ;但与添加激素连续培养 4 8h的成熟率差异不显著 (P>0 .0 5 )。在体外成熟培养液中 ,添加 10 % (体积分数 ) ECS的成熟率 (72 .86 % )显著高于添加 10 % (体积分数 ) NCS的成熟率(6 2 .2 1% ) (P<0 .0 5 ) ,而添加 10 % p FF则抑制卵母细胞的体外成熟。随着卵泡直径的增大 ,卵母细胞体外成熟能力逐渐增强。采用程序冷冻保存方法 ,成熟卵母细胞的成活率 (35 .5 9% )显著高于培养前 (2 4 .6 4 % )和培养 2 4 h(2 3.36 % ) (P<0 .0 5 )。培养 2 4 h(77.2 2 % )和培养成熟 (72 .81% )的卵母细胞解冻后的形态完整率均显著高于培养前(5 3.2 4 % ) (P<0 .0 5 )     

应用猪精液抑制素主动免疫法诱导黄牛孪生

 2 70头经产母黄牛分成 3组 ,每组 90头 ,分别在产后 13个月用 2mg(Th组 )或 1mg(Tl组 )精液抑制素和福氏完全佐剂进行主动免疫 ,34周后进行加强免疫。加强免疫所用抑制素剂量减半 ,佐剂为福氏不完全剂。另一组牛用不含抑制素生物活性的精液提取物和上述佐剂进行主动免疫和加强免疫 ,用作对照组 (C组 )。母牛发情时 ,间隔 8 12h用冷冻精液进行人工授精。在主动免疫和加强免疫后 812d采集颈静脉血 ,收集血清 ,分别用双扩散凝胶沉淀法和酶联免疫吸附测定法测定抗抑制素抗体的效价。根据记录完整的 2 4 7头牛资料 ,发现Th组 87头母牛中有 73头(83.9% )发情 ,其中 5 1头排单卵 ,19头排双卵。妊娠期末 ,15头产双胎 (孪生 2 6 .3% ,15 / 5 7)。而在T1组 (72头 )和C组 (88头 )中 ,分别只有 4 4头 (6 1.1% )和 5 5头 (6 2 .5 % )母牛发情 :其中排双卵的母牛分别为 4头和 0。妊娠期末 ,孪生率分别为 3.1% (1/ 32 )和 0 (0 / 34)。分析血清抗体水平 ,证明排双卵的母牛血清抗抑制素水平显著高于排单卵和不排卵的母牛 ,排卵数与抗抑制素抗体水平呈正相关 (r=0 .75 0 7,P <0 .0 1)。     

H-Y抗体对小鼠胚胎H-Y抗原表达的研究

BALB/C雄性小鼠脾细胞悬液腹腔注射免疫同系母鼠 ,精子细胞毒性试验筛选抗血清 ,效价高的抗血清分别用于胚胎培养的毒性试验和制备单克隆抗体再辅以间接免疫荧光和PCR对胚胎进行性别鉴别。结果表明 ,直接用H Y抗血清培养的胚胎 ,胚胎退化率达 43 3 % ,与自然性比差异不显著 ;PCR验证间接免疫荧光法鉴定的胚胎性别 ,雄性胚胎准确率为 83 % ,雌性胚胎准确率为 94%。     

猪卵母细胞体外成熟与体外受精的研究

从猪卵巢2～5mm的卵泡中抽取卵母细胞,用含有FCS,BSA-V,PMSG,HCG的TCM-199液和KRB修正液于37-39℃,5%CO_2,5%O_2和90%N_2的湿润环境中成熟培养和体外受精。实验结果表明:培养40小时后,4组卵丘细胞的扩展率分别为82.96%、89.76%、89.54%、85.57%,组间差异不显著(P>0.05)。第一极体放出率分别为16.90%、6.45%、13.64%、18.46%,第2组明显低于其他各组,但不显著(P>0.05)。用体外获能的精子授精,卵裂率分别为25.93%,18.18%,31.03%,27.03%;授精后29、30小时出现2—细胞,44～45小时出现4—细胞,56小时出现8—细胞。     

渗透压与pH值对常温保存山羊精液的影响

本文研究了山羊精液在高倍稀释（１：３０），常温（１３—１５℃）保存条件下，稀释液渗透压与ｐＨ值对精子存活时间的影响。试验选用两种稀释液，渗透压调为较高的３４１和３３９渗压毫克分子浓度与较低的２６３和２８０渗压毫克分子浓度，ｐＨ值分别调为６．５和７．０。结果表明：在渗透压类同的条件下，ｐＨ为６．５，精子总存活时数比ｐＨ为７．０时长（ｐ＜０．０１）。生存指数高（Ｐ＜０．０１）。在ｐＨ值相同的条件下，较高渗透压的稀释液保存效果好。渗透压与ｐＨ值对精子共同作用下，在ｐＨ６．５时，不论渗透压较高或较低，精子活力维持在０．３以上的时数为３０小时左右，而ｐＨ７．０时只有１６小时左右。较低渗透压使精子顶体完整率下降轻快（Ｐ＜０．０１）。     

PMSG和hCG对猪卵母细胞体外成熟的影响

对猪卵母细胞不同发育阶段的激素需要进行了初步探讨。结果表明 :猪卵母细胞体外培养 48h ,前 2 4h在培养液中加入激素 ,后 2 4h不加激素 ,卵母细胞的A级成熟率 (51 73% )和总成熟率 (83 2 5 % )最高 ,极显著高于前 2 4h不加激素 ,后 2 4h添加激素培养的成熟率 (P <0 0 1 ) ;也显著高于不含激素的培养液连续培养 48h的成熟率 (P <0 0 5) ;但与添加激素连续培养 48h组成熟率差异不显著 (P >0 0 5)。     

自然发情和超排小鼠的腔卵泡发育的动态模式比较

对自然发情和超排处理发情小白鼠的有腔卵泡进行观察，超排鼠于hCG注射后不同时间取卵巢作切片，结果发现，自然发情和超排小鼠的卵泡进入有腔卵泡阶段（直径≥265μm）是一个连续的过程，但无论的卵泡被招募（recruitment)（卵泡直径≥265μm）还是由小一级有腔卵泡进入大一级有腔卵泡，其转入的速度并不是恒定的；和自然发情相比，超排可促进卵泡的招募，使招募后的卵泡闭锁大大减少，但招募的数量未见增多。