家兔胚胎细胞核移植的研究

研究改进了兔胚胎细胞核移植的技术体系,并对核移植胚胎的体外培养以及克隆胚胎的体内发育进行了试验。结果表明：卵母细胞去核率为８８．９％（８／９）,重组胚融合率为７６．７％（１７６／２２９）,将融合的重组胚与兔胎儿成纤维细胞共同培养,其２￣４细胞发育率、８￣１６细胞发育率以及桑椹胚和囊胚的发育率分别为６５．７％（２３／３５）、２８．６％（１０／３５）、２２．９％（８／３５）,显著高于“ＴＣＭ－１９９＋１０％ＦＣＳ”系统培养的４３．３％（１３／３０）、２６．７％（８／３０）、１６．７％（５／３０）。１６及３２细胞期卵裂球的重组胚可发育到产仔,将１１１枚重组胚移植给９只同期处理的受体母兔,２只妊娠,其中１只产出２只足月克隆仔兔,１只在产前１周（妊娠２２ｄ）流产。     

影响猪胚冷冻效果的若干因素的研究

屠宰（或手术）采取３￣７日龄猪胚，分别就胚胎不同发育时期，２５℃和－７℃两个冷冻起始温度，甘油、丙二醇和乙二醇３种防冻剂及６％、８％、１０％３种甘油浓度进行冷冻比较。结果表明，冷冻解冻后及解冻后在Ｍ１６＋１０％ＦＣＳ中培养２４小时的胚胎存活率均与胚胎发育时期有关。胚胎存活率以孵化囊胚最高，分别为５８．８％和５２．９％，高于校内发育（２４．４％和１７．１％）或体外培养发育（２１．４％和１７．９％）的     

猪卵子的体外成熟与体外受精研究

从屠宰猪卵巢中取出卵子，在体外培养30小时后卵丘扩散率为70．48％，第一极体释放率15．39％。卵丘层扩散的卵子体外获能的猪精液授精，受精率平均9．56％。将受精卵培养24小时，有51．22％卵子发育到2－细胞期，7．32％发育至4－细胞期。从经超数排卵的猪卵巢中取下3枚A级卵，用体外获能猪精液授精，培养24小时，其中2枚达到2－细胞期，再继续培养48小时，均达到16－细胞期。     

用酶分离小鼠早期胚胎的研究

用酶分离小白鼠２－－细胞、４－－细胞和８－－细胞胚胎，获取单个卵裂球，将其培养在含有牛血清蛋白质的ＣＺＢ培养基微滴内。培养的小白鼠胚胎发育情况有３种：（１）正常发育；（２）泡囊化；（３）不发育。在体外培养条件下２－－细胞单个卵裂球有８６．５％发育成２－－细胞；有３５．１％发育成４－－细胞，有８．１％发育到８－－细胞，有５．４％发育到桑椹胚；４－－细胞胚的单个卵裂球中有８３．３％发育到２－－细胞，３７．５％发育到４－－细胞，１２．５％发育到８－－细胞，８．３％发育到桑椹胚；在８－－细胞胚的单个卵裂球中有４６．７％发育到２－－细胞，２６．７％发育到４－－细胞，１３．３％发育到８－－细胞、６．７％发育到桑椹胚。实验结果表明用酶分离小白鼠早期胚胎，所获卵裂球具有一定的继续发育能力，而且没有透明带也能发育。     

猪卵母细胞的体外成熟

取自猪卵巢含卵丘细胞且胞质均匀的、胞质不均匀和不含卵丘细胞胞质均匀３类卵母细胞，台盘蓝染色的存活率分别为１００％，１０％和４０％，３者差异极显著。Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ４种培养液培养的成熟率分别为１６．２％，６１．５％，５５．２％，４１．５％，差异极显著。Ｅ，Ｃ，Ｆ３种培养液培养的成熟率分别为３５．５％，４７．８％，５２．６％，在Ｅ培养液中加入ＰＭＳＧ和Ｅ＿２能显著地提高成熟率。Ｃ液与卵泡液［加入２×１０￣（－６）ｍｏｌ／（Ｌ·ｓ）ＦＳＨ］培养的成熟率分别为５０％，４４．４％，受精后的卵裂率分别为１６％，１０％，成熟率、卵裂率间均无显著差异。卵母细胞体外成熟培养３６，４０，４４ｈ后授精，其相应的受精率分别为２６．７％，４４．４％，４５．８％；卵裂率分别为０．３０％，２０％；以培养４０，４４ｈ的效果稍好，但三者差异不显著。     

小鼠胚胎切割取样后体外培养发育能力的研究

本文对小鼠胚胎切割取样细胞数量的多少，取样后胚胎在室温中停留时间以及透明带存留与否的体外发育情况进行了研究，目的在于为牛胚胎性别鉴定切割取样时供借鉴和探讨。实验中的胚胎依据切割取样的细胞数分１０个细胞以内和大于１０个细胞以上两个组。其体外培养发育率分别为９５．７％（６７／７０）和７６．２％（３２／４２），两者差异极显著（Ｐ＜０．０１）；其中晚期桑椹胚、早期羹胚、扩展囊胚的体外发育率分别为８７．７％（６４／７３）、８６．２％（２５／２９）、１００％（１０／１０），三者之间差异不显著（Ｐ＞０．０５）；培养前在室温下停留３～７ｈ和９ｈ的体外培养发育率分别为９４．８％（７３／７７）、５７．１％（２０／３５），两者差异极显著（Ｐ＜０．０１）；胚胎取样后透明带存留和脱失的体外培养发育率分别为８７．９％（５１／５８）和８３．３％（４５／５４），两者差异不显著（Ｐ＞０．０５）。     

家兔早期胚胎体外培养和移植研究

用ＦＳＨ，ＰＭＳＧ，ＨＣＧ和ＩＣＩ－８０９９６对２０只家兔进行超数排卵，平均每只排卵１９．１枚，回收胚胎１３．５枚。超排卵数和卵子回收数ＦＳＨ分别为２６．３枚和２１．１５枚，ＰＭＳＧ为２２枚和１３．５。将正常的２５枚１细胞，７枚２细胞和３２枚４细胞期胚胎在ＴＣＭ－１９９培养液，５％ＣＯ２和 ３８．５℃环境中培养６０－７ ０ｈ，６３．１７％的胚胎可发育至囊胚移植至５只体兔后，产出仔兔１３只。     

体外生产的牛胚胎在不同发育期的性比率

本研究旨在证实牛体外培养的雄性胚胎生长发育是否快于雌性胚胎。胚胎的性别鉴定采用多聚酶链式反应（ＰＣＲ）技术。在体外受精的第５天，胚胎根据发育期划分为三个组：１６细胞期，多于１６细胞期和桑椹期。在３个组中，雄性胚胎所占百分率分别是３２％，５３％和６３％。在体外受精的第７天，胚胎根据发育期划分为４个组：桑椹期、早期囊胚期、囊胚期和扩张囊胚期。在性别鉴定后，４个组中雄性胚胎所占百分率分别是２８％，３８％，６０％和７０％。结果表明：牛早期胚胎在体外培养条件下，雄性发育快于雌性。     

超速冷冻8—细胞鼠胚

用３．５Ｍ和２．５Ｍ ＤＭＳＯ作冷冻保护剂进行超速冷冻８－细胞鼠胚。用前者作保护剂的鼠胚，无论在体外培养和体内发育的情况都好于后者。前者中的８－细胞鼠胚解冻后的存活率为７８．９％；存活胚胎体外发育到囊胚的比率为８３．４％，体内附植率为６３．９％，胎儿形成率为４３．２％。实验证明，超速冷冻保护存胚胎是一种省时，省力，省钱的好方法。     

猪卵母细胞的体外成熟

取自猪卵巢含卵丘细胞且胞质均匀的，胞质不均匀和不含卵丘细胞质均匀３类卵母细胞，台盘蓝染色的存活率分别为１００％，１０％和４０％，３差异极显。Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ４种培养液养的成熟率分别为１６．２％，６１．５％，５５．２％，４１．５％，差异极显。Ｅ，ＣＦ３种培养液培养的成熟率分别为３５．５％，４７．８％，５２．６％，在Ｅ培养液中加入ＰＭＳＧ和Ｅ２能显地提高成熟率。Ｃ液与卵泡液（加入２×１０＾－＾６     

木霉菌株NF9和TC3对芋艿根腐病病原菌的体外拮抗作用

测定了筛选木霉菌株ＮＦ９和ＴＣ３对喀麦隆芋艿根腐病病原真菌的体外拮抗作用，在对峙培养中，ＮＦ９和ＴＣ３对群结腐霉，立枯丝核菌和茄镰孢的拮抗系数分别为１－２，１，１。在赛珞玢分层培养中，ＮＦ９对Ｐｍ，Ｒｓ，Ｆｓ的菌丝生抑制率分别为１００％，９２．．１％及４６．４％，光学显微镜下观察到ＮＦ９对Ｒｓ菌丝缠绕和穿透。在不同温度（１０－３５℃），不同酸度（ｐＨ３－９）条件下，在ＰＤＡ培养基上，ＮＦ９的菌丝生     

β—转换生长因子对牛体外受精卵体外发育的影响

本研究主要检测ＴＧＦ－β对牛早期胚胎体外发育和移植后的成活率的影响，在试验１和试验２，添加０．３－７．０ｎｇ／ｍＬ的ＴＧＦ－β至无论是复杂培养液还是各成分已知的简单培养液中，囊胚中内细胞团细胞都不同程度地增长，比对照组的囊胚多０．５－１．０倍；此外在含有３．０－５．０ｎｇ／ｍＬ的ＴＧＦ－β的培养液中的囊胚，其孵化率显著地高于对照组。     

附植前小鼠胚胎体外培养中外源软脂酸的掺入,分布和氧化

以体外培养的１－细胞期、２－细胞期、－８细胞期、桑椹期和囊胚期小鼠胚胎从Ｍ１６培养液中掺入放射性标记软脂酸,合成胚胎脂以及氧化作用分别进行系统试验。结果证明：不同细胞期鼠胚胎在体外培养过程中程均以捅入外源软脂酸;除１－细胞期外,其余细胞期胚胎掺入量均高高,２－细胞期和桑甚期最高水平。     

克服小鼠早期胚胎体外培养发育阻滞的研究

为探讨不同培养基及共培养对克服小鼠早期胚胎体外发育阻滞的影响,用不同成分组成的5种常用培养液对小鼠早期胚胎进行体外培养,后以KSOM作为基础培养基,KSOMFBS为对照,分别与小鼠输卵管上皮细胞(MOEC)和卵丘细胞(CC)进行共培养,观察从2细胞发育到4细胞的胚胎数和囊胚数的变化。结果发现5种培养液中从2-细胞发育到4-细胞的胚胎率为30.5%~43.5%,差异不显著。KSOM组囊胚率为40.9%,显著高于其他各组(27.9%~30.0%)。共培养后,各组中克服发育阻滞的胚胎数和囊胚数均有显著提高,其中添加胎牛血清组4细胞胚胎数和囊胚数显著高于不添加组,输卵管上皮细胞组显著高于卵丘细胞组。结果显示共培养对克服小鼠2-细胞发育阻滞作用明显,添加胎牛血清效果明显好于不添加,输卵管上皮细胞共培养效果好于卵丘细胞。     

体外成熟猪卵母细胞的体外受精研究

实验采用体外成熟的猪卵巢卵母细胞，将鲜精以前培养结合咖非因法获能后进行ＩＶＦ实验．体外成熟卵ＩＶＦ后的卵裂率为２４．７％～３８．４％，与目前文献报道的近似；授精时精子浓度为２×１０５／ｍＬ，１×１０６／ｍＬ和５×１０６／ｍＬ体外受精后的卵裂率分别为４０．８％（８２／２０１）．４５％（８５／１８９）和３０．５％（５０／１６４）．前二者无显著差异，但都与最后一组差异显著．我们认为，在本实验条件下，体外受精时适当的精子浓度要比目前常用的１×１０６／ｍＬ低．我们将肝素结合咖啡因的精子在能方法与前培养结合咖啡因法进行了比较，卵裂率分别为１０．７％（９／８４）和４０％（３２／８０），前者虽然在牛体受精实验中很成功．但在猪效果差．将体外成熟体外受精卵移入同步的受体猪输卵管后．有一头母猪成功地产下了５只“试管猪’，存活３只．     

猪胚胎细胞核移植

选用杜洛克２￣１６细胞期胚胎卵裂球作核供体，湖北白猪卵母细胞作核受体，通过显微操作和电融合法构成重组胚。体外培养时，以融合前２ｈ、１ｈ激活及融合前不激活的卵母细胞做核受体的重组胚，发育率分别为６４．６％，５５．３％和３４．５％。     

对昆明白杂种鼠胚胎体外培养的实验研究──2细胞期至卵圆筒期

利用ＣＭＲＬ—１０６６和国产其它药品对昆明白杂种小鼠２—细胞期的胚胎，进行了体外培养试脸，成功地将２—细胞胚胎在体外培养条体下，使之生长发育到卵圆筒阶段。从２—细胞期开始计算，囊胚形成率为７０％，卵化率为３０％，附植率为２％，卵圆筒期胚胎形成率为１％。试验发现，把２—细胞期小鼠胚胎体外培养到卵圆筒期比体外发育到同阶段推迟１～２天，此卵圆筒期胚胎的形成率与国外报道的２４％相比仍然很低，其原因估计可能为：１）小鼠的品种；２）国产药物的纯度；３）ＣＯ２条件不同而造成。     

应用体外法评定科威418的营养价值

科威４１８是作者通过特殊工艺研制而成的牛羊高蛋白复合添加剂，其中含有尿素、营养保护剂、酶及多种微量元素等。体外试验表明，以豆饼、尿素及科威４１８作为氮素饲料时，培养３ｈ的培养液中ＮＨ＿３Ｎ浓度依次为１４．５，２８．７及２２．３ｍｇ·（１００ｍＬ）￣（－１）（Ｐ＜０．０１）；培养１２ｈ的ＮＨ＿３Ｎ浓度依次为７．３，１１．４及１３．３ｍｇ·（１００ｍＬ）￣（－１）（Ｐ＜０．０５）；真蛋白氮浓度依次为３８．６，２９．８及３５．４ｍｇ·（１００ｍＬ）￣（－１）（Ｐ＜０．０５）；基质风干物消化率依次为５４．９７％，６１．４４％及６４．９１％（Ｐ＜０．０１）。     

不同培养液对昆明小鼠体外受精率及早期胚胎体外发育的影响

在TYH受精液中添加促卵泡素（FSH）和苯甲酸雌二醇（E2），检测不同浓度的FSH和E2对昆明小鼠的体外受精率的影响；检测在M16、CZB两种培养液中添加胎牛血清（FCS）与否对昆明小鼠早期胚胎体外发育的影响．结果表明：在．rYH中添加1．0IU／mL FSH，受精率和2-细胞胚率显著高于对照组；在TYH中添加0．1μg／mL E2，受精率和2-细胞胚率也显著高于对照组．在CZB中添加体积分数为10％FCS，可显著减少2一细胞期体外发育阻断，并显著提高小鼠胚胎体外发育的囊胚率，可见，以TYH添加1．0IU／mL FSH和0．1μg／mL E2为受精液，以含体积分数为10％FCS的CZB为胚胎培养液，小鼠胚胎可获得较高的囊胚率．葡萄糖并不是小鼠胚胎形成囊胚所必需的．     

猪输卵管上皮细胞对小鼠早期胚胎体外发育的影响

研究了不同生殖时期猪输卵管上皮细胞对小鼠早期胚胎体外发育的影响,以此建立了适于早期小鼠转基因胚胎体外培养的猪输卵管上皮细胞共培养体系,并用PCR法对体外培养发育到不同阶段的小鼠转基因胚胎进行了外源基因整合检测。结果表明,在受孕初期的猪输卵管上皮细胞(无论是原代还是传代细胞)上,培养的小鼠1-细胞期胚胎的囊胚率显著高于发情间期的猪输卵管上皮细胞(P<0.01);在相同生殖时期猪输卵管原代和传代上皮细胞上,培养的小鼠1-细胞期胚胎的囊胚率差异不显著;在转基因胚胎不同发育阶段,PCR检测呈阳性的胚胎比率分别为:2-细胞期为96%,4-细胞期为63%,8-细胞期为43%,囊胚期为19%。由此可见,受孕初期的猪输卵管上皮细胞可促进与之体外共培养的小鼠早期胚胎的发育;随着早期小鼠转基因胚胎的发育,PCR检测呈阳性的转基因胚胎的比率逐渐降低。